一、纤维粘连蛋白对培养的自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响（论文文献综述）
宋潼潼[1]（2021）在《肠道菌群代谢产物丁酸调控心肌梗死大鼠胶原表达的机制研究》文中研究表明心肌梗死后修复与纤维化是影响心肌梗死预后的关键因素。心肌梗死早期胶原纤维的形成可防止心脏破裂,但胶原的过度沉积可导致心肌纤维化,影响心肌的收缩及舒张功能,最终导致心力衰竭甚至死亡。因此,寻找梗死后心肌胶原沉积的调控机制成为人们关注的热点之一。近年来研究发现,肠道菌群作为机体的“内分泌器官”,其菌群结构与代谢产物可能参与影响心血管疾病过程中心肌结构与功能。肠道菌群可能是干预心肌梗死的重要驱动因素之一,肠道菌群失衡可能会增加心肌梗死的严重程度,并导致预后不良。然而,联系肠道菌群参与心肌梗死后胶原纤维组织形成中的通讯机制尚未阐明。肠道菌群通过多种生化信号和代谢产物与宿主远隔器官进行信息传递。短链脂肪酸（如丁酸、丙酸和乙酸）是肠道菌群分解膳食纤维生成的主要功能性代谢产物,参与机体生物学功能;其中丁酸通过与受体结合或抑制组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases,HDACs）的活性影响机体功能。本实验室前期研究发现,组蛋白去乙酰化酶抑制剂可减小心肌梗死大鼠心肌梗死面积。我们推测肠道菌群可能通过丁酸等代谢产物抑制HDACs活性,影响心肌梗死后胶原表达,在心肌梗死过程中发挥关键作用。实验目的:探究肠道菌群对心肌梗死大鼠心肌组织胶原表达的影响;明确肠道菌群代谢产物丁酸通过肠心轴对心肌梗死大鼠胶原表达的影响;筛选及验证心肌梗死后肠道菌群代谢产物丁酸基于HDACs的作用靶点。实验方法:1.明确肠道菌群对心肌梗死后胶原表达的影响。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法建立心肌梗死模型,抗生素混合物（Antibiotic cocktail,ABX）处理抑制肠道菌群,在心肌梗死后的第7、14、21和28天收集大鼠的粪便样本,通过16S r RNA测序检测肠道菌群多样性、组成及丰度的改变。通过HE染色方法评估心肌梗死后心肌组织的损伤,天狼猩红染色法检测心肌胶原的表达,Western blot和免疫组化方法分析胶原相关蛋白表达。2.观察肠道菌群代谢产物丁酸对心肌梗死后胶原表达的影响。应用GC-MS技术测定大鼠血清和心肌组织中短链脂肪酸（丁酸、丙酸和乙酸）含量,明确肠道菌群代谢产物丁酸与肠心轴的关系。通过HE染色方法评估心肌梗死后心肌组织的损伤,天狼猩红染色法检测心肌中的胶原表达,Western blot和免疫组化实验分析胶原相关蛋白的表达水平。3.确定肠道菌群代谢产物丁酸基于HDACs调控心肌梗死后胶原沉积的作用靶点及机制。通过HDACs活性试剂盒检测大鼠血清及心肌组织中Ⅰ类HDACs活性动态变化,明确通过抑制产丁酸菌等肠道菌群降低丁酸浓度对HDACs活性的影响;同时给予TSA作为HDACs抑制剂的阳性对照药物,确定丁酸是否通过抑制HDACs活性而发挥作用;采用转录组学筛选肠道菌群代谢产物丁酸通过HDACs调控的靶点基因及通路,在心肌梗死大鼠动物模型和成纤维细胞系NIH3T3细胞的氧糖剥夺模型中验证差异基因。实验结果:1.肠道菌群影响心肌梗死后胶原的表达大鼠心肌梗死后第7、14、21和28天肠道菌群结构发生明显改变。分析肠道菌群在门和科水平上的组成发现,心肌梗死后第14天大鼠肠道菌群的厚壁菌门/拟杆菌门（Firmicutes/Bacteroidetes,F/B）比值显着增加（p<0.05）;分析科水平上菌群的动态变化发现,拟杆菌科、消化链球菌科和苏黎世杆菌科在心肌梗死后丰度显着增加（p<0.05）;而产碱菌科和普雷沃氏菌科丰度显着降低（p<0.05）。通过LEf Se分析心肌梗死后不同时间点变化最明显的肠道菌群发现,心肌梗死后第14天产碱菌科和普雷沃氏菌科丰度显着降低,而变形菌科、韦荣球菌科和链球菌科主要在第21天发生改变,第14天和第21天是肠道菌群改变的关键时间点。在这些改变的菌群中,普雷沃氏菌科和毛螺旋菌科的菌群间接参与丁酸的产生。HE、天狼猩红染色、Western blot和免疫组化实验结果表明,梗死后第0至28天心肌组织损伤逐渐加重,胶原沉积增加,肉芽组织和瘢痕组织逐步形成,心功能降低;抑制肠道菌群后,在心肌梗死后第14、21和28天,Collagen III、Collagen I和alpha-SMA的表达水平升高,胶原沉积、肉芽组织及瘢痕组织的形成增加,心功能进一步降低。