一、金钱白花蛇及其混淆品的PAGE鉴别（论文文献综述）
郭利霄,申亚君,侯芳洁,郑倩[1]（2019）在《常见动物药的归类及其研究概述》文中指出动物药是我国中药的重要组成部分。由于生态环境被破坏,造成动物野生资源在逐渐减少。同时,目前养殖技术不成熟,使得动物药价格昂贵,市场上伪品较多、品种混乱现象严重。该研究对近年来常见动物药进行了整理归类,将其分为环节动物、哺乳动物、脊椎动物、节肢动物等4大类药品,为动物药的鉴别研究提供参考。
王沙沙[2]（2019）在《冬虫夏草线粒体基因特异性片段筛选与PCR鉴定研究》文中研究指明冬虫夏草Ophiocordyceps是麦角菌科真菌冬虫夏草菌（Ophiocordyceps sinensis（Berk.）Sacc.）寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫虫体的干燥复合体,具有补肺益肾、止血化痰的功效。冬虫夏草疗效显着,野生资源稀少和市场需求量大的矛盾,导致市售冬虫夏草假冒伪劣的现象层出不穷。冬虫夏草的准确鉴别是保障临床用药安全的关键。本研究以整个冬虫夏草线粒体基因为研究对象,筛选在线粒体基因上可以鉴别虫草与其他物种的特异性片段,最终从虫草线粒体基因组中筛选出cob和cox1两个特异性基因,为进一步筛选虫草分子鉴定和物种进化方面的理想分子标记提供了理论依据。并且利用线粒体基因cob和cox1序列建立了冬虫夏草的SS-PCR快速鉴定的方法,进一步考察了此方法的准确性。最后考察了滤纸法对冬虫夏草和中药材DNA提取的适应性,为冬虫夏草和中药材的现场快检提供了理论依据。本研究以冬虫夏草线粒体基因cob和cox1序列的部分片段为靶标,设计筛选出4对冬虫夏草特异鉴定引物9f、21f、30f、35f,这4对引物仅能特异扩增冬虫夏草DNA,不能扩增其它混伪品DNA,检测限低至5ng。通过优化PCR扩增体系和条件,建立了鉴定冬虫夏草的SS-PCR的方法。扩增体系为25μL,包括2×Taq maseter mix 12.5μL、模板1μL,上下游引物各1μL（10μM）,ddH2O9.5μL,在94℃预变性1 min后,94℃变性30 s、61℃退火30s,共30个循环。琼脂糖凝胶电泳检测,正品在300-400bp左右有条带,而伪品则无条带。分别使用这4对引物对35份冬虫夏草样品和24份混伪品成功进行了鉴定。分子鉴定的关键在于样品DNA的高质量提取,中成药经过炮制加工,其DNA降解比较严重,一般的提取方法效果不佳。本研究为了考察虫草加工品DNA的最佳提取方法,分别用试剂盒法、CTAB法和碱裂解法3种方法提取其虫草基因组DNA,真菌ITS通用引物进行PCR扩增,结果表明虽然碱裂解法提取浓度最高,但扩增效率不如其他两种方法,CTAB法提取的浓度高于试剂盒,故CTAB法提取效果最好。对本研究建立的快速鉴定冬虫夏草的SS-PCR方法进行了重复性、稳定性、准确性等考察,结果显示此方法稳定性和重复性良好,准确性高。运用此方法鉴定的31份冬虫夏草正品和16份伪品与形态鉴别高度统一,鉴定的总符合率达到100%,并将该方法应用于市售冬虫夏草胶囊、口服液及片剂的鉴定,检测到虫草片剂中有条带,证明此方法也可以应用到虫草加工品的应用中。同时本研究考察了一种可在30 s内简单、快速提取中药材DNA的方法,应用本方法成功的从冬虫夏草及其伪品中提取出了DNA,并可成功开展冬虫夏草的分子鉴定。为了考察对中药材DNA提取的适应性,提取了37个样品的DNA,进行PCR扩增。结果显示,31个样品PCR扩增成功,成功扩增效率达到83.8%,动物药和真菌类药材的提取成功率达到100%,研究结果表明孔径小的滤纸对DNA吸附能力大于孔径大的。滤纸法对于叶片类、花类、全草类、果实类、根茎类及动物和真菌类药材的DNA提取有较好的效果,皮类药材的提取效果不佳。本研究的滤纸法耗时短、不需要离心机等优点将会为冬虫夏草和中药材分子鉴别现场运用发挥重要的作用。
