一、猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联灭活苗（论文文献综述）
李仕林,王雅雯,姜水兵,郭良帅,努尔麦麦提·麦麦提敏,王新新,焦海宏[1]（2021）在《致猪腹泻的冠状病毒病的研究进展》文中认为冠状病毒在自然界广泛存在,其宿主多样,可引起鸡、火鸡、猪、牛、犬等动物传染病。冠状病毒传染性较强、高发病率,严重制约畜牧业的发展,威胁人类健康。文章对猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪急性下痢症候群冠状病毒病的病原、流行病学特征、临床病理变化、诊断及预防进行综述,进一步认识致猪腹泻的冠状病毒病的危害,为猪冠状病毒病的预防提供参考。
吴中彬[2]（2021）在《规模化猪场流行性腹泻综合性防控措施的探讨》文中提出随着国民经济的迅速发展,我国生猪养殖业从分散、个体经营逐渐向规模化、集约、封闭式的养殖模式发展。然而,疫病的发生并没有随着猪场集约化程度的上升而减少,流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是引起不同日龄猪只腹泻的重要病原,是规模化猪场最为常见的高发病毒病之一。各种日龄的猪只都会发生,哺乳猪、架子猪和育肥猪的发病率都很高。断奶猪、架子猪和母猪呈现精神萎靡、采食量下降和大约一周的持续性腹泻,然后可逐渐恢复正常;但是哺乳仔猪尤其是一周龄内新生仔猪发生腹泻后3-4天,常因严重脱水而死亡,死亡率可达50%,最高的死亡率达100%。临床症状主要表现为水样腹泻,或水样腹泻伴有呕吐,发病日龄越小,发病率和死亡率越高。尤其是因其仔猪发病日龄小,机体很难产生抗体,所以猪场对母源抗体的实时监测和合理的免疫程序显得非常重要。1、规模化猪场仔猪流行性腹泻的流行、诊断与母猪初乳中IgA抗体水平的监测2015年3月,江苏某公司下属部分规模化猪场发生腹泻病例,通过观察临床症状、病理解剖、临床胶体金检测、RT-PCR检测以及基因测序,证实此次疫情是由变异的猪流行性腹泻病毒导致的腹泻。为了控制疫情的传播、了解公司下属江苏地区所辖20个规模化猪场流行性腹泻的发病情况、不同胎次母猪初乳中抗体的分布情况以及分析母猪初乳中IgA效价、离散度与发病率和死亡率之间的关系,于2015年3月至2016年10月间采集公司下属江苏地区发病的20个规模化猪场不同胎次初乳共计760份,使用猪流行性腹泻IgA抗体ELISA检测试剂盒对采集的母猪初乳进行检测。根据猪场初乳IgA抗体测定以及抗体离散度分析得出:母猪初乳效价高的申河、安丰、黄海、晚庄、海提、庆丰、下明、海北的八个猪场,也存在发病和死亡的情况,其中检测到安丰、黄海、晚庄、海提、庆丰、下明、海北七个猪场不同胎次抗体离散度较高,是造成仔猪发病和死亡的主要原因。丰海、时丰、海北1、川东一、川东二、川东三、川东四、川东五、川东六、龙河、万星、峥嵘等十二个猪场具有较高的发病率和死亡率,同时检测到相应猪场母乳抗体效价低和抗体离散度高。结果表明,IgA效价低且离散度高的猪场仔猪发病率、死亡率相对较高。2、示范场猪流行性腹泻综合性防制措施的研究20个规模化猪场调查结果显示,虽然各场采取的是公司统一制定的免疫程序和保健程序,但是由于猪群的健康状况以及管理因素导致各猪场发病和死亡情况存在较大差异。本研究以发病率、死亡率较高的的3个猪场为示范场,通过免疫程序优化、完善生物安全措施以及联合用药等展开研究。根据研究结果,结合猪场实际情况,形成了优化后的规模化猪场流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）综合性防制措施,该措施可降低疫病发生带来的危害,在示范猪场的应用结果表明:一是通过免疫程序的优化可以显着提高母猪群初乳中IgA抗体水平;二是对发病仔猪采用高IgA抗体水平的初乳灌服以及优化饲养环境,能够显着改善发病仔猪的成活率;三是通过升级牧场内外的生物安全措施,加强猪群的饲养管理以及优化免疫程序等综合性防制措施对示范场的PED防控起到了良好效果,从而为本地区PED的防制提供了参考模式。
吴龙成[3]（2020）在《福建省某猪场猪流行性腹泻的检测与防治》文中研究表明猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是生猪养殖过程中的一种常见病、多发病。该病主要是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）感染猪所导致的一种急性消化道传染病。在养殖过程中发现此病传播速度快,发病急,死亡率高,其中以哺乳仔猪感染最为严重,主要临床症状有水样腹泻、呕吐和脱水等。近年在全国出现较大范围的流行,给我国的养猪业带来重大经济损失。本研究对一发生严重仔猪腹泻的规模化猪场,进行分子生物学鉴别诊断,主要采用RT-PCR和荧光定量PCR技术对猪瘟病毒、蓝耳病病毒、猪伪狂犬病毒,轮状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和代尔塔冠状病毒进行检测,分析了哺乳母猪、哺乳仔猪、保育猪粪便中的PEDV病毒载量,探讨该场PEDV的传播路径,并对目的病原的PCR产物进行了测序分析。与此同时,对猪场水质进行检测与分析。最后选择同源性最高的猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻二联疫苗对母猪群紧急免疫（活加灭）并加强生物安全处理措施后,检测产床仔猪粪便中的PEDV情况。结果如下:1.福建某猪场产床小猪发生严重腹泻和呕吐,1周内同栋产房的仔猪几乎全部发病,怀疑病毒感染因素,采用RT-PCR法对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒和代尔塔冠状病毒进行检测,结果表明,轮状病毒、传染性胃肠炎病毒和代尔塔冠状病毒均为阴性,只有猪流行性腹泻病毒为阳性;为了分析是否存在猪瘟病毒、蓝耳病毒、伪狂犬轮状病毒、猪圆环病毒的混合感染,采用荧光定量PCR进一步对以上病毒进行检测,结果表明该猪群猪瘟病毒、蓝耳病毒、伪狂犬轮状病毒、猪圆环病毒均为阴性,没有存在与这些病毒混合感染。3个阶段猪PEDV的病毒载量检测结果为,病毒载量最高的是哺乳母猪（≥1.13×103占60%）,其次是哺乳仔猪（≥1.13×103占30%）,最后是保育猪（≥1.13×103占10%）。可见,该场PEDV疫情是哺乳母猪先发病然后传染给哺乳仔猪。2.采集猪场引用水送检,结果表明,该场猪饮用水中未检出致病菌,重金属含量低于限制量,色度、嗅和味等指标均符合饮用水标准,提示该场饮用水无异常。3.为了更合理的选择疫苗,本试验对PDEV的PCR产物进行测序分析,结果显示,该猪场的PEDV毒株与Gen Bank中9株PEDV毒株的同源性在56.2%-93.7%之间,其中与AJ1102毒株的同源性最高,为93.7%。选择猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗（WH-1R株+AJ1102-R株）对该场母猪群采取后海穴紧急免疫接种并结合严格的生物安全措施,结果表明,经紧急免疫的母猪所产仔猪健康度显着上升,仔猪粪便中PEDV的阳性率显着下降,表明该猪场已经将PED有效控制。综上,引起该猪场腹泻的病原是猪流行性腹泻病毒,该场传播路径为从哺乳母猪传染给哺乳仔猪,选择同源性高的疫苗紧急免疫,强化生物安全,对于该病的防控具有重要的意义。