且在心肌梗死后第14天和21天为改变最显着的时间点。提示抑制包括产丁酸菌在内的肠道菌群可通过增加心肌梗死后胶原表达,增加肉芽组织和瘢痕组织形成。2.肠道菌群代谢产物丁酸通过肠心轴对心肌梗死后胶原表达的影响大鼠心肌梗死后第14天和21天血清和心肌组织丁酸和丙酸含量均显着降低（p<0.05）;抑制包括产丁酸菌在内的肠道菌群后,进一步降低血清和心肌组织丁酸浓度（p<0.05）;术前饮水给予大鼠丁酸钠,显着升高血清和心肌组织样本中丁酸的含量（p<0.05）,表明肠道菌群产生的丁酸与血清丁酸和心肌组织丁酸的含量相关。提示肠道菌群代谢产物丁酸可能介导肠心轴。HE、天狼猩红染色、Western blot和免疫组化实验结果表明,给予丁酸钠降低Collagen III、Collagen I和alpha-SMA的表达水平,减少炎性细胞浸润、胶原沉积,以及肉芽组织和瘢痕组织的形成;抑制心肌梗死大鼠肠道菌群且补充丁酸,可降低心肌梗死所引起Collagen III、CollagenⅠ和alpha-SMA表达水平的升高,减少肉芽和瘢痕组织形成,因此,肠道菌群代谢产物丁酸可能通过介导肠心轴影响心肌梗死后胶原的表达。3.肠道菌群代谢产物丁酸抑制HDACs活性影响胶原表达的机制大鼠心肌梗死后第14和21天血清及心肌组织中Ⅰ类HDACs活性增加;抑制肠道菌群后,血清及心肌组织中Ⅰ类HDACs活性进一步升高（p<0.05）;心肌梗死大鼠抑制肠道菌群且补充丁酸后,Ⅰ类HDACs活性显着降低。HE、天狼猩红染色、Western blot和免疫组化实验结果表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对Collagen III、Collagen I和alpha-SMA表达、胶原沉积、肉芽组织及瘢痕组织形成、改善心功能的作用同丁酸钠一致,提示肠道菌群的代谢产物丁酸通过抑制HDACs活性减少胶原沉积、肉芽组织及瘢痕组织的形成,改善心功能。转录组学结果表明,丁酸钠通过HDACs的调控影响心肌梗死后的共同差异表达基因主要为Col3a1、C3ar1、Col1a2和Tgfb3,主要富集的通路为ECM-受体交互、松弛素信号通路,扩张型心肌病,肥厚性心肌病信号通路及补体系统等途径,均与胶原表达相关。由此进一步提示了丁酸发挥抑制HDACs作用,抑制心肌梗死后胶原表达。验证差异最明显的基因C3ar1和Tgf-beta发现,心肌梗死后C3AR1和TGF-beta的蛋白表达水平显着升高（p<0.001）。抑制心肌梗死大鼠肠道菌群且补充丁酸钠或TSA显着降低C3AR1和TGF-beta的蛋白表达水平（p<0.01）。在细胞实验中给予C3AR1的激动剂TLQP21或通过C3AR1si RNA干扰C3AR1结果发现,组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠或TSA可能通过抑制C3AR1表达抑制OGD诱导的NIH3T3成纤维细胞胶原表达的增加。实验结论:1.肠道菌群参与心肌修复过程,产丁酸菌的丰度在心肌梗死后显着降低。2.肠道菌群代谢产物丁酸可能通过介导肠心轴影响心肌梗死后心肌组织的胶原表达和心功能。3.肠道菌群代谢产物丁酸可通过调控HDACs活性,抑制心肌梗死后心肌组织的胶原表达,改善心功能。4.肠道菌群代谢产物丁酸基于抑制HDACs作用,调控C3AR1的表达,抑制成纤维细胞NIH3T3胶原的分泌。
孙敬辉[2]（2021）在《miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究》文中指出心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）是众多心血管疾病发展至后期常见的病理改变,常常引起心肌收缩和舒张功能障碍,是心室重构不断进展和不可逆的主要原因。MF的发病机制十分复杂,涉及到神经体液、生长因子、促炎性细胞因子和基因转录之间复杂的相互作用。心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）是MF最主要的效应细胞,可在缺血、炎性因子等促纤维化因素的刺激下分化为肌成纤维细胞。激活的肌成纤维细胞会分泌大量的细胞外基质蛋白,导致心室硬度增加,顺应性降低和心肌电信号传导异常,诱发难治性心力衰竭、恶性心律失常,严重影响心血管疾病的预后。