许燕,肖洪贺,段双蕊,谢明[3]（2018）在《动物类中药鉴定技术研究进展》文中认为动物药是中医药体系的重要组成部分,在我国具有悠久的应用历史。其疗效显着,经济效益可观,但市场上以假乱真,以次充好现象泛滥,对动物药的品质鉴别显得尤为重要。本文对近二十年来动物药鉴别技术和方法进行综述,以期为动物药的质量控制和市场规范化提供借鉴和参考。
王海璐,李庆杰,赵海平,李春义[4]（2018）在《动物药材鉴别及质量评价方法研究进展与策略》文中进行了进一步梳理动物药材在传统中药应用中有着极为重要的地位,是中药的重要组成部分,被认为具有活性强、潜力大和应用广等优势。随着人们对动物药材需求量的不断增大,市场上大量出现伪品、劣品和混淆品的现象严重影响了动物药材的使用效果和质量评价工作;同时动物药材在鉴别和质量评价方面研究也比植物类中药发展缓慢、体系薄弱,特别是缺乏特色和专属的鉴定指标与评价手段。因此,如何构建和完善动物药材质量评价体系尤为重要,将成为今后研究的重点和热点工作。对动物药材鉴别和质量评价方法研究进展现状进行概述,对构建其质量评价体系中存在的问题和挑战进行合理建议和分析,为动物药材质量评价体系的构建和完善研究提供参考和新思路。
石林春,唐先明,胡志刚,赵春颖,冯丽肖,刘金欣[5]（2018）在《基于DNA条形码技术的毒性药材金钱白花蛇药源调查》文中研究说明目的:建立基于DNA条形码技术的毒性药材金钱白花蛇药源调查方法,调查市售金钱白花蛇的药源构成。方法:建立金钱白花蛇正品及其主要混伪品的参考细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（CoⅠ）条形码库,收集51份市售金钱白花蛇样品,分别获取每份样品头部和尾部的CoⅠ序列,通过构建邻接系统发育树进行物种鉴定。结果:共获得60条金钱白花蛇正品及其主要混伪品的CoⅠ条形码,银环蛇种内最大遗传距离0.020 1,与金环蛇、赤链蛇和赤链华游蛇的种间最小遗传距离分别为0.156 1,0.208 8和0.209 3,种内最大变异小于种间最小变异;金钱白花蛇正品及其混伪品在邻接系统发育树上聚为独立的支,金钱白花蛇正品及其混伪品在系统发育树上可明确区分。所有市售金钱白花蛇样品均可从头部和尾部成功获得CoⅠ序列,药源调查结果表明银环蛇29份,赤链蛇20份,赤链华游蛇2份,混伪品占比43%;基于头部和尾部的鉴定结果一致。结论:DNA条形码技术可用于市售金钱白花蛇的药源调查;金钱白花蛇市场混乱、混伪品较多,质量问题严重。
许翊,陆妍,武海萍,卜莹[6]（2017）在《蛇类中药饮片分子鉴别方法的研究进展》文中研究表明蛇类中药饮片具有较高的临床药用价值,具有抗炎、镇痛、通络等功效,药理作用明显。近年来,由于野生动植物资源匮乏、蛇类中药饮片价格昂贵,市场上出现了很多伪品和混淆品。传统的中药饮片鉴别方法包括基源、形态、显微、理化鉴别四大方法体系,但这些方法都存在一些弊端,包括对中药样本有较高的形态学要求、鉴别过程复杂、易受主观因素影响等。随着分子生物学研究的深入和分子遗传标记技术的发展,中药鉴别方法逐渐多元化,一些新兴的理论和技术被引入中药材鉴别领域,RAPD技术、PCR反应、DNA条形码分析等。该文将着重对当前蛇类中药饮片的分子鉴别方法作简要综述。
程樱,费毅琴,肖凌[7]（2017）在《动物类中药材质量评价研究概况及分析》文中提出目的:探讨如何进行动物类药材的质量评价,提出从鉴定真伪、质量优劣及安全性等方面综合评价动物类药材质量的思路。方法:综合分析国内外近十年来动物类药材的鉴定、研究成果,找出研究方向及技术手段。结果:采用DNA分子鉴定技术,解决药材质量真假问题;采用色谱法结合生物测定法,解决药材质量优劣问题,以及关注外源性安全物质对动物类中药安全性的影响。结论:结合动物药材的特点,寻找出符合当前动物药材实际应用的品种鉴定与质量检测的方法与指标,是解决动物药材品质评价问题的关键。
