一、克隆人类胚胎:可怕的第一步（论文文献综述）
李建军[1]（2021）在《前沿生物技术领域安全风险治理的历史经验和重要启示》文中指出包括基因编辑技术在内的前沿生物技术突破,在农业和医学等事关人类发展重大利益的关键领域预示着颠覆性革命的同时,也潜存着严重的重大安全风险乃至"生存性风险",迫切需要我们尽快构建负责任、可信赖和可持续的生物安全风险治理体系,以有效化解前沿生物技术创新可能引发的多种安全风险和治理危机,促进前沿生物技术负责任、高质量和可持续地发展。重组DNA实验、农业转基因技术创新和人类胚胎基因编辑研究安全风险治理形成的宝贵经验和历史教训,如对相关重大安全风险进行"预警性思考"、加强安全风险的社会沟通和增加社会互信,以及完善机构伦理审查机制等,对我们今天讨论前沿生物技术领域的安全风险治理,依然具有建设性的参考价值。
初子琪[2]（2021）在《论生命科技研究与应用的宪法边界》文中提出
王倩倩[3]（2021）在《人类基因编辑技术应用的立法规制研究》文中研究表明
郑越[4]（2021）在《人体基因编辑的民法规制研究》文中进行了进一步梳理
杨蕾[5]（2021）在《国际法视野下人体基因编辑的治理 ——以“基因编辑婴儿”事件为视角》文中研究表明
李玉蓉[6]（2021）在《中国新生代科幻小说的后人类书写》文中研究表明
陈方齐[7]（2021）在《刘慈欣科幻小说中的种族形象研究》文中研究指明
陈凯[8]（2021）在《miR-876调控POSTN促进肝癌进展和纤维化的机制研究》文中研究说明一、研究背景肝细胞性肝癌（HCC）是世界范围内最常见恶性肿瘤之一,目前在最致命肿瘤中致死率排名第二。在过去的几十年,针对肝癌已经有了众多治疗手段,如精准的肝段切除术,肝移植术,肝动脉栓塞化疗及肝癌射频消融术等,但是肝癌患者的预后仍然不令人满意,据统计,肝癌患者5年总生存率低于20%。肝癌起病隐匿,肿瘤进展快,容易复发和肝内转移都是导致肝癌预后较差的可能原因。因此,探究肝癌进展,转移的分子学机制有利于寻找潜在的肝癌治疗分子靶点,开发可能的早期肝癌诊断标志物对肝癌的系统治疗非常重要。微小RNA（miRNA）是以由一类进化保守的,由约22个核苷酸组成的非编码小RNA,微小RNA可结合在靶基因信使RNA（m RNA）的3?端的非翻译区（UTR区）通过降解信使RNA或抑制信使RNA翻译的方式发挥转录后调控作用。研究显示微小RNA几乎参与了肿瘤细胞发生发展的全部过程,包括细胞的干性,肿瘤发生,细胞的增殖,细胞的凋亡,细胞的迁移和侵袭,细胞的转移等等。也有越来越多的研究显示各种肿瘤中均有不同微小RNA的异常表达,包括肝癌。例如,miR-876被发现在胆管癌（CCA）中表达降低,并能通过抑制BCL-XL的表达诱导细胞的增殖;miR-589被发现在肝细胞性肝癌中表达增高并能通过STAT3信号通路来促进细胞的干性和化疗抵抗。然而,在肝细胞性肝癌中异常表达和对诊断或者预后有指示作用的miRNA仍然缺乏有待进一步研究。骨膜蛋白（POSTN）,也称为成骨细胞特异性因子2,是一大小为93.3k Da的细胞外基质（ECM）蛋白。POSTN能通过和众多其他蛋白如纤维结合蛋白,胶原蛋白及腱生蛋白等互相联系进而对细胞外基质进行改造。POSTN对胶原纤维的发生,细胞粘附,细胞迁移和上皮间质转换等都有重要作用。目前研究发现多种肿瘤中亦有POSTN的异常表达,包括头颈部肿瘤,肺癌,神经纤维瘤,乳腺癌,结直肠肿瘤及肝细胞性肝癌等,对肿瘤细胞的生存,上皮间质转换,血管生成和肿瘤微环境的形成都有重要作用。例如:研究发现胰腺癌细胞能刺激间质细胞分泌POSTN,进而促进肿瘤基质成绩和上皮间质转化进而促进肿瘤进展。然后,在肝细胞性肝癌中POSTN的表达及调控机制的研究尚少,有待进一步研究。在本文中,我们通过对TCGA数据库中异常表达的miRNA进行筛选,鉴定出了一异常表达的miRNA,即miR-876。我们还进一步探求了其细胞功能和对下游靶基因的调节机制。我们还在众多临床肝细胞性肝癌的临床组织标本中监测了miR-876和其靶基因POSTN的表达,分析了他们的表达和肝细胞性肝癌患者的临床病理参数和预后的关系。我们的研究提示miR-876及POSTN在肝细胞性肝癌中异常表达,可能作为一潜在的诊断性分子标志物和治疗靶点。