杨朋霞[4]（2020）在《抗PEDV N蛋白单克隆抗体的制备及PEDV灭活疫苗免疫攻毒保护效果的研究》文中研究指明猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由冠状病毒亚科（Coronavirinae）的α冠状病毒属（Alpha Coronavirus）猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种急性、高度接触性的肠道传染病。这种病毒可致各阶段的猪均能发病,但危害最为严重的是对10日龄以内的仔猪,临床上常引起仔猪脱水、呕吐和水样腹泻等症状。1971年在英国首先报道该病,随后在多个国家暴发流行。由于经典疫苗毒株CV777灭活苗或弱毒苗的使用,PEDV取得了较好的防控。但是好景不长,2010年冬季有人发现就算免疫过经典疫苗株的养猪场照样能发生该病,原因是PEDV发生了变异,变异毒株引发的严重腹泻病迅速席卷全球,近年来,临床上缺乏针对现行PEDV变异株的有效疫苗,一时间养猪业损失惨重,而该病也成为了危害养猪业的最为严重的疫病。因此,PED的防控具有重要的意义,而检测是防控的主要手段,但目前临床上缺少针对当前流行的PEDV变异毒株检测方法。本研究在GenBank中参照已登录的PEDV N（AF353511）基因序列,经过对比近年来流行株,设计出了一对特异性引物,将扩增后的目的片段（N基因）克隆到pQE-30原核表达载体中,进行表达、纯化,以纯化的重组N蛋白（rN）作为包被抗原,异性和重复性试验。对500份来源于不同猪场临床血清样品进行检测,并将结果与进口商品化试剂盒通过矩阵法优化ELISA反应条件,建立了 PEDV间接ELISA检测方法,并进行敏感性、特比较。结果表明,本研究成功扩增了长度1221bpN基因,表达的rN约为50.4 ku,western blot结果表明该试验所建立的ELISA方法反应原性良好。rN最佳包被浓度为2 μg/mL;血清最佳稀释度为1:100,作用时间1 h;羊抗猪HRP-IgG最适稀释度为1:5000,作用时间为30 min;TMB最佳显色时间为10 min。本方法可特异性检测PEDV抗体,而与PRV、PRRSV、CSFV、PCV、TG EV等病原的阳性血清均无交叉反应;本方法检测出相同血清的最高稀释倍数与中和试验基本一致,具有良好敏感性;批内、批间重复性检验变异系数均小于10%,具有较好的重复性和稳定性。对500份临床猪血清的检测,与进口商品化试剂盒相比符合率为99.6%。本研究为PEDV血清学检测提供了技术手段,也为下一步单克隆抗体（单抗）的筛选奠定基础。本研究按照常规技术免疫小鼠,将小鼠血清倍比稀释用所建立的间接ELISA方法检测小鼠抗体效价,将检测效价大于1:80000的小鼠脾脏充分研磨后过铜网,在PEG1500的作用下与事先培养好的SP2/0细胞进行融合,后将融合细胞铺到96孔板中,逐日观察细胞情况,取每孔上清液用建立的间接ELISA方法进行筛选鉴定,同时进行单抗亚型鉴定,对阳性孔进行5次亚克隆后,筛选出2株亚型为IgG且能稳定分泌抗PEDV N蛋白单抗的杂交瘤细胞株（2D4、6C6）。将杂交瘤细胞扩大培养并注射入小鼠腹腔,收集腹水后对其进行纯化,同时进行SDS-PAGE、稳定性、特异性检测。结果显示:制备腹水纯化后,2株中仅有1株（6C6）,纯度高达95%以上,且其可以特异性地与 PEDV抗原反应,而与PRV、PRRSV、CSFV、PCV、TGEV、大肠杆菌等抗原均不发生交叉反应,特异性良好;经过连续几次传代后,其效价依然可达到1:102400,稳定性好。为进一步建立基于PEDV N蛋白抗体阻断ELISA及应用于临床的胶体金快速检测试纸条的方法奠定了基础。本研究用本实验室分离鉴定得到的病毒制备的灭活疫苗,进行免疫效力试验的研究。选取PEDV血清中和效价<1:4,且FQ-PCR检测为阴性的母猪所产的5日龄仔猪10头,分为2组,每组5头,免疫组口服病毒液（攻毒剂量1000TCID50/mL）,对照组口服相同剂量的DMEM,在攻毒后3d内观察仔猪发病情况。结果显示:试验组均符合腹泻发病要求,对照组均未发病。用制备的灭活疫苗在临床上分别于母猪分娩前45d、分娩前21d和再次配种前7d免疫灭活疫苗,对照组在相同的时间里注射相同剂量的DMEM。选取免疫组和对照组分娩的仔猪进行攻毒免疫保护实验的研究。结果显示:试验组母猪所产仔猪获得的保护率能达到90%,对照组仔猪100%发病,且致死率为30%。且在精神状态、增重率、病原学检测和剖检症状等各方面试验组均比对照组要好。说明本实验室的毒株制备成灭活疫苗免疫接种给母猪,它能给仔猪提供有效保护,可用于当前猪流行性腹泻变异毒株疫苗的研发。
王艳丰,张丁华,王书丽,刘守铉,李爱心,桂启胜[5]（2018）在《不同免疫程序对猪流行性腹泻疫苗免疫效果的影响》文中研究指明为了研究不同免疫程序对猪流行性腹泻疫苗免疫效果的影响,试验选取河南省8个猪场,每个猪场受试猪随机分为2组,采用2次猪腹泻二联灭活苗、2次猪腹泻三联活疫苗、1次猪腹泻二联灭活苗+1次猪腹泻三联活疫苗、2次猪腹泻三联活疫苗+1次猪腹泻二联灭活苗等4种免疫程序进行试验,母猪于产仔当天收集初乳样本942份,采用ELISA法检测猪流行性腹泻（PED） IgA抗体。结果显示,2次猪腹泻三联活疫苗+1次猪腹泻二联灭活苗的免疫效果最好,但成本相对较高,其次是2次猪腹泻三联活疫苗和1次猪腹泻二联灭活苗+1次猪腹泻三联活疫苗,最后是2次猪腹泻二联灭活苗。结果表明,猪腹泻三联活疫苗单独或与猪腹泻二联灭活苗组合使用效果优于猪腹泻二联灭活苗。
罗华林[6]（2018）在《TGEV CN12株自然传代与化学诱变传代的遗传变异及生物特性研究》文中研究说明猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）感染引起的一种高度接触性肠道传染病。猪传染性胃肠炎病毒可引起各个年龄段的猪发病,其中一周龄仔猪的临床症状最为严重,死亡率极高。而断奶后仔猪感染TGEV的死亡率要比未断奶仔猪感染TGEV的死亡率明显更低,但是断奶后仔猪感染TGEV可造成饲料报酬降低、僵猪等情况,从而给养殖业造成了巨大的经济损失。该病最早于1946年在美国被发现,之后在世界范围内均有该病流行。我国于上世纪50年代发现该病的流行,近年来TGEV也一直在我国流行,近年来不断有新的TGEV毒株被发现,同时发现各毒株之间具有一定的差别。为了预防该病毒对猪场的侵袭,研究该病毒的变异规律并将分离到的野毒株进行疫苗研究并显得尤为重要。将本实验室一株命名为CN12株的TGEV毒株在连续传代条件下从120代传代至200代,成功构建了一株TGEV疫苗株。通过TCID50测定,该毒株滴度为107.0/mL。将该连续传代的TGEV CN12株进行外源病毒检测,并进行间接荧光实验和中和抗体实验,在外源病毒检测中未发现相关检测病毒的存在。间接荧光抗体实验中实验组荧光明显,对照组无荧光。中和抗体实验中发现在相同时间条件下实验组细胞无细胞病变,而对照组则出现了明显的细胞病变。以上实验进一步确定了CN 12株为TGEV毒株,且在该毒株中未发现有外源病毒存在。将该毒株分别在第135代、200代时进行全基因组测序,这两个代次碱基序列和氨基酸序列与第5代、80代的碱基序列与氨基酸序列进行对比分析。发现TGEV CN12株在长期连续传代的过程中,主要是ORF1基因与S基因的变异为主,并且可以明显看到ORF1基因以碱基替换为主,而S基因则主要以缺失或插入为主。其中ORF1基因的变异比较稳健,变异幅度较小,相应的氨基酸变异也少。TGEV CN12株的S基因变异幅度较大,且其氨基酸变异大。为了扩大疫苗备选株的选择范围,将TGEV CN12株从135代开始使用化学诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS）进行化学诱变,在诱变传代65代后成功得到一株新的疫苗株TGEV M株。该毒株滴度可达到106.8/mL。在TGEV M株的外源病毒检测中未发现相关检测病毒的存在。将TGEV M株200代与正常传代的135代进行序列对比发现ORF1中以碱基替换为主,S基因以碱基的缺失或插入为主而ORF3基因的变异则是缺失、插入、替换都存在。在分析中可以发现TGEV M株碱基序列随着病毒代次的增加而有了明显的变化,其中增加了ORF3基因的碱基突变,而正常传代的TGEV CN12株则没有发生ORF3基因的变异。