黄璐琦,袁媛,蒋超,田晓轩[8]（2017）在《动物药材分子鉴别现状与策略》文中提出笔者于2011年提出的动物药分子鉴定的策略与目标已初步完成,即先后提出中药分子鉴定原则、研制推出动物药材分子鉴定试剂盒、发展中国动物药材DNA条形码及其标准鉴定数据库。本文在此基础上,进一步对近5年动物药材分子鉴别的科研、技术、产业化发展现状与问题进行总结,提出进一步加强动物分类学基础研究、扩大研究品种,完善基础数据库建设,针对关键技术难点开发更为有效、快速的检测方法,促进标准制定或修订和产业化发展等策略。
张乐,陶明宝,陈鸿平,刘友平[9]（2017）在《常用蛇类药材鉴别研究进展》文中研究指明蛇是人类宝贵的野生动物资源,也是我国重要的蛇类药材来源。它具有祛风、通络、定惊止痉等功效,在风湿痹证方面具有良好的治疗效果。近年来,在经济利益驱使下,加上我国蛇种类繁多,现有蛇类多达241种,且各自形态特征差异不明显,使得准确鉴定药材困难,容易导致市场用药品种混乱。文章就近10年来用于常用蛇类药材（主要以《中国药典》收载品种乌梢蛇、金钱白花蛇、蕲蛇为例）及其混伪品的鉴别方法进行了整理研究,综述了各类鉴别方法在蛇类药材中的研究进展,包括传统的性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别及近年来发展的微性状鉴别、色谱质谱技术和一些现代的分子鉴别方法如DNA条形码技术,并阐述了各种鉴别方法的适用对象及其优缺点,以期为蛇类药材或者动物类药材的鉴别研究提供思路和参考。发现目前药用蛇在现场快检、中成药的鉴别和优劣鉴别方面仍然面临着一些困难,提示对药用蛇品质进行客观评价时,还需将传统与现代鉴别方法相结合、真伪与优劣鉴别技术相联系。
李晓蕾[10]（2015）在《金龙胶囊中生物组分的荧光定量PCR鉴定》文中进行了进一步梳理中成药是由数味乃至数十味中药材按一定治病原则配方制成的复方制剂。由于其组方复杂,生产、销售、使用等众多环节不够规范,质量标准不够客观具体;在经济利益的驱驶下,部分不法企业以假冒真、以次充好、减量投料,出现了投料与处方不符的问题。所以,对中成药各生物组分的鉴别及定量分析,是确保其用药安全及临床疗效的首要任务。传统用于中成药鉴别的方法有显微及理化鉴别等。近年来,越来越多的新方法新仪器运用到了中成药鉴别这一领域中,如色谱鉴别、光谱鉴别等。此外随着分子生物学及相关技术的迅猛发展,基于物种核酸序列分析的鉴别技术如雨后春笋之势发展起来。实时荧光定量PCR技术（简称Q-PCR技术）是以传统PCR技术为基础,将荧光基团添加于反应体系中,通过收集反应中产生的荧光信号以实现对整个PCR进程的监测,最后通过分析阈值循环数（Threshold cycle,Ct值）以及样品的标准曲线,来确定模板DNA的起始浓度,具有核酸杂交技术的特异性、传统PCR技术的灵敏性、光谱技术的精准性及简单操作性等特征。在本论文中,我们探讨了将Q-PCR技术应用于金龙胶囊中生物组分定性及定量分析的可行性。金龙胶囊是一种抗肿瘤中成药,以鲜守宫、鲜蕲蛇、鲜金钱白花蛇三种原料按2:1:1的比例组成。其制备过程中采取冷冻干燥等技术,最大限度地保留了遗传物质,为研究的进行提供了良好基础。一、金钱白花蛇荧光定量PCR法的建立1、目的基于COI序列设计金钱白花蛇高特异性引物,采用荧光定量PCR技术,对金龙胶囊中的金钱白花蛇组分进行定性及定量分析。2、方法2.1样本收集从湖南、广东及广西等地采集和收集金钱白花蛇及其混伪品样本。2.2高特异性引物设计依据引物设计原则,设计金钱白花蛇高特异性引物。2.3 DNA提取采用DNA提取试剂盒,按照制造商提供的方法,提取各样本DNA。2.4 COI片段扩增用COI序列通用引物对方法2.3提取的DNA进行COI片段扩增,设置空白对照组。PCR 反应体系为 10μl:DNA 模板 0.6μl;正、反引物各 0.3μl;2×TaqPlusPCR MasterMix5μl;ddH2O3.8μl。PCR反应循环参数:93℃预变性5min,55℃复性2min;93℃变性30s,55℃复性45s,70℃延伸45s（35循环）;70℃:补齐5min。PCR反应结束后,电泳分析扩增结果。2.5金钱白花蛇高特异性PCR鉴别用步骤2.2设计的特异性引物对方法2.3提取的DNA进行特异性PCR扩增,设置空白对照组。