二、研究方法1.分析49对肝癌及对应的癌旁样本的TCGA数据库,分析异常表达的miRNA,筛选出表达差异倍数最高的前20个微小RNA。2.收集了从2006年到2010年在西南医院肝胆科因患原发性肝细胞性肝癌而行原发性肝癌切除术的共计127例患者的组织样本,本研究说包含的所有病人术前均未接收放疗或者化疗。所有患者术后均定期性影像学（即超声或CT）即血液AFP检测。本研究团队及西南医院临床研究中心完成患者的预后随访,随访为结合到我院复查情况,定期（每2-3月）电话随访。3.采用实时定量PCR的方法检测了肝癌组织样本中miR-876和POSTN的表达水平;采用免疫组化（IHC）方法在原发性肝细胞性肝癌组织样本中检测了样本中POSTN及EMT标志物（E钙粘蛋白,N钙粘蛋白,波形蛋白）的表达情况,并在肝癌合并肝硬化样本中检测了POSTN的表达。4.采用Kaplan-Meier曲线分析（单因素）和Cox回归（多因素）方法分析了影响HCC患者预后的危险因素及独立危险因素,并进一步分析了miR-876和POSTN共表达对HCC预后的影响。5.采用了生物信息学及双荧光素酶报告基因实验研究了miR-876可能的调控靶基因,并进一步采用实时定量PCR及Western Blotting（WB）方法进行验证。6.Mi R-876的具体体内生物学行为在裸鼠实验中进行检测,最终成瘤效果以活体成像方式进行检测验证。7.采用WB方法分析了miR-876的表达对EMT标志物的影响,并在人肝星状细胞系LX-2中检测了纤维化蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,胶原蛋白-I的表达。采用transwell小室侵袭实验研究了miR-876对肝癌细胞系的侵袭能力的影响。三、研究结果1.通过对49对肝癌患者的TCGA数据库进行分析,我们筛选出了表达差异倍数排名前20的高表达及低表达miRNA,进一步筛选鉴定出miR-876。2.我们发现miR-876在肝癌细胞系及肝癌组织中低表达。首先,我们发现miR-876在人正常肝细胞系L02中表达高,而在肝癌细胞系SMMC-7721,Hep G2,Huh-7及HCC-LM3中表达较低;接下来我们在50对肝癌及癌旁样本中检测了miR-876的表达,发现miR-876在肝癌组织/癌旁组织的比率62%有降低,16%变化不明显,而仅有22%表达升高。3.miR-876的低表达和肝硬化、癌栓及肝癌TNM分期相关。我们在127例HCC组织样本中检测了miR-876的表达,分析了其表达水平和HCC患者临床病理参数的相关性。发现miR-876的表达和肝硬化（P=0.026）、肝癌癌栓形成（P=0.031）及TNM分期（P=0.021）相关。而和其他病理参数,如患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数量、乙肝、AFP水平、肝Child分级未发现显着相关性。我们还进一步在肝硬化及癌栓患者中检测了miR-876的表达水平,发现miR-876在肝硬化组织样本中表达较非肝硬化患者显着低（P=0.0294）,而其在有肝癌癌栓患者中表达亦显着低（P=0.0367）。4.miR-876抑制细胞侵袭、EMT及细胞纤维化。我们通过构建了miR-876过表达及干扰细胞株,通过transwell细胞侵袭实验发现过表达miR-876的肝癌细胞侵袭力减弱,而干扰miR-876后侵袭力增强,进一步通过WB实验发现过表达miR-876后N-钙粘蛋白及波形蛋白表达减弱,而干扰miR-876后E-钙粘蛋白表达亦减弱。在人星状细胞系LX-2中干扰miR-876表达后发现α-SMA及胶原蛋白-I表达减弱。5.miR-876靶向POSTN,并抑制其表达。我们通过生物信息学分析发现POSTN的3?UTR存在2个能与miR-876种子区结合的序列,进一步双荧光素酶报告基因实验发现野生型p GL3 POSTN荧光素酶质粒和miR-876共转染入293细胞后其萤火虫荧光信号/海肾荧光素酶荧光信号比值显着性降低,进一步WB实验证实当干扰miR-876后HCC细胞POSTN表达升高,而过表达组POSTN显着降低。