目前MF的治疗尚缺乏特效药物,因此探寻MF发病机制的关键因子及安全可靠的治疗药物,对于MF的治疗刻不容缓。MircoRNAs（miRNAs）是一类在真核细胞中广泛表达的短链非编码RNA。它们可以直接与靶基因的3’UTR区域结合,诱导靶基因mRNAs分解或阻碍其翻译,从而调节多种生理功能和病理过程。miR-489在心肌细胞和CFs中广泛表达。在心肌细胞中miR-489过表达能够下调下游髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,myd88）的水平,减轻血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥厚。重要的是,miR-489转基因小鼠体内AngⅡ诱导的MF明显减轻,说明miR-489能够抑制AngⅡ诱导的MF,miR-489可能是治疗MF的一个潜在靶点。然而,miR-489在MF中的调控机制尚不清楚,尤其是在心肌梗死诱导的MF中miR-489是否也具有同样作用值得进一步研究。中医学中没有MF的直接论述,但MF是众多心血管疾病发展至后期的病理改变,是一种相对慢性渐进性病变。中医传统理论认为“久病多虚”、“久病多瘀”,因此治疗当以补气活血为法。人参是传统医学中补气的要药,具有补益元气,健脾补肺,安神益智等功效,以及抗心肌缺血、抗心律失常、抗动脉粥样硬化和抗纤维化等药理作用。人参皂苷Re是人参的主要活性成分之一,课题组前期研究发现,人参皂苷Re具有抗心肌梗死后MF的作用,并且可以调控Smad2/3的表达。既往研究证实,Smad3是miR-489的直接下游靶点,那么人参皂苷Re是否可以通过调节miR-489来发挥抗MF的作用,值得进行深入研究。本研究通过体外构建miR-489过表达和抑制的CFs模型,证实miR-489对MF和myd88/核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）信号通路具有调控作用。在此基础上,以人参皂苷Re为干预手段,通过结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死小鼠模型和AngⅡ干预的乳鼠原代CFs模型,观察人参皂苷Re的抗MF作用,并探讨人参皂苷Re对miR-489及其下游myd88/NF-κB通路的调控作用,为中医药抗MF,改善心血管疾病患者的预后提供科学依据。研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究目的:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic和inhibitor观察miR-489模拟物和抑制物对CFs表型分化、迁移和分泌等细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:提取乳鼠原代CFs,经波形蛋白免疫荧光鉴定纯度后,按照如下分组:（1）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs分为3组:正常组（Normal）、miR-489过表达组（mimic）、miR-489阴性对照组（mimic-NC）。（2）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 过表达组（AngⅡ+mimic）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+mimic-NC）。（3）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:正常组（Normal）、miR-489 抑制组（inhibitor）、miR-489阴性对照组（inhibitor-NC）。（4）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 抑制组（AngⅡ+inhibitor）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+inhibitor-NC）。采用qPCR技术检测miR-489 mimic转染的CFs中miR-489的表达水平,验证转染效果。