曾宪煜[7]（2018）在《猪病毒性腹泻的流行情况调查及其疫苗免疫抗体检测》文中研究说明猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV）和猪轮状病毒（Porcine rotavirus,PoRV）是引起猪病毒性腹泻的3种主要病原,被感染的仔猪主要临床症状表现为腹泻、呕吐和脱水,因其传染性强,死亡率高,给生猪养殖业造成不可估量的经济损失,严重困扰养猪业的发展。本研究通过调查2017年福建省规模化猪场PED、TGE和PoR的流行情况和检测不同猪病毒性腹泻疫苗组合的免疫抗体水平,为防控猪病毒性腹泻提供技术参考。福建省PED、TGE和PoR流行情况调查:采用RT-PCR的检测方法对2017年福建省疑似发生猪病毒性腹泻病的110个规模化猪场收集到的178份病料进行病原检测,结果表明:（1）所有检测样品中,PEDV阳性率最高,为59.6%（106/178）,而TGEV与PoRV阳性率相对较低,分别为7.3%（13/178）和5.6%（10/178）;（2）不同地区阳性率有所差异,其中PEDV阳性率高低依次为:宁德（75.0%）、龙岩（70.4%）、漳州（65.2%）、南平（60.0%）、三明（58.3%）、福州（58.0%）、泉州（46.2%）、和莆田（45.0%）;TGEV阳性率高低依次为:三明（16.7%）、龙岩（11.1%）、莆田（10.0%）、福州（8.0%）、泉州（7.7%）、南平（4.0%）、宁德（0.0%）和漳州（0.0%）;PoRV阳性率高低依次为:莆田（10.0%）、南平（8.0%）、龙岩（7.4%）、福州（6.0%）、三明（0.0%）、泉州（0.0%）、宁德（0.0%）和漳州（0.0%）;（3）病毒性腹泻发病季节主要集中在冬、春两季,PEDV阳性率分别为63.9%和57.1%,TGEV阳性率分别为9.7%和8.9%,PoRV阳性率分别为5.6%和8.9%;（4）病毒性腹泻发病日龄主要集中在出生7日龄内和7～25日龄的仔猪,PEDV阳性率分别为73.13%和57.78%,TGEV阳性率分别为8.96%和8.89%,PoRV阳性率分别为8.96%和6.67%。猪病毒性腹泻疫苗组合免疫抗体检测:选择妊娠期相近的30头后备母猪,随机分成5个试验组和1个对照组。利用现有商品化PEDV、TGEV、PoRV经典毒株三联弱毒疫苗（弱毒CV777+弱毒华毒株+NX株）,PEDV、TGEV经典毒株二联弱毒疫苗（ZJ08株+HB株）和PEDV、TGEV变异毒株二联灭活疫苗（AJ1102株+WH-1株）,进行两两疫苗组合,试验组在母猪产前40d首免和产前20d二免,对照组免疫相同剂量的生理盐水。测定首免后第1d、21d、35d和49d的母猪血清中PED-IgG、TGE-IgG和PoR-IgG抗体水平,结果表明:（1）“二联弱毒苗十二联灭活苗”疫苗组合免疫母猪后,血清中PED-IgG整体抗体水平高于其它疫苗组合且均衡度好,免疫后1d～21d、21d～35d和35d～49d抗体消长规律呈现“上升、上升、下降”趋势;（2）“二联弱毒苗+二联灭活苗”疫苗组合和“三联弱毒苗+二联灭活苗”疫苗组合免疫母猪后,血清中TGE-IgG整体抗体水平均高于其它疫苗组合,但两组之间的差异不明显;通过比较两者抗体水平均衡度,“二联弱毒苗+二联灭活苗”疫苗组合优于“三联弱毒苗+二联灭活苗”疫苗组合。（3）“三联弱毒苗+三联弱毒苗”疫苗组合免疫母猪后,血清中PoR-IgG整体抗体水平高于其它疫苗组合,免疫后1d～21d、21d～35d和35d～49d抗体消长规律呈现“上升、上升、下降”趋势。结论:（1）福建省猪病毒性腹泻流行情况调查表明,福建省规模化猪场引起猪病毒性腹泻的病原主要是猪流行性病毒（PEDV）。（2）采用“二联弱毒苗+二联灭活苗”和“三联弱毒苗+三联弱毒苗”疫苗组合免疫母猪,其血清中抗体水平较高、均衡度好。
谭海军,崔水保,谢秋梅[8]（2017）在《猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻两种病毒特性探索》文中研究表明猪传染性胃肠炎（Swine Transmissible Gastroenteritis,TGE）和猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）均由冠状病毒引起致病。该病以呕吐、腹泻、脱水为主要症状。TGE和PED这两种猪群中的多发疾病通常在冬春季节发生,在我国呈广泛流行分布。另外,这两种疾病在流行病学、临床症状上
谭海军[9]（2017）在《猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗的工艺摸索》文中研究说明猪传染性胃肠炎（Swine Transmissible Gastroenteritis,TGE）和猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）均是由冠状病毒引起,可造成患病仔猪出现呕吐、腹泻及死亡等临床症状,是危害猪群健康的两种重要疫病。由于市场供应的疫苗质量参差不齐,大部分疫苗的中和抗体水平较低,对猪群保护的效果不理想,给养猪业带来了巨大的经济损失。我们通过开展对两种病毒敏感细胞的筛选、病毒的浓缩、免疫佐剂的筛选、免疫增强剂的添加、病毒液保存条件及病毒含量变化实验、肠毒的制备并灭活等实验,对猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗的生产工艺进行了优化并制备了样品,随后,免疫3日龄阴性仔猪后检测其免后两周中和抗体水平。根据本次实验结果,我们总结如下:（1）筛选出较敏感细胞PK-15-1和VERO-1两株,猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻效价TCID50均在10-7/ml以上,且猪传染性胃肠炎合格率90%以上,猪流行性腹泻合格率100%;（2）PEDV制备后一周之内灭活并配苗,TGEV两周之内灭活并配苗能够保证成品质量良好;（3）提高两种病毒的病毒含量,采取对疫苗进行沉淀后除去五分之二上清液的工艺可以提高猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻二联灭活疫苗的中和抗体;（4）相同浓度下,选择颗粒越细,表面积越大的氢氧化铝胶佐剂可以提高猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻两种抗原中和抗体水平。以上实验在一定程度上可达到提高疫苗产品质量和防疫效果的目的。对部分工艺进行固化,从而实现优化猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗工艺的目标。本研究为优化猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗的工艺提供了参考。