我们进一步在127例肝癌临床组织标本中同时检测了miR-876和POSTN的表达,发现两者表达呈显着负相关,R值为-0.477,相关线性方程为y=-0.486x+0.394。6.miR-876通过POSTN抑制EMT及细胞纤维化。首先,我们发现过表达POSTN的肝癌细胞侵袭力增强,并促进了EMT标志物及纤维化标志物的表达。其次,我们在过表达POSTN的基础上转染了miR-876,发现共转染miR-876后抵消了侵袭力增加及EMT及纤维化标志物蛋白的表达。7.miR-876在体内动物实验下减弱HCC细胞肿瘤成瘤能力及抑制肿瘤进展。HCC细胞其miR-876过表达的HCC细胞被注入裸鼠肝包膜下,进行动物实验,1月后行活体成像检测,我们发现对照组（无干预的HCC细胞）成瘤数量多,活体成像荧光强度强,而实验组行miR-876过表达后,裸鼠原位肝脏成瘤明显减少,活体检测荧光信号弱,表明在体内实验条件下,miR-876能抑制HCC的成瘤及肿瘤进展。8.POSTN和肝组织EMT及肝硬化相关。我们进一步在127例肝癌组织中检测了POSTN的表达,发现同miR-876类似,POSTN表达和肿瘤数量、肝硬化、肝癌癌栓形成及TNM分期相关,而和其他临床标识物未发现明显相关性,进一步非参数检验验证了肝硬化或肿瘤癌栓组HCC患者的POSTN表达明显增高。IHC实验发现POSTN主要表达与肝癌间质,部分肝癌细胞亦有表达,POSTN高表达的样本N钙粘蛋白及波形蛋白表达增高,而E钙粘蛋白表达降低。而在肝癌伴肝硬化标本中发现POSTN亦有强表达。9.miR-876和POSTN和肝癌患者术后预后相关。进一步KM单因素生存分析发现肿瘤大小（P=0.037）、肝硬化（P=0.041）、肝癌癌栓状态（P=<0.01）、TNM分期（P=0.001）、miR-876低表达（P=0.022）及POSTN高表达（P=0.012）均是影响HCC患者预后的危险因素,多因素回归分析发现肝癌癌栓（风险比=2.530,95%CI区间=1.433-4.468,P=0.001）及POSTN的表达（风险比=1.717,95%CI区间=1.008-2.926,P=0.047）是影响肝癌预后的独立危险因素。进一步共表达分析提示miR-876低表达和POSTN高表达的HCC患者预后较之于miR-876低表达和POSTN高表达更差。四、研究结论综上所述,我们从公开的TCGA数据库中鉴定出了肝癌中一显着性低表达的miRNA,即miR-876。并探索了其对细胞的功能,即能抑制细胞侵袭,EMT和纤维化。而miR-876这些功能是通过调控POSTN的表达实现的。miR-876在体内动物实验下能抑制肝癌的成瘤及进展;我们还在众多肝癌临床标本中从m RNA及蛋白水平证明了miR-876和POSTN的异常表达和肝癌的EMT水平,纤维化水平及进展相关,而miR-876和POSTN的异常表达和HCC的预后相关,而联合miR-876和POSTN检测可能更好预测HCC的预后以及作为潜在的治疗靶点。
丁健[9]（2021）在《GEFS+的致病基因验证和海马MRS变化与智力水平研究》文中认为遗传性癫痫伴热性惊厥附加症（Genetic epilepsy with febrile seizures plus,GEFS+）是以家系为整体做出诊断的癫痫综合征。目前研究表明,GEFS+表现为常染色体显性遗传的特性。迄今为止,虽然有数量不少的GEFS+家系被研究报道,但是在这些被报道的家系中存在基因突变的家系比例不到20%。GEFS+的致病基因及发病机制并未得到阐明。本研究前期对收集到的GEFS+家系成员进行了致病基因的筛查,在一个家系发现存在着编码钾离子通道β亚基的KCNAB3基因的杂合错义突变c.773A>G（p.H258R）,该基因的位点突变既往在GEFS+家系中未见报道,基因致病性的评估表明突变对蛋白功能的影响为可能致病。我们推测KCNAB3基因可能是中国人群GEFS+的新的致病基因。本研究拟对KCNAB3基因的突变进行细胞功能学的验证,并应用磁共振波谱（Magnetic resonance spectroscopy,MRS）对GEFS+患儿海马进行功能检测以及应用韦氏智力评估工具对患儿进行智力评估。