PCR反应体系如2.4所述。PCR反应程序:94℃预变性5min,50℃复性2min;94℃变性30s,50℃复性50s,72℃延伸30s（30循环）;72℃补齐5min。电泳分析扩增结果。按照上述方法,分别对退火温度、引物浓度及循环次数进行优化。2.6金钱白花蛇的荧光定量PCR鉴别参照步骤2.5优化的高特异性PCR鉴别条件对方法2.3提取的DNA进行荧光定量PCR鉴别,设置空白对照。PCR 反应体 20μl:DNA 模板 1.2μl;正、反引物各 0.6μl;SYBR@PremixEx TaqTM10μl;ddH207.6μl。PCR反应程序:94℃预变性30s;扩增反应25个循环（94℃变性30s,65℃复性50s,72℃延伸30s,每次延伸完后收集荧光信号）;熔解反应（95℃ 5s,60℃lmin,95℃）;40℃冷却。记录扩增曲线、熔解曲线、Ct值、Tm值等相关数据。2.7金钱白花蛇Q-PCR定量分析方法的建立2.7.1标准曲线的建立扩增银环蛇的COI片段,如方法2.4所述,将扩增体系扩大到50μl,其它条件不变;采用DNA纯化回收试剂盒,按照制造商提供的方法对PCR产物进行纯化。测定纯化后PCR产物的浓度,计算拷贝数,以拷贝数对纯化后PCR产物进行倍比梯度稀释。用稀释后的各DNA溶液为模板,参照步骤2.6的方法进行Q-PCR实验,记录相关数据。选取扩增正常的不同稀释倍数的样品,以样品拷贝数的对数值（以10为底）与相应Ct值进行线性回归分析,建立标准曲线。2.7.2所建方法的验证参照金龙胶囊投料比例制备供试品,以正伪品投料量设置全正品组、正伪品1:1组、正伪品1:4组、全伪品组四组实验,前三组分别设三组平行实验;按步骤2.3所述方法提取供试品中的DNA。以各供试品的DNA为模板,参照步骤2.6的方法进行Q-PCR实验,各供试品复孔一次,设置空白对照组,记录相关数据。3、结果3.1高特异性引物设计基于银环蛇COI序列设计了金钱白花蛇高特异性引物对,正引物COI37:5’-AATCG GAGCC TGTCT AAG-3’,反引物 COI337:5’-GACTG TTCAACCTGT GCC-3,。3.2 COI片段扩增金钱白花蛇及其混伪品原动物COI片段扩增产物电泳后,均得到约700bp长度的扩增带,空白对照组未见扩增条带。3.3金钱白花蛇高特异性PCR鉴别使用COI37/COI337高特异性引物对,在PCR程序为94℃预变性5min,65℃复性2min;94℃变性30s,65℃复性50,,22℃延伸303（25循环）;22℃补齐5min的条件下,仅银环蛇样品扩增产物电泳后在300bp长度处出现目标条带,其它样品及空白对照品未见扩增带。3.4金钱白花蛇荧光定量PCR法鉴别利用高特异性引物COI37/COI337,在荧光定量PCR反应后,仅银环蛇样品出现特异性扩增曲线及熔解曲线,其它样品及空白对照未见扩增反应。3.5金钱白花蛇Q-PCR定量分析方法的建立运用以上方法,建立了用于金钱白花蛇定量分析的标准曲线,即y =-2.9247x+ 31.725,其中y为Ct值,x为拷贝数的对数值（以10为底）;含有银环蛇的供试品（H1-H9）均有扩增曲线和熔解曲线生成,不含银环蛇的全伪品组及空白对照组未见扩增反应;全正品组、正伪品1:1组及正伪品1:4组所得银环蛇COI片段拷贝数依次为 5.722×106copies/μl、2.397×106copies/μl 及 1.138×106copies/μl,大致符合投料比。二、中国壁虎荧光定量PCR法的建立1、目的基于COI序列设计中国壁虎高特异性引物,采用荧光定量PCR技术,对金龙胶囊中的中国壁虎组分进行定性及定量分析。2、方法同“金钱白花蛇荧光定量PCR法的建立”所述。3、结果3.1高特异性引物设计基于中国壁虎COI序列设计出了该物种高特异性引物对,正引物GZG1:5’-GCAACTGACTAATCCCACT-3’,反引物 GZG2:5’-TGCTTCTTCTGGCGT AG-3’。