采用Western blot技术检测各组中α-SMA的表达情况,观察CFs的分化情况;检测Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表达,观察CFs胶原蛋白的分泌情况;检测CFs中myd88、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况,观察miR-489的调控作用。结果:（1）经波形蛋白免疫荧光检测证实提取的CFs纯度在95%以上,符合实验要求。（2）与Normal组和mimic-NC组比较,mimic组miR-489的表达水平显着升高（P<0.01）,Normal组和mimic-NC组之间无显着性差异（P>0.05）,说明 miR-489 mimic 转染成功。与 Normal 组和 inhibitor-NC 组相比,inhibitor 组myd88表达显着上调（P<0.01）,Normal组和inhibitor-NC组之间无统计学差异（P>0.05）,说明miR-489 inhibitor转染成功。（3）在正常条件下培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中,miR-489过表达均能够显着抑制myd88、α-SMA、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达,降低p-NF-κB p65/p65的比值;抑制miR-489能够促进myd88、α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的表达,上调 p-NF-κBp65/p65 的比值。结论:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中miR-489过表达均能够抑制下游myd88/NF-κB通路的活化,减轻CFs的纤维化反应;抑制miR-489能够激活下游myd88/NF-κB信号通路,促进CFs的纤维化反应。这表明在生理和病理情况下CFs中miR-489均可调节myd88/NF-κB信号通路,改善心肌纤维化反应。研究二人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究目的:观察人参皂苷Re对急性心肌梗死后小鼠心功能、血清学标志物、组织病理学改变和相关基因蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Re改善梗死后MF的分子机制。方法:通过结扎左冠状动脉前降支构建C57BL/6小鼠心肌梗死后MF模型。小鼠被随机分为4组:假手术组（Sham）、模型组（Model）、低剂量人参皂苷Re组（L,19.5mg/kg/d）和高剂量人参皂苷Re组（H,39mg/kg/d）,每组10只。术后第二天开始灌胃给药,1次/天,连续灌胃四周。心脏超声检测各组小鼠左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（LVFS）,观察心功能情况;通过心重指数（HWI）、心胫比（HW/TL）以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达,观察心梗后心肌代偿性肥厚情况;通过ELISA方法检测血清中心肌损伤（CK-MB）、心力衰竭（BNP）、肝肾功能（ALT、S-Cr）和 RAAS（AngⅡ）等标记物的含量;通过HE和Masson染色,观察心梗后心肌组织及纤维化的病变情况;Western blot 检测 myd88、p-NF-κB p65、NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ等相关蛋白表达;qPCR技术检测miR-489和myd88的表达形况。结果:（1）与Sham组相比,Model组LVEF和LVFS显着减低（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组LVEF和LVFS明显升高（P<0.01）。（2）与Sham组比较,Model组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着升高（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着下降（P<0.05）,ALT 和 S-Cr 无明显变化（P>0.05）。（3）与 Sham 组比较,Model组HWI、HW/TL以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达显着升高（P<0.01）,给以低高剂量人参皂苷Re干预后,这些指标明显下降（P<0.05）。