探讨GEFS+的发病机制并了解GEFS+患儿海马及认知功能是否受影响,为GEFS+的病因、预后等研究提供新的理论依据。研究对象和方法对象:收集2016年01月～2019年12月诊断为GEFS+的家系30个。方法:对KCNAB3基因的杂合错义突变c.773A>G（p.H258R）位点构建慢病毒载体质粒,使用293Ta细胞进行慢病毒包装,将重组慢病毒质粒感染人类胚胎肾细胞293（HEK293）,使用全细胞膜片钳技术进行细胞功能学验证。对30个GEFS+家系先证者患儿进行海马1H-MRS波谱值以及智商检测,与对照组比较。结果1.转染野生型KCNA1重组慢病毒质粒HEK293细胞的钾离子电流是不失活的电流。转染野生型KCNA1+野生型KCNAB3重组慢病毒质粒HEK293细胞的钾离子电流出现失活特性。转染野生型KCNA1+突变型KCNAB3重组慢病毒质粒HEK293细胞的钾离子电流失活特性更明显。2.野生型KCNA1组电流密度为 59.674±45.053 pA/pF（n=12）,野生型 KCNA1+野生型KCNAB3组电流密度为35.485±28.695pA/pF（n=11）,野生型KCNA1+突变型KCNAB3组电流密度为22.607±19.473 pA/pF（n=11）,三组比较差异有统计学意义（P<0.05）。3.GEFS+患儿与对照组双侧海马NAA/Cr、Cho/Cr、NAA/（Cho+Cr）数值比较,差异无显着统计学意义。4.GEFS+患儿与对照组智力等级分布比较无显着差异性（P>0.05）。5.GEFS+患儿的言语智商（VIQ）及总智商（FIQ）均低于对照组,存在显着性差异（P<0.05）。操作智商（PIQ）低于对照组,但两者之间无显着性差异（P>0.05）。结论1.KCNAB3基因突变可以加速钾离子通道失活、抑制钾离子电流,提示突变可能提高神经元兴奋性,促进癫痫或惊厥的发作。2.KCNAB3基因可能是中国人群GEFS+新的致病基因。3.本研究中GEFS+患儿的海马MRS改变不明显。4.本研究中GEFS+患儿的言语智商（VIQ）及总智商（FIQ）低于正常儿童,而智力等级分布及操作智商（PIQ）与正常儿童之间无差异。
刘素可[10]（2021）在《异噬时序调控胞内沙门氏菌繁殖的机制初探》文中研究指明鼠伤寒沙门氏菌（S.Typhimurium）是一种能够在宿主细胞内生存的革兰氏阴性病原体,可通过食物污染引起人类胃肠道感染甚至死亡。沙门氏菌侵染宿主细胞后,可导致宿主细胞质膜内陷,形成沙门氏菌内含小泡（Salmonella-containing vacuole,SCV）,沙门氏菌能够在SCV中生存并繁殖;同时,部分沙门氏菌能够从破溃的SCV中逃逸出来,游离于宿主细胞胞浆中,因其繁殖速度快,被称为超级繁殖菌（Hyper-replication）。细胞异噬最初被发现能够清除胞内沙门氏菌,属于宿主细胞免疫的一部分,随着研究的不断深入,异噬能帮助胞内沙门氏菌的繁殖、维持SCV结构完整性,但是迄今为止对于异噬的研究都停留在两种胞内菌混合计数的基础上,难以对沙门氏菌感染过程中异噬的功能进行更加精细而准确的阐述。本研究首先采用酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）结合平板计数法定量沙门氏菌与anti-Salmonella抗体的结合量与结合率,通过抗原-抗体的特异性结合明确1:500的anti-Salmonella抗体定量结合1700左右的沙门氏菌,且结合率在70%左右。通过生物素-链霉亲合素放大的酶联免疫吸附法（biotin-streptavidin-amplified enzyme-linked immunosorbent assay,BA-ELISA）结合平板计数法定量沙门氏菌与OD450nm之间的对应关系,lg（number of Salmonella）和lgOD450nm呈线性正相关,能够快速且准确的计算出酶标板内抗体所结合的沙门氏菌的总数,完善了胞内沙门氏菌计数方法。为进一步对细胞内游离沙门氏菌和SCV包被沙门氏菌进行分离和定量,明确胞内游离沙门氏菌与SCV包被沙门氏菌的繁殖趋势,本研究以人肠上皮细胞Henle-407和成纤维细胞MEF作为模型,在沙门氏菌感染不同时间段,匀浆器破碎细胞获得胞内沙门氏菌,通过BA-ELISA分离SCV包被沙门氏菌和胞质游离沙门氏菌。