3.2 COI片段扩增中国壁虎及其混伪品COI片段扩增产物电泳后,均得到约700bp长度的扩增带,空白对照组未见扩增带。3.3中国壁虎高特异性PCR鉴别使用GZG1/GZG2高特异性引物对,在PCR程序为94℃预变性3min;94℃变性30℃,57℃复性45s,72℃延伸30s（25循环）;72℃补齐5min的条件下,仅中国壁虎样品扩增产物电泳后在150bp长度处出现目标条带,其它样品及空白对照品未见扩增带。3.4中国壁虎荧光定量PCR法鉴别利用高特异性引物GZG1/GZG2,在荧光定量PCR反应后,仅中国壁虎样品出现特异性扩增曲线及熔解曲线,其它样品及空白对照品未见扩增反应。3.5中国壁虎定量分析方法的建立运用以上方法,建立了用于中国壁虎定量分析的标准曲线,即y =-3.0127x +34.501,其中y为Ct值,x为拷贝数的对数值（以10为底）;含有中国壁虎的供试品（H1-H9）均有扩增曲线和熔解曲线生成,不含中国壁虎的全伪品组及空白对照组未见扩增反应;全正品组、正伪品1:1组及正伪品1:4组所得中国壁虎COI片段拷贝数依次为 11.511×106copies/μl、6.416×106copies/μl 及 2.553×106copies//μl,大致符合投料比。三、蕲蛇荧光定量PCR法的建立1、目的基于《中国药典》中记载的蕲蛇高特异性引物,采用荧光定量PCR技术,对金龙胶囊所含的蕲蛇组分进行定性及定量分析。2、方法同“金钱白花蛇荧光定量PCR法的建立”所述。3、结果3.1 COI片段扩增蕲蛇及其混伪品COI片段扩增产物电泳后,均得到约700bp长度的扩增带,空白对照组未见扩增带。3.2蕲蛇高特异性PCR鉴别引物对（DK1/DK2）,在PCR程序为95℃预变性30s;95℃变性30s,50℃退火1min,72℃延伸30s（25循环）;72℃补齐5min的条件下,仅蕲蛇样品扩增产物电泳后在300bp长度处出现目标条带,其它样品及空白对照品未见扩增带。3.3蕲蛇荧光定量PCR法鉴别利用高特异性引物,在荧光定量PCR反应后,仅蕲蛇样品出现特异性扩增曲线及熔解曲线,其它样品及空白对照品未见扩增反应。3.4蕲蛇定量分析方法的建立运用以上方法,建立了用于蕲蛇定量分析的标准曲线,即y =-3.2617X +47.014,其中y为Ct值,x为拷贝数的对数值（以10为底）;含有蕲蛇的供试品（H1-H9）均有扩增曲线和熔解曲线生成,不含蕲蛇的全伪品组及空白对照组未见扩增反应;全正品组、正伪品1:1组及正伪品1:4组所得蕲蛇Cytb片段拷贝数依次为 7.056×109copies/μl、4.166× 09copies/μl 及 1.668×109copies/μl,大致符合投料比。四、结论本研究设计高特异性引物,采用荧光定量PCR技术,首次建立了金钱白花蛇、中国壁虎、蕲蛇荧光定量PCR鉴别及含量分析的方法。该方法特异性好、灵敏度高,不仅可用于自制供试品中各生物组分的定性鉴别,还可用于其定量分析。
二、金钱白花蛇及其混淆品的PAGE鉴别（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、金钱白花蛇及其混淆品的PAGE鉴别（论文提纲范文）
（1）常见动物药的归类及其研究概述（论文提纲范文）
| 1 环节动物 |
| 1.1 地龙 |
| 1.2 水蛭 |
| 2 哺乳动物 |
| 2.1 穿山甲 |
| 2.2 鹿茸 |
| 2.3 水牛角 |
| 2.4 羚羊角 |
| 2.5 犀牛角 |
| 3 脊椎动物 |
| 3.1 蛇类 |
| 3.2 龟甲 |
| 4 节肢动物 |
| 4.1 土鳖虫 |
| 4.2 九香虫 |
| 4.3 蜈蚣 |
| 5 小结 |
（2）冬虫夏草线粒体基因特异性片段筛选与PCR鉴定研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 缩略词 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 冬虫夏草线粒体基因特异性片段筛选 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 引物设计与筛选 |