曾彬[10]（2017）在《猪流行性腹泻疫苗不同免疫程序抗体水平比较》文中研究说明猪流行性腹泻（PED）自2010年国内再次暴发以来,造成了仔猪发病率和死亡率大幅度上升,给养猪业造成了巨大的损失。而疫苗免疫效果不佳是猪流行性腹泻大面积流行的原因之一,探索适宜的免疫方案是防控PED当务之急。本论文探讨了不同免疫程序对产前母猪的免疫效果,通过ELISA方法分别检测母猪血清的IgA、IgG和初乳IgA、IgG以及母猪所产小猪的血清IgA、IgG的OD值,研究了不同疫苗、免疫程序和免疫剂量对母猪初乳PED-IgA抗体水平的影响。主要研究结果如下:1、母猪血清中PED的IgG和IgA的相关性不显着。2、母猪血清PED-IgA OD值在不同的猪场之间（均免疫2次活苗每次1头份+1次灭活苗）存在显着差异;而不同的疫苗免疫程序之间（2次活苗每次1头份+1次灭活苗组和2次灭活苗）差异不显着。母猪初乳PED-IgA OD值在不同的猪场之间（均免疫2次活苗每次1头份+1次灭活苗）差异不显着;而不同的疫苗免疫程序之间（2次活苗每次1头份+1次灭活苗组和2次灭活苗）差异显着。总体来说,母猪初乳IgA OD值在不同猪场间,数据更稳定,而不同的免疫程序之间,数值变化更大,更灵敏,可以用作猪场流行性腹泻的免疫情况的检测标指标3、猪流行性腹泻的活苗和灭活苗免疫母猪都能产生初乳IgA抗体,但是同样免疫次数的活苗产生的初乳抗体明显高于灭活苗产生的。比如:活苗2次组母猪初乳IgA OD的平均值为1.330,灭活苗2次组母猪初乳IgA OD的平均值为0.754。4、相同的PED的疫苗,以不同免疫方案免疫母猪,所产生的母猪初乳IgA存在明显得差异为:2次活苗每次2头份组>1次活苗5头份组>2次活苗每次1头份+1次灭活苗组>2次活苗每次1头份组>1次活苗每次1头份+1次灭活苗苗组>1次活苗1头份组。这为猪场对猪流行性腹泻的免疫提供了思路:1次免疫5头份,短时间就可以提升抗体水平,可以用来紧急免疫;2次免疫每次2头份的免疫方式可以产生最高的抗体水平,可以用于感染压力非常大的猪场的免疫;而2次活苗每次1头份+1次灭活苗的免疫可用用来做猪场的常规免疫程序。5、不同的猪场,相同的免疫方案（2次活苗每次1头份+1次灭活苗组）,母猪初乳PED-IgA OD有差异。6、初产和经产母猪,相同的PED免疫方案（2次活苗每次1头份+1次灭活苗组）进行免疫,初产母猪初乳IgA的OD平均值为1.157,而经产母猪乳汁IgA的OD值高达1.535。7、相同的免疫程序（2次活苗每次1头份+1次灭活苗组和2次灭活苗组）,不同公司产品间的差异不显着,如:A公司二联活+二联灭活组的母猪初乳IgA OD值为1.567;B公司三联活+组织灭活组的母猪初乳IgA OD值为1.537;C公司三联活+C公司二联灭活组的母猪初乳IgA OD值为1.539。综上所述,本研究通过开展不同免疫程序对产前母猪进行猪流行性腹泻疫苗的免疫,明确了对流行性腹泻的防控思路,找到了评价疫苗免疫和猪群状况的一种方法,从而用于猪场评价腹泻发生的风险和疫苗免疫后的效果,得出一种较好的疫苗免疫方式,这对PED的防控和监测具有非常重要的意义。
二、猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联灭活苗（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联灭活苗（论文提纲范文）
（1）致猪腹泻的冠状病毒病的研究进展（论文提纲范文）
| 1 猪流行性腹泻 |
| 1.1 病原 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 临床症状及病理变化 |
| 1.4 诊断方法 |
| 1.5 防治措施 |
| 2 猪传染性胃肠炎 |
| 2.1 病原 |
| 2.2 流行病学 |
| 2.3 临床症状及病理变化 |
| 2.4 诊断方法 |
| 2.5 防治措施 |
| 3 猪急性腹泻综合征 |
| 3.1 病原 |
| 3.2 流行病学 |
| 3.3 临床症状及病理变化 |
| 3.4 诊断方法 |
| 3.5 防治措施 |
| 4 展望 |
（2）规模化猪场流行性腹泻综合性防控措施的探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第1章 文献综述: 猪流行性腹泻研究进展 |
| 1.1 病原学 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 临床症状 |
| 1.4 病理变化 |
| 1.5 致病机理 |
| 1.6 诊断 |
| 1.7 预防和控制 |
| 1.8 猪流行性腹泻疫苗的研究进展 |
| 1.8.1 灭活疫苗的研究进展 |
| 1.8.2 活疫苗的研究进展 |
| 1.8.3 基因工程疫苗的研究进展 |
| 第2章 某公司下属规模化猪场仔猪流行性腹泻流行、诊断与母猪初乳中IgA抗体水平的监测 |
| 1.1 材料来源场相关情况介绍 |
| 1.1.1 各牧场不同胎次母猪存栏情况 |
| 1.1.2 各牧场日常护理方案 |
| 1.1.3 各牧场猪流行性腹泻的免疫程序 |
| 1.2 材料 |
| 1.2.1 病料来源 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 1.2.3 主要仪器 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 临床症状观察 |
| 1.3.2 病理解剖 |
| 1.3.3 实验室分析检测 |
| 1.3.4 初乳的采集 |
| 1.3.5 乳样抗体的ELISA检测 |
| 1.4 结果 |
| 1.4.1 下属各规模化猪场仔猪流行性腹泻的流行情况 |
| 1.4.2 临床症状 |
| 1.4.3 病死猪剖检病变 |
| 1.4.4 胶体金检测 |
| 1.4.5 RT-PCR鉴定 |
| 1.4.6 S1基因测序与比对结果 |
| 1.4.7 初乳中IgA抗体阳性率分析 |
| 1.4.8 初乳中IgA抗体平均值分析 |
| 1.4.9 初乳中IgA抗体离散度分析 |
| 1.4.10 小结 |
| 1.5 讨论 |
| 第3章 示范场猪流行性腹泻综合性防制措施的研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 样品来源 |
| 1.1.2 试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 优化生物安全措施 |
| 1.2.2 优化免疫程序 |
| 1.2.3 加强日常保健与消毒 |
| 1.2.4 突发疫情处置 |
| 1.3 试验结果 |
| 1.3.1 生物安全措施实行状况 |
| 1.3.2 优化免疫后母猪初乳中IgA抗体OD值 |
| 1.3.3 优化免疫后母猪初乳中IgA抗体离散度 |
| 1.3.4 防控效果 |
| 1.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
（3）福建省某猪场猪流行性腹泻的检测与防治（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 PED研究进展 |
| 1.1 病原特征 |
| 1.2 PEDV基因组结构与功能 |
| 1.3 流行病学 |
| 1.4 临床表现 |
| 1.5 致病机制 |
| 1.6 诊断方法 |
| 1.6.1 病毒分离 |
| 1.6.2 血清学试验 |
| 1.6.3 分子生物学检测 |