Henle-407细胞内SCV包被沙门氏菌的占比从70%（2h）左右降至23%（16h）左右,胞质游离沙门氏菌从22%（2h）左右增至65%（16h）左右;MEF细胞细胞质内沙门氏菌并未随着感染时间的延长而无限繁殖,仅占胞内总沙门氏菌的20%左右,而SCV一直是MEF细胞内沙门氏菌存在的主要形式,占比在60%左右。进一步证明该方法对于SCV和胞质游离沙门氏菌的分离是切实可行的。为了探究异噬对胞内沙门氏菌繁殖的影响,从两个方向同时进行验证:其一,采用慢病毒系统构建稳定敲低Atg5基因的Henle-407细胞系;其二,以自噬抑制剂3-MA抑制异噬,以未经处理的Henle-407为对照,对细胞内总沙门氏菌、SCV包被沙门氏菌和细胞质内沙门氏菌进行统计分析。在异噬被抑制的情况下,胞内总沙门氏菌呈现显着降低的繁殖趋势,胞质沙门氏菌的含量和占比均显着性降低,SCV内沙门氏菌也呈现下降的趋势,但一直是沙门氏菌在宿主细胞内的主要存活形式,表明异噬很有可能对胞质沙门氏菌的繁殖提供了帮助,这进一步提高我们对沙门氏菌致病机制的认识,为沙门氏菌感染的药物治疗寻找新的靶标,同时为沙门氏菌病的防治提供更全面的见解。
二、克隆人类胚胎:可怕的第一步（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、克隆人类胚胎:可怕的第一步（论文提纲范文）
（1）前沿生物技术领域安全风险治理的历史经验和重要启示（论文提纲范文）
| 一、重组DNA技术安全风险治理的历史经验 |
| 二、转基因农业生物技术创新安全风险治理的历史经验 |
| 三、基因编辑婴儿试验引发的生物安全风险治理难题 |
| 四、结论：对前沿生物技术领域安全风险治理的重要启示 |
（8）miR-876调控POSTN促进肝癌进展和纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 HCC中抑癌miR-876从TCGA数据库的筛选鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 miR-876在HCC细胞及组织中低表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 miR-876 的异常表达和HCC进展及纤维化相关 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 miR-876 抑制HCC的 EMT及纤维化 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 miR-876 靶向调控POSTN |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 miR-876 通过POSTN抑制HCC的 EMT及纤维化 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.3 讨论 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 POSTN高表达和HCC组织EMT及肝硬化相关 |
| 8.1 材料与方法 |
| 8.2 结果 |
| 8.3 讨论 |
| 8.4 小结 |
| 第九章 miR-876及POSTN的异常表达和HCC预后相关 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.2 结果 |
| 9.3 讨论 |
| 9.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 骨膜蛋白(POSTN)的结构功能及其在肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（9）GEFS+的致病基因验证和海马MRS变化与智力水平研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 遗传性癫痫伴热性惊厥附加症致病基因的验证 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 基因异常与癫痫 |