| 2.1.1 引物设计 |
| 2.1.2 冬虫夏草e-PCR模拟扩增 |
| 2.1.3 其他真菌线粒体e-PCR模拟扩增 |
| 2.2 虫草可能存在的特异性区间 |
| 2.2.1 筛选落入基因原件的扩增产物 |
| 2.2.2 特异性区间的预测 |
| 2.3 特异性区间筛选验证 |
| 2.3.1 DNA提取及质量分析 |
| 2.3.2 PCR扩增及电泳 |
| 2.3.3 产物测序及分析 |
| 2.4 基于cob和cox1基因的麦角菌科真菌的生物信息分析 |
| 3 结果及分析 |
| 3.1 引物筛选结果 |
| 3.2 可能存在的特异性片段 |
| 3.3 可能的特异性区间验证 |
| 3.3.1 DNA提取结果分析 |
| 3.3.2 PCR扩增结果 |
| 3.3.3 PCR产物序列分析 |
| 3.4 基于cob和cox1基因的麦角菌科真菌的生物信息分析 |
| 3.4.1 两个基因的遗传变异分析 |
| 3.4.2 基于cob和cox1基因的系统发育分析 |
| 4 讨论 |
| 第二章 冬虫夏草特异性PCR鉴定研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 特异性引物设计 |
| 2.2 冬虫夏草基因组DNA的提取及质量评价 |
| 2.3 不同PCR反应条件的影响 |
| 2.4 最低检测限考察 |
| 2.5 SS-PCR引物的特异性考察 |
| 2.6 测序分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DNA质量评价 |
| 3.2 PCR反应条件的优化 |
| 3.3 最低检测限考察 |
| 3.4 引物的物种特异性验证 |
| 3.5 物种特异性PCR产物测序分析 |
| 4 讨论 |
| 第三章 冬虫夏草特异性PCR鉴定验证 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 DNA提取 |
| 2.1.1 碱裂解法提取DNA |
| 2.1.2 试剂盒法提取DNA |
| 2.1.3 CTAB法提取DNA |
| 2.2 DNA纯度和浓度的检测 |
| 2.3 PCR扩增 |
| 2.4 产物测序及分析 |
| 2.5重复性实验 |
| 2.6稳定性实验 |
| 2.7 准确性考察 |
| 2.8 方法应用 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DNA质量评价 |
| 3.2 PCR扩增结果 |
| 3.3 产物测序 |
| 3.4 重复性结果 |
| 3.5 稳定性结果 |
| 3.6 准确性结果 |
| 3.7 应用结果 |
| 4 讨论 |
| 第四章 滤纸法快速提取冬虫夏草和中药材DNA的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 滤纸 |
| 1.4 仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 滤纸法提取DNA |
| 2.1.1 滤纸条的制备 |
| 2.1.2 DNA提取 |
| 2.2 试剂盒提取DNA |
| 2.3 DNA质量分析和电泳检测 |
| 2.4 PCR扩增及电泳 |
| 2.5 PCR扩增效率及测序分析 |
| 3 结果分析 |
| 3.1 滤纸法对虫草属真菌DNA提取和冬虫夏草的鉴别适应性分析 |
| 3.2 不同滤纸对DNA提取的影响 |
| 3.2.1 DNA提取的浓度及纯度分析 |
| 3.2.2 不同孔径的滤纸对DNA提取的扩增效率分析 |
| 3.3 滤纸法提取中药材DNA的浓度及纯度分析 |
| 3.4 滤纸法提取中药材DNA的 PCR扩增效率分析 |