| 1.7 防治措施 |
| 1.7.1 预防 |
| 1.7.2 治疗 |
| 1.7.3 制定科学的免疫程序 |
| 1.7.4 检测淘汰措施 |
| 第二章 发病猪场猪流行性腹泻的诊断 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 背景 |
| 1.2 材料 |
| 1.2.1 样品采集 |
| 1.2.2 试剂耗材 |
| 1.2.3 仪器 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 核酸提取及反转录 |
| 1.3.2 RT-PCR检测 |
| 1.3.3 不同阶段猪群PEDV病毒载量分析 |
| 1.3.4 水质检测 |
| 1.3.5 数据的处理与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 临床症状观察及剖检病理变化 |
| 2.2 猪流行性腹泻RT-PCR检测结果 |
| 2.3 猪传染性胃肠炎RT-PCR检测结果 |
| 2.4 猪轮状病毒RT-PCR检测 |
| 2.5 猪代尔塔冠状病毒RT-PCR检测 |
| 2.6 猪瘟荧光定量PCR检测结果 |
| 2.7 猪蓝耳荧光定量PCR检测结果 |
| 2.8 猪伪狂犬荧光定量PCR检测结果 |
| 2.9 猪圆环荧光定量PCR检测结果 |
| 2.10 不同阶段猪群PEDV病毒载量分析 |
| 2.11 水质检测 |
| 3 讨论 |
| 第三章 福建某猪场PEDV同源性分析及防控 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 病料 |
| 1.1.2 材料 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 PCR检测 |
| 1.2.2 PCR产物测序分析 |
| 1.2.3 疫情处理 |
| 1.2.4 荧光定量PCR分析处理后哺乳仔猪粪便中的病毒情况 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 PCR产物测序结果 |
| 2.2 紧急免疫效果 |
| 3.讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）抗PEDV N蛋白单克隆抗体的制备及PEDV灭活疫苗免疫攻毒保护效果的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| 文献综述 |
| 1 流行病学 |
| 1.1 临床流行病学 |
| 1.2 分子流行病学 |
| 2 PEDV病原学 |
| 2.1 PEDV分类 |
| 2.2 形态结构 |
| 2.3 理化性质 |
| 2.4 细胞培养特性 |
| 2.5 基因组结构 |
| 2.5.1 ORF3基因与相关蛋白功能 |
| 2.5.2 PEDV ORF1ab基因与相关蛋白功能 |
| 2.5.3 PEDV S基因与编码蛋白功能 |
| 2.5.4 M基因与相关蛋白功能 |
| 2.5.5 PEDV E基因与编码蛋白功能 |
| 2.5.6 PEDV N基因与编码蛋白功能 |
| 3 PEDV的病理变化与发病机理 |
| 4 变异株的流行特征 |
| 5 PED的诊断技术 |
| 5.1 病毒的分离鉴定 |
| 5.2 血清学检测方法 |
| 5.3 病毒核酸检测 |
| 6 疫苗研究进展 |
| 6.1 灭活疫苗 |
| 6.2 弱毒疫苗 |
| 6.3 联苗 |
| 6.4 基因工程苗 |
| 7 单抗在PEDV诊断中的应用 |
| 引言 |
| 试验1 基于PEDVN蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 病毒和血清 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 引物设计与合成 |
| 1.2.2 PEDV N基因的扩增及表达载体的构建 |
| 1.2.3 重组N(rN)蛋白的表达、纯化及western blot分析 |
| 1.2.4 间接ELISA方法条件的优化 |
| 1.2.5 阴性样品临界值的确定 |
| 1.2.6 特异性分析 |
| 1.2.7 敏感性分析 |
| 1.2.8 重复性分析 |
| 1.2.9 临床样品检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 PEDV N基因的扩增及表达载体的构建 |
| 2.2 rN蛋白的表达、纯化及western blot分析 |
| 2.3 间接ELISA方法优化结果 |
| 2.4 阴性样品临界值的确定 |
| 2.5 特异性试验结果 |
| 2.6 敏感性试验结果 |
| 2.7 重复性试验结果 |
| 2.8 临床样品检测结果 |
| 3 讨论与分析 |
| 试验2 抗PEDV N蛋白单克隆抗体的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞、病毒和实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 免疫抗原的制备 |
| 1.2.2 小鼠的免疫 |
| 1.2.3 免疫小鼠血清效价的检测 |
| 1.2.4 建立杂交瘤细胞株 |
| 1.2.4.1 先制备饲养细胞 |
| 1.2.4.2 SP2/0细胞的准备 |
| 1.2.4.3 脾细胞的制备 |
| 1.2.4.4 细胞融合 |
| 1.2.4.5 阳性杂交瘤细胞的筛选 |
| 1.2.4.6 亚型的鉴定 |
| 1.2.4.7 亚克隆 |
| 1.2.5 杂交瘤细胞特异性检测 |
| 1.2.6 杂交瘤细胞稳定性检测 |
| 1.2.7 腹水的制备及纯化 |
| 1.2.8 纯化腹水的效价测定 |
| 1.2.9 纯化腹水的特异性检测 |
| 1.2.10 纯化腹水的稳定性检测 |
| 1.2.11 阻断ELISA方法的初步鉴定 |
| 2 结果 |
| 2.1 小鼠效价检测结果 |
| 2.2 杂交瘤细胞株的建立 |
| 2.3 单抗亚型的鉴定 |
| 2.4 杂交瘤细胞特异性检测 |
| 2.5 杂交瘤细胞稳定性检测 |
| 2.6 腹水的制备及纯化 |
| 2.7 纯化腹水的效价测定 |
| 2.8 纯化腹水的特异性测定 |
| 2.9 纯化腹水的稳定性测定 |
| 2.10 阻断ELISA方法的鉴定 |
| 3 讨论与分析 |
| 试验3 PEDV(变异毒株)灭活疫苗免疫攻毒保护效果的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 病毒与试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 仔猪攻毒试验 |
| 1.2.2 妊娠母猪攻毒仔猪获得免疫保护试验 |
| 1.2.3 仔猪腹泻发病指标 |
| 2 结果 |
| 2.1 仔猪攻毒实验 |
| 2.2 妊娠母猪攻毒仔猪获得免疫保护试验 |
| 3 讨论与分析 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 个人简历 |
（5）不同免疫程序对猪流行性腹泻疫苗免疫效果的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 主要仪器与设备 |
| 1.1.2 主要试剂和疫苗 |
| 1.2 试验猪场与试验设计 |