（4）与Sham组比较,Model组心肌结构排列紊乱,肌丝较粗,呈波状变化,伴有大量炎症细胞浸润和胶原蛋白沉积。给予人参皂苷Re干预后组织病理改变明显减轻。（5）与 Sham 组比较,Model 组 myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ的表达明显升高,miR-489的表达显着下调（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达明显降低,miR-489的表达显着上调（P<0.05）。以上检测中低高剂量人参皂苷Re组之间无统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够改善心肌梗死后小鼠的心脏功能,抑制心肌代偿性肥厚,减轻心肌缺血损伤和胶原蛋白沉积,改善组织病理学病变,且未发现明显肝肾毒性。其机制可能与调节心肌梗死后小鼠心肌中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究目的:采用AngⅡ诱导C57BL/6乳鼠原代CFs,观察人参皂苷Re对CFs分化、迁移和分泌等生物学行为的影响,并探讨其相关机制。方法:提取乳鼠原代CFs后,通过CCK-8法筛选人参皂苷Re的安全浓度范围。CFs被随机分为5组:正常组（Normal）、模型组（Model）和人参皂苷Re低、中、高剂量组。给以相应药物处理后,收集细胞进行相关检测。采用Transwell实验和划痕实验检测各组CFs的迁移情况;采用免疫荧光和Western blot技术检测α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达情况,观察CFs分化为肌成纤维细胞和胶原蛋白的分泌情况;通过qPCR技术和Western blot技术检测miR-489、myd88、NF-κB p65 和 p-NF-κBp65 的表达情况。结果:（1）经 CCK-8 法选定 50μmol/L、100μmol/L 和 200μmol/L 为人参皂苷Re的干预浓度。（2）与Normal组比较,Model组穿过Transwell小室的CFs数量显着增多,迁移距离明显增长（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能减少穿过Transwell小室的CFs数量,缩短迁移距离（P<0.01）。（3）与 Normal 组比较,Model 组α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量均明显升高（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能降低α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量（P<0.01）。（4）与Normal组比较,Model组miR-489水平显着降低,myd88的表达和p-NF-κB p65/p65比值显着升高（P<0.01）,低中高剂量人参皂苷Re均能抑制这种趋势（P<0.05）。以上检测中低中高剂量人参皂苷Re组之间未发现统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够抑制AngⅡ诱导的CFs迁移、表型分化和分泌等生物学行为的改变;其机制可能与调节AngⅡ诱导的CFs中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。
刘清霞[3]（2021）在《Alamandine通过MrgD受体抑制NOX4诱导自噬减轻肺纤维化》文中进行了进一步梳理背景Alamandine（ALA）及其受体Mas相关G蛋白耦合受体（MrgD）是最近被报导的肾素-血管紧张素系统（RAS）的新成分。ALA可由血管紧张素（1-7）（Ang（1-7））脱羧形成,也可以由血管紧张素转化酶2（ACE2）水解血管紧张素原A（Ang A）形成。ALA主要通过激活MrgD受体起作用,它的作用包括舒张血管、保护缺血再灌注心脏、抑制氧化应激、减轻心脏及肾脏纤维化等作用。然而,ALA对肺纤维化的作用及MrgD受体是否在肺成纤维细胞中表达目前尚不清楚。目的1、在小鼠原代成纤维细胞上验证ALA减轻AngⅡ诱导的肺成纤维细胞胶原沉积的假说及探讨相关通路。