| 1.2 遗传性癫痫伴热性惊厥附加症的概念 |
| 1.3 GEFS~+的致病原理 |
| 1.4 GEFS~+的相关的基因 |
| 1.4.1 编码电压门控性钠离子通道亚基的基因 |
| 1.4.2 编码配体门控性氯离子通道GABA＿A亚基的基因 |
| 1.5 钾离子通道 |
| 1.5.1 Kv通道 |
| 1.5.2 内向整流通道 |
| 第二章 研究对象 |
| 第三章 试剂和仪器 |
| 3.1 主要试剂 |
| 3.2 主要试剂盒 |
| 3.3 主要设备和仪器 |
| 3.4 相关溶液配方 |
| 3.5 生物信息途径及主要软件 |
| 第四章 实验方法 |
| 4.1 质粒构建 |
| 4.1.1 载体的线性化及infusion反应 |
| 4.1.2 目的片段和载体的连接--Fast-Fusion~(TM)反应 |
| 4.1.3 转化 |
| 4.1.4 PCR法筛选重组克隆 |
| 4.1.5 质粒DNA酶切 |
| 4.2 制备慢病毒 |
| 4.2.1 培养包装细胞 |
| 4.2.2 制备DNA-EndoFectin转染复合物 |
| 4.2.3 转染包装细胞 |
| 4.2.4 收获慢病毒颗粒 |
| 4.3 慢病毒滴度检验 |
| 4.4 转染目的细胞 |
| 4.5 基因表达检测 |
| 4.5.1 RT-PCR检测 |
| 4.5.2 荧光显微镜检测 |
| 4.6 膜片钳检测 |
| 4.7 统计学分析 |
| 第五章 研究结果 |
| 5.1 KCNAB3基因突变家系资料 |
| 5.2 突变型质粒酶切鉴定 |
| 5.3 慢病毒滴度检验(荧光法) |
| 5.4 HEK293细胞的转染结果检测 |
| 5.4.1 RT-PCR检测结果 |
| 5.4.2 荧光显微镜检测 |
| 5.5 膜片钳全细胞记录检测结果 |
| 5.5.1 KCNAB3基因突变对电压依赖钾通道动力学的影响 |
| 5.5.2 电流密度的比较 |
| 第六章 讨论 |
| 6.1 电压依赖性钾离子通道 |
| 6.2 KCNAB3基因 |
| 第七章 结论 |
| 第二部分 遗传性癫痫伴热性惊厥附加症患儿海马MRS变化与智力水平研究 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 GEFS~+与海马硬化的关系 |
| 1.2 海马的结构与功能 |
| 1.3 磁共振波谱(Magnetic Resonance Spectroscopy, MRS) |
| 1.4 癫痫与智力低下 |
| 1.4.1 癫痫发作与智力低下 |
| 1.4.2 癫痫持续状态与智力低下 |
| 1.4.3 热性惊厥与智力低下 |
| 第二章 研究对象及方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 试验组 |
| 2.1.2 对照组 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 视频脑电图监测 |
| 2.2.2 头颅MRI平扫+MRS检查 |
| 2.2.3 海马硬化诊断标准 |
| 2.2.4 智力测试 |
| 2.3 统计学方法 |
| 第三章 研究结果 |
| 3.1 GEFS~+家系临床表型分析 |
| 3.2 GEFS~+家系先证者的临床资料 |
| 3.3 GEFS~+组与对照组性别及年龄对比分析 |
| 3.4 GEFS~+组与对照组左右两侧海马波谱值对比分析 |
| 3.5 GEFS~+患儿组与对照组双侧海马波谱平均值对比分析 |
| 3.6 GEFS~+患儿组与对照组智力评估对比分析 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 GEFS~+患儿海马MRS变化分析 |
| 4.2 GEFS~+患儿智力测试分析 |
| 4.3 GEFS~+患儿海马损伤与智力关系分析 |
| 第五章 结论 |
| 创新点和不足 |