| 1.3 检测指标与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同猪场母猪乳汁中IgA抗体水平 |
| 2.2 不同免疫程序的IgA抗体阳性率与阳性平均OD值 |
| 3 讨论 |
（6）TGEV CN12株自然传代与化学诱变传代的遗传变异及生物特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1 前言 |
| 1.1 概况 |
| 1.2 猪传染性胃肠炎病毒培养条件研究 |
| 1.3 理化性质 |
| 1.4 分子生物学特征 |
| 1.4.1 基因组结构特征 |
| 1.4.2 主要结构蛋白及其功能 |
| 1.5 致病机理 |
| 1.6 流行病学特点 |
| 1.7 临床症状 |
| 1.8 病理变化 |
| 1.9 检测方法 |
| 1.9.1 RT-PCR方法 |
| 1.9.2 病毒分离与鉴定 |
| 1.9.3 血清学方法 |
| 1.9.4 核酸探针杂交技术 |
| 1.9.5 免疫电镜法 |
| 1.10 猪传染性胃肠炎病毒的疫苗研究进展 |
| 1.11 本研究的目的与意义 |
| 2 TGEV CN12株连续传代,繁殖条件优化与135代、200代毒株全基因组测序及变异分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 病毒、细胞与相关试剂 |
| 2.1.2 分子克隆相关试剂与材料 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 PK-15细胞培养 |
| 2.1.5 病毒传代 |
| 2.1.6 繁殖条件优化实验 |
| 2.1.7 病毒总RNA提取 |
| 2.1.8 全基因组分片段PCR扩增 |
| 2.1.9 PCR产物回收与纯化 |
| 2.1.10 回收产物连接Pmd18-T载体 |
| 2.1.11 大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备 |
| 2.1.12 连接产物转化感受态细胞 |
| 2.1.13 PCR筛选阳性克隆 |
| 2.1.14 序列测定与比较分析 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 病毒培养 |
| 2.2.2 繁殖条件优化实验结果 |
| 2.2.3 病毒TCID_(50)测定结果 |
| 2.2.4 135代、200代测序结果 |
| 2.3 讨论与结论 |
| 3 病毒纯净性检测及病毒繁殖确定性检测 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 PCR检测相关试剂 |
| 3.1.2 间接荧光抗体实验与中和抗体实验相关试剂 |
| 3.1.3 病毒总DNA提取 |
| 3.1.4 病毒总RNA提取 |
| 3.1.5 引物的设计与合成 |
| 3.1.6 cDNA的合成 |
| 3.1.7 基因片段的PCR扩增 |
| 3.1.8 TGEV CN12株间接荧光抗体检测 |
| 3.1.9 抗体中和实验 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 外源病毒PCR检测结果 |
| 3.2.2 间接荧光抗体检测结果 |
| 3.2.3 抗体中和实验结果 |
| 3.3 讨论与结论 |
| 4 TGEV CN12株诱变剂诱导变异分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 诱变剂与诱变毒株 |
| 4.1.2 细胞培养与病毒传代相关试剂 |
| 4.1.3 分子克隆相关试剂与材料 |
| 4.1.4 主要仪器设备 |
| 4.2 病毒培养 |
| 4.3 病毒RNA提取、基因扩增及全基因测序 |
| 4.3.1 病毒总RNA提取 |
| 4.3.2 cDNA的合成 |
| 4.3.3 各基因片段PCR扩增 |
| 4.3.4 PCR产物回收与纯化 |
| 4.3.5 回收产物连接Pmd18-T载体 |
| 4.3.6 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 |
| 4.3.7 连接产物转化感受态细胞 |
| 4.3.8 PCR筛选阳性克隆 |
| 4.3.9 序列测定与比较分析 |
| 4.4 诱变剂诱导毒株(TGEV M株)外源病毒检测 |
| 4.5 实验结果 |
| 4.5.1 诱变剂诱导毒株(TGEV M株)全基因序列分析 |
| 4.5.2 诱变剂诱导毒株(TGEV M株)外源病毒检测结果 |
| 4.6 讨论与结论 |
| 5 总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（7）猪病毒性腹泻的流行情况调查及其疫苗免疫抗体检测（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写词 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪病毒性腹泻病原学及其流行病学的研究进展 |
| 1.1 PEDV及其致病机理 |
| 1.2 TGEV及其致病机理 |
| 1.3 PoRV及其致病机理 |
| 2 猪PED、TGE和PoR流行现状 |
| 2.1 PED国内外流行现状 |
| 2.2 TGE国内外流行现状 |
| 2.3 PoR国内外流行现状 |
| 3 猪病毒性腹泻的诊断方法 |
| 3.1 临床诊断 |
| 3.2 抗原检测技术 |
| 3.3 免疫血清学检测技术 |
| 3.4 分子生物学检测技术 |
| 4 猪病毒性腹泻疫苗的研究进展 |
| 4.1 灭活苗 |
| 4.2 弱毒疫苗 |
| 4.3 联苗 |
| 4.3.1 PEDV、TGEV二联苗 |
| 4.3.2 TGEV、PEDV、PoRV三联苗 |
| 4.4 亚单位疫苗 |
| 4.5 合成肽疫苗 |
| 4.6 重组活载体疫苗 |
| 4.7 核酸疫苗 |
| 5 本研究的目的与意义 |
| 第二章 福建省规模猪场PED、TGE和PoR的流行情况调查 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 病料来源 |
| 1.1.2 主要试验仪器设备 |
| 1.1.3 主要试验试剂 |
| 1.1.4 引物设计 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 RNA提取 |
| 1.2.3 RT-PCR |
| 1.2.4 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 第三章 猪病毒性腹泻疫苗的免疫抗体检测 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物及试验场地 |
| 1.1.2 主要试验试剂及批号 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 疫苗组合、免疫时间及血样收集 |
| 1.2.2 猪PEDV、TGEV和PoRV的ELISA抗体检测方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 母猪PED-IgG抗体检测结果和分析 |
| 2.1.1 不同疫苗组合PED-IgG抗体检测结果和分析 |