2、采用qPCR技术分析MrgD受体是否在成纤维细胞中表达。3、观察ALA在博来霉素（BLM）诱导的小鼠肺纤维化中的作用及探讨相关机制。方法1、采用第三至第五代C57/B小鼠原代肺成纤维细胞进行体外实验,Western blot法检测各组α-colllgen Ⅰ、CTGF、LC3B、NOX4、P62的蛋白水平;qPCR检测原代肺成纤维细胞MrgD mRNA的表达水平;试剂盒检测细胞H2O2;免疫荧光检测自噬流水平。2、体内实验采用气管内滴入BLM的方法构建C57/B小鼠肺纤维化的模型。28天后取下肺组织,control组、BLM组、BLM+ALA组及BLM+pirfenidone组分别进行HE染色观察肺组织损伤情况,Masson染色分析组织胶原的情况,Ashcroft score及masson进行肺纤维化半定量评分,免疫组化检测组织LC3B、NOX4、P62免疫强度,试剂盒检测组织H202及HYP的含量。3、采用SPSS22.0软件进行统计分析,以P<0.05表示有统计学意义。结果1、ALA减轻小鼠肺成纤维细胞胶原的沉积。ALA(10-7mol/L)预处理肺成纤维细胞,随后暴露于AngⅡ(10-7mol/L)24h,ALA能明显减少肺成纤维细胞α-collagen Ⅰ、CTGF的蛋白水平。2、ALA通过MrgD受体起作用。qPCR检测提示肺成纤维细胞MrgD mRNA的表达水平升高。加入MrgD受体抑制剂D-Pro7-Ang-（1-7）后ALA的抗纤维化作用明显被逆转。3、ALA通过抑制NOX4减轻肺纤维化。ALA(10-7mol/L)、NAC(10-3mol/L)、H202(5x10-5mol/L)分别预处理肺成纤维细胞后,随后加入 AngⅡ(10-7mol/L)作用24h,Control组α-collagenⅠ、NOX4蛋白表达量及H2O2浓度无明显升高,AngⅡ组上述指标明显升高,AngⅡ+ALA组明显低于AngⅡ组与AngⅡ+NAC组相近,与AngⅡ+H202组相反。4、ALA通过诱导自噬减轻肺纤维化。ALA(10-7mol/L)、rapamycin(10-6mol/L)、bafilommycicn A1(2.5x10-8mol/L,)分别预处理肺成纤维细胞1h,随后加入AngⅡ(10-7mol/L)作用 24h。AngⅡ组与control组比,α-collagenⅠ、P62、NOX4蛋白表达量明显增多,LC3BⅠ向LC3BⅡ转化明显减少,AngⅡ+ALA组较A即Ⅱ组α-collagenⅠ、P62、NOX4蛋白表达量明显减少,LC3BⅠ向LC3BⅠ转化增多,与AngⅡ+rapamycin组相同。加入自噬晚期抑制药物bafilomycicn A1后ALA诱导的自噬
罗郸[4]（2021）在《TRPC3参与老龄和自发性高血压大鼠心房纤维化的作用机制研究》文中研究表明目的:瞬时受体电位离子通道3（transient receptor potential 3channels,TRPC3）是一种非电压门控非选择性的阳离子通道,也是心脏纤维化和心房颤动（AF）发病的重要介质。心房纤维化诱导的心脏重塑主要基于细胞外基质（ECM）积累。TRPC3在心脏中的病理生理作用在很大程度上基于其在成纤维细胞中的表达和功能。因此,TRPC3被认为是促进心肌纤维化、结构重构和心律失常尤其是AF导致的细胞增殖和分化的关键因素。有研究表明,上调TRPC3的表达可以促进成纤维细胞分化为肌成纤维细胞,而抑制TRPC3可以减少ROS的产生,改善线粒体功能,进而减少AF的发生。在衰老和高血压患者中,TRPC3也可能参与了心房发生纤维化的过程,然而TRPC3通道是否在老龄及高血压心房纤维化过程中发生重要作用却并不清楚,因此本研究开展了以下的实验,以探讨TRPC3在老龄和高血压状态下参与心房纤维化形成的分子机制。方法::1、应用病理学方法和电镜技术检测老龄及高血压心脏的结构和功能的变化:（1）将实验大鼠分为WKY（Wistar）组（4月龄,4m-o,正常血压）、WKY组（24月龄,24m-o,正常血压）、SHR（Spontaneously hypertensive rats）组（4月龄,4m-o,高血压）和SHR组（24月龄,24m-o,高血压）,采用股动脉插管等方法进行血压、心率等一般情况测量;（2）通过心脏切片H&E染色、Masson染色和透射电镜成像法观察心肌组织病理学改变和超微结构改变;2、Western blotting技术检测WKY（4m-o、24m-o）和SHR（4m-o、24m-o）四组大鼠心房组织中TRPC3及纤维化生物标志物TGF-β1、Col-I（Collagen I）、Col-III（Collagen III）、AT1R（Angiotensin II type 1 receptor）、AT2R（Angiotensin II type 2 receptor）的表达情况。