| 3.5 测序结果分析 |
| 3.6 滤纸法对样品的选择性分析 |
| 3.7 滤纸法未扩增成功的原因分析 |
| 4 讨论 |
| 全文结论 |
| 本研究创新点 |
| 参考文献 |
| 文献综述 中药分子鉴定技术研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（3）动物类中药鉴定技术研究进展（论文提纲范文）
| 1传统鉴定方法 |
| 1.1性状鉴定 |
| 1.2显微鉴定 |
| 1.3理化鉴定 |
| 1.3.1常规理化检查 |
| 1.3.2光谱法 |
| 1.3.2.1紫外光谱法 |
| 1.3.2.2红外光谱法 |
| 1.3.2.3近红外光谱法 |
| 1.3.2.4 X射线衍射法 |
| 1.3.3色谱法 |
| 1.3.3.1薄层色谱法 |
| 1.3.3.2气相色谱法 |
| 1.3.3.3液相色谱法 |
| 1.3.4高效毛细管电泳法 |
| 2分子生物技术 |
| 2.1 DNA分子遗传标记 |
| 2.2 DNA条形码分子鉴定法 |
| 3免疫鉴别法 |
| 4展望 |
（4）动物药材鉴别及质量评价方法研究进展与策略（论文提纲范文）
| 1 动物药材鉴别及质量评价方法 |
| 1.1 性状鉴别法 |
| 1.2 显微鉴别法 |
| 1.3 理化鉴别法 |
| 1.4 色谱法 |
| 1.4.1 薄层色谱法 |
| 1.4.2 高效液相色谱法 (HPLC) |
| 1.4.3 气相色谱法 |
| 1.4.4 其他联用技术 |
| 1.5 光谱法 |
| 1.6 生物鉴别法 |
| 1.6.1 电泳鉴定技术 |
| 1.6.2 生物免疫印记技术 |
| 1.7 DNA条形码技术 |
| 1.8 X射线衍射Fouirer图谱 |
| 1.9 基于灰色关联度模型的动物药材质量评价模式 |
| 1.1 0 联合技术 |
| 2 动物药材鉴别和质量评价体系构建的研究现状 |
| 2.1 动物药材鉴别和质量评价研究的现状 |
| 2.2 动物药材鉴别和质量评价体系构建缓慢 |
| 2.3 动物药材缺少专属性活性成分和质量评价方法 |
| 3 动物药材质量评价体系构建存在的挑战和策略 |
| 3.1 动物药材质量评价研究存在的挑战 |
| 3.1.1 动物药材成分复杂, 标志性成分不明确 |
| 3.1.2 缺少检测动物药材各类成分特效、专属的方法 |
| 3.2 以药效活性蛋白作为动物药材的质量标志物 |
| 3.3 建立适宜的动物药材特色检测方法和思路 |
| 4 展望 |
（5）基于DNA条形码技术的毒性药材金钱白花蛇药源调查（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 DNA提取, PCR扩增及DNA测序 |
| 2.2 序列拼接、遗传距离计算和邻接 (NJ) 树构建 |
| 3 结果 |
| 3.1 金钱白花蛇DNA提取, PCR扩增与测序 |
| 3.2 金钱白花蛇CoⅠ序列特征及其与混伪品的种间变异分析 |
| 3.3 基于DNA条形码技术的市售金钱白花蛇药源调查 |
| 4 讨论 |
| 4.1 金钱白花蛇商品来源复杂、市场混乱, 危害中医临床用药安全 |
| 4.2 基于DNA条形码技术开展金钱白花蛇药源调查具有独特的技术优势 |
（6）蛇类中药饮片分子鉴别方法的研究进展（论文提纲范文）
| 1 基于随机引物扩增的RAPD技术 |
| 2 基于特异性引物扩增的DNA序列分析 |
| 2.1 基于线粒体12S rRNA基因序列的鉴别研究 |
| 2.2 基于Cytb基因序列的鉴别研究 |
| 3 基于通用引物扩增的DNA序列条形码分析 |
| 4 其他分子检测方法 |
| 5 展望 |
（7）动物类中药材质量评价研究概况及分析（论文提纲范文）
| 1 质量评价研究方法概述 |
| 1.1 DNA分子鉴定技术 |
| 1.1.1 概述 |
| 1.1.2 基于线粒体12S r RNA基因序列的鉴别研究 |