| 2.1.2 PED-IgG抗体水平消长情况 |
| 2.2 母猪TGE-IgG抗体检测结果和分析 |
| 2.2.1 不同疫苗组合TGE-IgG抗体检测结果与分析 |
| 2.2.2 TGE-IgG抗体水平消长情况 |
| 2.3 母猪PoR-IgG抗体检测结果和分析 |
| 2.3.1 不同疫苗组合PoR-IgG抗体检测结果和分析 |
| 2.3.2 PoR-IgG抗体水平消长情况 |
| 3 讨论 |
| 全文结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻两种病毒特性探索（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 主要耗材 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要设备 |
| 1.4 主要细胞 |
| 1.5 生产毒株 |
| 1.6 检测用毒株 |
| 2 典型发病。 |
| 2 方法 |
| 2.1 PK15/VERO细胞的驯化和培养 |
| 2.1.1 PK15和VERO细胞复苏 |
| 2.1.2 病毒敏感细胞的筛选 |
| 2.2 猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻病毒液浓缩及病毒含量测定 |
| 2.2.1 浓缩机清洗 |
| 2.2.2 浓缩PEDV |
| 2.2.3 浓缩TGEV |
| 2.2.4 浓缩机清洗及保存 |
| 2.2.5 样品除菌过滤 |
| 2.2.6 病毒含量测定 (测TCID50) |
| 2.3 PEDV/TGEV保存实验 |
| 2.3.1 PEDV和TGEV制备 |
| 2.3.2 病毒含量 (TCID50) 测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 PK15/VERO筛选结果 |
| 3.1.1 PK15和VERO细胞复苏结果 |
| 3.1.2 病毒敏感细胞的筛选结果 |
| 3.2 PEDV/TGEV液浓缩实验结果 |
| 3.3 PEDV/TGEV液保存实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 4.1 小结 |
| 4.2 讨论 |
（9）猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗的工艺摸索（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 猪传染性胃肠炎及流行性腹泻概述 |
| 2 猪传染性胃肠炎及其疫苗研究现状 |
| 2.1 流行病学 |
| 2.2 病原学 |
| 2.3 临床症状 |
| 2.4 猪传染性胃肠炎疫苗 |
| 3 猪流行性腹泻及其疫苗研究现状 |
| 3.1 流行病学 |
| 3.2 病原学 |
| 3.3 临床症状 |
| 3.4 猪流行性腹泻疫苗 |
| 4 猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联苗研究进展 |
| 4.1 常规疫苗 |
| 4.2 基因工程疫苗 |
| 5 研究目的及意义 |
| 第二部分 猪传染性胃肠炎猪流行性腹泻二联灭活疫苗工艺摸索 |
| 第一章 细胞驯化培养和PEDV/TGEV两种病毒特性探索实验 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要耗材 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要设备 |
| 1.1.4 主要细胞 |
| 1.1.5 生产毒株 |
| 1.1.6 检测用毒株 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 PK15/VERO细胞的驯化和培养 |
| 1.2.2 猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻病毒液浓缩及病毒含量测定 |
| 1.2.3 PEDV/TGEV保存实验 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 PK15/VERO筛选结果 |
| 1.3.2 PEDV/TGEV液浓缩实验结果 |
| 1.3.3 PEDV/TGEV液保存实验结果 |
| 1.4 小结与讨论 |
| 1.4.1 小结 |
| 1.4.2 讨论 |
| 第二章 浓缩TGEV、PEDV不同佐剂免疫效果检测 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要耗材 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要细胞和病毒 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.1.5 主要设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 细胞制备 |
| 2.2.2 TGEV和PEDV病毒制备 |
| 2.2.3 效价检测 |
| 2.2.4 病毒浓缩 |
| 2.2.5 病毒的灭活 |
| 2.2.6 灭活检验 |
| 2.2.7 配制样品见下表 |
| 2.2.8 成品检验 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 2.4.1 小结 |
| 2.4.2 讨论 |
| 第三章 免疫增强剂对TGEV\PEDV灭活苗免疫效果的影响 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要耗材 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要细胞 |
| 3.1.4 主要病毒 |
| 3.1.5 实验动物 |
| 3.1.6 主要设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 细胞制备 |
| 3.2.2 TGEV和PEDV制备 |
| 3.2.3 病毒含量检测 |
| 3.2.4 病毒浓缩 |
| 3.2.5 病毒的灭活 |
| 3.2.6 灭活检验 |
| 3.2.7 配制样品 |
| 3.2.8 物理性状 |
| 3.2.9 效力检验 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 3.4.1 小结 |
| 3.4.2 讨论 |
| 第四章 生产工艺验证并固化 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 主要耗材 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 细胞 |
| 4.1.4 病毒 |
| 4.1.5 免疫增强剂 |
| 4.1.6 实验动物 |
| 4.1.7 设备 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 对第五章的部分工艺进行验证 |
| 4.2.2 免疫增强剂不同剂量免疫实验 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 小结与讨论 |
| 4.4.1 小结 |