3、使用慢病毒TRPC3 RNAi感染心房成纤维细胞以干扰TRPC3的表达,然后对TGF-β1进行蛋白检测。4、TRPC3参与心房成纤维细胞的迁移和增殖:Transwell细胞侵袭实验和细胞划痕实验。5、使用Fura-2荧光染钙,采用酶标仪检测心房成纤维细胞的胞内钙变化,检测TRPC3选择性阻断剂Pyr3对血管紧张素2（AngⅡ）诱导的细胞内Ca2+释放的影响。6、Pyr3对AngⅡ诱导的细胞外基质蛋白沉积的影响:在新生大鼠心房成纤维细胞中,分别处理Ang II、Pyr3和Ang II+Pyr3联合用药,用Western blotting检测TRPC3、Col-I、Col-III、TGF-β1、periostin、p-Smad 2/3、Smad 2/3的表达情况。7、AngⅡ可能通过AT1R调节TRPC3的功能:在新生大鼠心房成纤维细胞中,分别处理Ang II、Ang II+缬沙坦（AT1受体选择性阻断剂）和Ang II+PD 123 319（AT2受体选择性阻断剂）联合用药,Western blotting检测TRPC3的表达变化。结果:1、老龄及高血压大鼠心房基本情况、心房肌组织病理和超微结构的变化:（1）体重:与WKY 4m-o组相比,WKY 24m-o和SHR 24m-o的体重均有明显增加,SHR 4m-o的体重无明显差异;（2）收缩压:与WKY4m-o（113.87±13.59,mm Hg）和WKY 24m-o（134.00±7.34,mm Hg）相比,SHR 4m-o（189.62±23.79,mm Hg）和SHR 24m-o（184.87±19.72,mm Hg）的收缩压显着升高（n=8,P<0.01）;（3）舒张压:与WKY 4m-o（91.75±26.47,mm Hg）和WKY 24m-o（94.25±10.87,mm Hg）相比,SHR4m-o（141.12±16.64,mm Hg）和SHR 24m-o（130.37±18.39,mm Hg）的舒张压显着升高（n=8,P<0.01）;（4）各组间心率和血糖无明显差异。（5）各组心房组织结构的病理学变化和超微结构的变化:与WKY 4m-o相比,H&E染色结果发现WKY 24m-o、SHR 4m-o和SHR 24m-o心房组织的细胞外基质（ECM）显着增加;同时心脏肌肉被细胞外基质分成更多的分支,每个分支之间的空间更宽,细胞核不对齐。在老龄和高血压大鼠心房组织切片使用Masson染色,结果发现与WKY 4m-o相比,WKY 24m-o、SHR 4m-o和SHR 24m-o的蓝色胶原明显增加,且电镜结果也表明,老龄及高血压大鼠细胞与细胞之间存在胶原原纤维。2.老龄及高血压大鼠心房肌TRPC3及纤维化生物标志物（如Col-I、Col-III、TGF-β1）的基因和蛋白表达均明显增加:（1）q RT-PCR结果显示:与WKY 4m-o组相比,老龄及高血压大鼠心房组织TRPC3 m RNA的相对表达量,WKY 24m-o组（0.98±0.06 vs 1.20±0.09）、SHR 4m-o组（0.98±0.06 vs 1.22±0.04）表达增加;与WKY 4m-o组相比,Col-I m RNA的相对表达量,WKY 24m-o（3.05±1.56 vs 12.35±2.13,P<0.05）、SHR 4m-o（3.05±1.56 vs 21.65±3.14,P<0.01）和SHR 24m-o（3.05±1.56 vs 13.15±2.56,P<0.05）均明显增加;同时与WKY 4m-o组相比,Col-III m RNA的表达变化,在WKY 24m-o组（1.36±0.58 vs 5.26±0.78,P<0.01）,SHR 4m-o组（1.36±0.58 vs 3.67±0.13,P<0.05）和SHR 24m-o组（1.36±0.58 vs 5.15±0.26,P<0.01）也明显增加;与WKY 4m-o（0.96±0.56）组相比,TGF-β1的m RNA水平,在WKY 24 m-o组（2.87±0.48,P<0.01）,SHR 4m-o组（1.93±0.35,P<0.05）和SHR 