| 1.1.3 基于线粒体Cyt b基因序列的鉴别研究 |
| 1.1.4 基于线粒体COⅠ基因序列的鉴别研究 |
| 1.2 高效毛细管电泳指纹图谱技术 |
| 1.3 蛋白质SDS-PAGE电泳技术 |
| 1.4 X射线衍射Fourier谱鉴定技术 |
| 1.5 生物活性测定技术 |
| 1.6 色谱指纹图谱、质谱技术 |
| 2 质量评价思路的探讨 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 基因分子鉴定原动物及药材来源 |
| 2.3 化学成分研究结合生物指标 |
| 2.4 安全性评价 |
| 3 结论 |
（8）动物药材分子鉴别现状与策略（论文提纲范文）
| 1 动物药材分子鉴定关键问题 |
| 1.1 动物分类学基础及分子鉴定标准化 |
| 1.2 种下水平鉴定问题 |
| 2 动物药材分子鉴定研究现状 |
| 2.1 DNA扩增指纹技术 |
| 2.2 分子杂交信号技术 |
| 2.3 核酸序列分析技术 |
| 2.3.1 DNA测序鉴定 |
| 2.3.2 特异性扩增鉴定 |
| 2.3.3 PCR-RFLP鉴定 |
| 2.3.4 高通量测序技术 |
| 3 动物药材分子鉴别研究发展方向 |
| 3.1 鉴定标记和DNA提取方法开发多元化 |
| 3.2 加强标准研究和制定 |
| 3.3 扩大技术推广范围 |
| 4 展望 |
（9）常用蛇类药材鉴别研究进展（论文提纲范文）
| 1 性状鉴别 |
| 2 显微鉴别 |
| 3 理化鉴别 |
| 4 分子鉴别 |
| 4.1 DNA分子标记技术 |
| 4.2 DNA条形码技术 |
| 5 讨论 |
（10）金龙胶囊中生物组分的荧光定量PCR鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 中成药鉴别研究进展 |
| 1.2 DNA分子鉴别在中成药鉴别中的应用 |
| 1.3 荧光定量PCR技术的概述 |
| 1.4 金龙胶囊的概述 |
| 第二章 金钱白花蛇荧光定量PCR法的建立 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 中国壁虎荧光定量PCR法的建立 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 蕲蛇荧光定量PCR法的建立 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 研究成果 |
| 致谢 |
四、金钱白花蛇及其混淆品的PAGE鉴别（论文参考文献）
- [1]常见动物药的归类及其研究概述[J]. 郭利霄,申亚君,侯芳洁,郑倩. 安徽农学通报, 2019(24)
- [2]冬虫夏草线粒体基因特异性片段筛选与PCR鉴定研究[D]. 王沙沙. 成都中医药大学, 2019
- [3]动物类中药鉴定技术研究进展[J]. 许燕,肖洪贺,段双蕊,谢明. 中国中医药现代远程教育, 2018(17)
- [4]动物药材鉴别及质量评价方法研究进展与策略[J]. 王海璐,李庆杰,赵海平,李春义. 中草药, 2018(16)
- [5]基于DNA条形码技术的毒性药材金钱白花蛇药源调查[J]. 石林春,唐先明,胡志刚,赵春颖,冯丽肖,刘金欣. 中国实验方剂学杂志, 2018(18)
- [6]蛇类中药饮片分子鉴别方法的研究进展[J]. 许翊,陆妍,武海萍,卜莹. 中国中药杂志, 2017(15)
- [7]动物类中药材质量评价研究概况及分析[J]. 程樱,费毅琴,肖凌. 中国药事, 2017(04)
- [8]动物药材分子鉴别现状与策略[J]. 黄璐琦,袁媛,蒋超,田晓轩. 中国现代中药, 2017(01)
- [9]常用蛇类药材鉴别研究进展[J]. 张乐,陶明宝,陈鸿平,刘友平. 中国实验方剂学杂志, 2017(04)
- [10]金龙胶囊中生物组分的荧光定量PCR鉴定[D]. 李晓蕾. 南方医科大学, 2015(01)