| 4.4.2 讨论 |
| 第五章 PEDV强毒攻毒保护实验 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 主要耗材 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 病毒 |
| 5.1.4 实验动物 |
| 5.1.5 设备 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 种毒繁殖 |
| 5.2.2 苗毒制备 |
| 5.2.3 病料采集 |
| 5.2.4 样品制备 |
| 5.2.5 病毒灭活 |
| 5.2.6 灭活检验及配苗 |
| 5.2.7 成品检验 |
| 5.2.8 效力检验 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 小结与讨论 |
| 5.4.1 小结 |
| 5.4.2 讨论 |
| 第六章 TGEV、PEDV高倍浓缩实验 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 主要材料 |
| 6.1.2 主要试剂 |
| 6.1.3 细胞 |
| 6.1.4 病毒液 |
| 6.1.5 设备 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 Vero及PK15单层细胞的制备 |
| 6.2.2 病毒液制备 |
| 6.2.3 病毒含量测定 |
| 6.2.4 病毒浓缩 |
| 6.2.5 病毒灭活 |
| 6.2.6 灭活检验 |
| 6.2.7 成品检验 |
| 6.3 结果 |
| 6.4 小结与讨论 |
| 6.4.1 小结 |
| 6.4.2 讨论 |
| 第三部分 全文小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）猪流行性腹泻疫苗不同免疫程序抗体水平比较（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 猪流行性腹泻概况 |
| 1.1.1 PED的流行情况 |
| 1.1.2 猪感染PED的临床症状和病理变化 |
| 1.1.3 病毒的理化特性 |
| 1.1.4 病毒的培养特性 |
| 1.2 PEDV的基因组成 |
| 1.2.1 PEDV的基因组结构 |
| 1.2.2 PEDV的结构蛋白及功能 |
| 1.3 猪流行性腹泻诊断的研究 |
| 1.3.1 微量血清中和试验 |
| 1.3.2 胶体金免疫层析诊断技术 |
| 1.3.3 酶联免疫吸附试验（ELISA） |
| 1.3.4 RT-PCR法 |
| 1.3.5 荧光定量PCR法 |
| 1.3.6 免疫荧光法 |
| 1.3.7 免疫电镜法 |
| 1.3.8 环介导等温( RT-LAMP) 技术 |
| 1.4 猪流行性腹泻疫苗的研究 |
| 1.4.1 PED组织灭活苗和细胞灭活苗 |
| 1.4.2 PED弱毒苗 |
| 1.4.3 PED-TGE二联苗 |
| 1.4.4 基因疫苗 |
| 1.5 研究目的意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 材料和试剂 |
| 2.1.2 主要实验仪器 |
| 2.2 实验内容 |
| 2.2.1 评价疫苗免疫效果指标的研究 |
| 2.2.2 活苗不同免疫方案之间母猪初乳PED-IgA抗体比较的研究 |
| 2.2.3 活苗和灭活疫苗组合方案之间母猪初乳PED-IgA抗体比较的研究 |
| 2.3 猪流行性腹泻IgG和IgA OD值的检测方法 |
| 2.3.1 血清IgG抗体OD值的检测方法 |
| 2.3.2 血清IgA抗体和乳汁IgA抗体OD值的检测方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 评价疫苗免疫效果的指标的试验结果 |
| 3.1.1 免疫1次活苗后母猪血清IgG和IgA的关系 |
| 3.1.2 不同免疫方案之间母猪血清PED-IgG和PED-IgA的差异 |
| 3.1.3 母猪初乳和所产小猪血清PED-IgG和PED-IgA OD值的差异 |
| 3.1.4 母猪免疫后血清和初乳PED-IgA OD值的差异 |
| 3.2 活苗不同免疫方案之间母猪初乳PED-IgA抗体比较的结果 |
| 3.2.1 低剂量三联活疫苗免疫母猪1次和2次的初乳PED-IgA OD值的差异 |
| 3.2.2 高剂量三联活疫苗免疫母猪后初乳PED-IgA OD值的差异 |
| 3.2.3 两个厂家不同剂量活苗免疫2次后母猪初乳IgA OD值的差异 |
| 3.3 活苗和灭活疫苗组合方案母猪初乳的IgA结果 |
| 3.3.1 不同猪场1次活苗+1 次灭活疫苗初乳PED-IgA OD值的差异 |
| 3.3.2 不同公司和猪场活苗+灭活苗各免疫1次初乳IgA OD值的差异 |
| 3.3.3 母猪活苗和灭活苗不同免疫次数初乳PED-IgA OD值的差异 |
| 3.3.4 两次及以上不同组合免疫方案母猪初乳PED-IgA OD值的差异 |
| 3.3.5 组合方案免疫初产和经产母猪初乳PED-IgA OD值得差异 |
| 3.3.6 不同毒株的活苗和不同毒株的组织灭活苗之间的差异 |
| 4 讨论与结论 |
| 4.1 讨论 |
| 4.1.1 评价疫苗免疫效果的指标的确定 |
| 4.1.2 弱毒疫苗不同免疫方案免疫母猪，母猪初乳PED-IgA抗体的差异分析 |
| 4.1.3 弱毒和灭活疫苗组合方案母猪初乳PED-IgA抗体的差异分析 |
| 4.2 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
四、猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联灭活苗（论文参考文献）
- [1]致猪腹泻的冠状病毒病的研究进展[J]. 李仕林,王雅雯,姜水兵,郭良帅,努尔麦麦提·麦麦提敏,王新新,焦海宏. 现代畜牧兽医, 2021(02)
- [2]规模化猪场流行性腹泻综合性防控措施的探讨[D]. 吴中彬. 扬州大学, 2021(02)
- [3]福建省某猪场猪流行性腹泻的检测与防治[D]. 吴龙成. 福建农林大学, 2020(06)
- [4]抗PEDV N蛋白单克隆抗体的制备及PEDV灭活疫苗免疫攻毒保护效果的研究[D]. 杨朋霞. 河南农业大学, 2020(06)
- [5]不同免疫程序对猪流行性腹泻疫苗免疫效果的影响[J]. 王艳丰,张丁华,王书丽,刘守铉,李爱心,桂启胜. 中国兽医杂志, 2018(06)
- [6]TGEV CN12株自然传代与化学诱变传代的遗传变异及生物特性研究[D]. 罗华林. 华南农业大学, 2018(08)
- [7]猪病毒性腹泻的流行情况调查及其疫苗免疫抗体检测[D]. 曾宪煜. 福建农林大学, 2018(01)
- [8]猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻两种病毒特性探索[J]. 谭海军,崔水保,谢秋梅. 江西畜牧兽医杂志, 2017(04)
- [9]猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗的工艺摸索[D]. 谭海军. 江西农业大学, 2017(03)
- [10]猪流行性腹泻疫苗不同免疫程序抗体水平比较[D]. 曾彬. 华南农业大学, 2017(08)