| 参考文献 |
| 综述 遗传性癫痫伴热性惊厥附加症基因研究现状 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（10）异噬时序调控胞内沙门氏菌繁殖的机制初探（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 课题研究背景 |
| 1.1.1 沙门氏菌的危害 |
| 1.1.2 沙门氏菌在宿主细胞内的表型 |
| 1.1.3 异噬的研究进展 |
| 1.1.4 沙门氏菌介导宿主细胞异噬的调控 |
| 1.1.5 异噬对胞内沙门氏菌的影响 |
| 1.2 课题的研究重点 |
| 1.2.1 本课题的研究意义 |
| 1.2.2 本课题的技术路线 |
| 1.2.3 本课题的关键技术 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 细菌菌株 |
| 2.1.3 抗体、质粒 |
| 2.1.4 主要实验试剂 |
| 2.1.5 主要实验仪器与设备 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 细菌培养 |
| 2.2.3 细菌感染 |
| 2.2.4 双抗夹心酶联免疫吸附法 |
| 2.2.5 胞内细菌计数 |
| 2.2.6 表达载体的构建 |
| 2.2.7 慢病毒包装 |
| 2.2.8 稳定细胞系的筛选 |
| 2.2.9 细胞生长观察 |
| 2.2.10 SDS-PAGE电泳 |
| 2.2.11 免疫印迹(Western blot) |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR |
| 2.2.13 统计分析 |
| 第三章 结果分析 |
| 3.1 BA-ELISA方法的优化 |
| 3.1.1 沙门氏菌数-吸光度标准曲线 |
| 3.1.2 anti-Salmonella抗体与沙门氏菌的结合量 |
| 3.1.3 anti-Salmonella抗体与沙门氏菌的结合率 |
| 3.1.4 BA-ELISA构建沙门氏菌-吸光度标准曲线 |
| 3.2 细胞内游离沙门氏菌与SCV包被沙门氏菌的分离 |
| 3.2.1 Henle-407 细胞内游离沙门氏菌与SCV包被沙门氏菌的分离 |
| 3.2.2 MEF细胞内游离沙门氏菌与SCV包被沙门氏菌的分离 |
| 3.3 异噬时序调控胞内沙门氏菌的繁殖 |
| 3.3.1 Atg5 介导异噬对胞内沙门氏菌繁殖的调控 |
| 3.3.2 3-MA介导异噬时序调控胞内沙门氏菌的繁殖 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 本课题的创新之处 |
| 参考文献 |
| 发表论文及参加科研情况说明 |
| 致谢 |
四、克隆人类胚胎:可怕的第一步（论文参考文献）
- [1]前沿生物技术领域安全风险治理的历史经验和重要启示[J]. 李建军. 山东科技大学学报(社会科学版), 2021(05)
- [2]论生命科技研究与应用的宪法边界[D]. 初子琪. 青岛大学, 2021
- [3]人类基因编辑技术应用的立法规制研究[D]. 王倩倩. 青岛科技大学, 2021
- [4]人体基因编辑的民法规制研究[D]. 郑越. 西南大学, 2021
- [5]国际法视野下人体基因编辑的治理 ——以“基因编辑婴儿”事件为视角[D]. 杨蕾. 青岛大学, 2021
- [6]中国新生代科幻小说的后人类书写[D]. 李玉蓉. 中国矿业大学, 2021
- [7]刘慈欣科幻小说中的种族形象研究[D]. 陈方齐. 华中师范大学, 2021
- [8]miR-876调控POSTN促进肝癌进展和纤维化的机制研究[D]. 陈凯. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [9]GEFS+的致病基因验证和海马MRS变化与智力水平研究[D]. 丁健. 南方医科大学, 2021
- [10]异噬时序调控胞内沙门氏菌繁殖的机制初探[D]. 刘素可. 天津商业大学, 2021(12)