24m-o组（1.78±0.08,P<0.05）的m RNA水平均明显增加;（2）Western blotting结果显示:老龄及高血压大鼠心房肌TRPC3、纤维化生物标志物蛋白表达均增加;与WKY 4m-o组（2.11±0.32）相比,TRPC3的蛋白表达量在WKY 24m-o组（2.72±0.24,P<0.05）和SHR 4m-o组（3.20±0.03,P<0.01）表达均明显增加;与WKY 4m-o组相比,Col-I蛋白水平,在SHR 4m-o组（4.94±0.08 vs 8.45±0.38,P<0.01）和SHR 24m-o组（4.94±0.08 vs 7.54±0.23,P<0.05）明显增加;与WKY 4m-o组相比,Col-III的蛋白表达在WKY 24 m-o组（2.15±0.32 vs 1.02±0.007,P<0.05）和SHR4m-o组（1.89±0.04 vs 1.02±0.007,P<0.05）明显增加。与WKY 4m-o组相比,TGF-β1蛋白表达在WKY 24 m-o组（2.15±0.32 vs 1.02±0.007,P<0.01）,SHR 4m-o组（1.95±0.04 vs 1.02±0.007,P<0.01）和SHR 24m-o（1.83±0.11 vs 1.02±0.007,P<0.05）心房组织中均明显增加。3.慢病毒TRPC3 RNAi感染心房成纤维细胞对纤维化标志物蛋白表达的影响:慢病毒TRPC3 RNAi感染心房成纤维细胞72小时后,发现TRPC3表达下调可明显降低TGF-β1（0.47±0.04 vs 0.32±0.032,P<0.05）的表达;4.TRPC3通道阻断剂对AngⅡ诱导的细胞增殖和迁移的抑制作用:（1）划痕实验:细胞贴壁生长到细胞融合度70-80%进行划痕实验,在TRPC3通道阻断剂处理0小时和48小时的细胞进行划痕实验成像,与对照组相比,AngⅡ组的成纤维细胞增殖明显增加,而TRPC3通道阻滞剂Pyr3可明显抑制Ang II导致的成纤维细胞的增殖。（2）迁移实验:Transwell迁移法检测细胞迁移,AngⅡ能显着增加成纤维细胞的迁移,而Pyr3能降低AngⅡ刺激下成纤维细胞的迁移（n=4,P<0.01）;5.TRPC3特异性阻滞剂Pyr3对AngⅡ诱导的细胞内Ca2+释放的影响:在无钙溶液条件下,Pyr3能显着降低钙瞬变的幅度（n=6,P<0.05）,加入1μmol/L AngⅡ后,Control组和Pyr3预处理组的钙瞬变值与无钙条件下幅度明显增强;将溶液转变为1.8mmol/L Ca Cl2,相较于加入Ang II时,对照组和Pyr3预处理组的钙瞬变值均明显增强,而Pyr3预处理的钙瞬变值明显低于对照组（n=6,P<0.05）;6.TRPC3参与心房纤维化的信号通路:（1）在培养的新生大鼠心房成纤维细胞中,TRPC3抑制剂可防止Ang II导致的细胞外基质沉积:与对照组相比,在Ang II刺激条件下TRPC3、纤维化标志物的蛋白质水平显着增加:即与Control组相比,在Ang II刺激条件下TRPC3（2.6±0.16 vs 4.1±0.08,P<0.05）、Col-I（1.02±0.007 vs 2.15±0.32,P<0.01）、Col-Ⅲ（1.52±0.006vs 2.05±0.006,P<0.05）和Periostin（0.16±0.02 vs 0.30±0.01,P<0.05）的蛋白质水平均显着增加;而TRPC3选择性抑制剂Pyr3则抑制Ang II诱导的TRPC3、Col-I、Col-Ⅲ和Periostin的上调:即与Ang II组相比,Pyr3抑制Ang II诱导的TRPC3（4.1±0.08 vs 2.45±0.12,P<0.05）、Col-I（2.15±0.32 vs 1.13±0.04,P<0.05）、Col-Ⅲ（2.05±0.006 vs 1.23±0.14,P<0.05）和Periostin（0.30±0.01 vs 0.16±0.009,P<0.05）的表达上调。（2）Ang II通过AT1R受体诱导TRPC3上调:在老龄及高血压大鼠心房肌检测ATIR及AT2R蛋白表达,与WKY 4m-o相比,AT1R的蛋白表达在WKY 24m-o组（0.57±0.05 vs 0.77±0.17）和SHR 4m-o组（0.57±0.05 vs1.05±0.07）显着增加,而AT2R蛋白表达均无显着性差异;在新生SD大鼠心房成纤维细胞中加药处理发现,缬沙坦（AT1R抑制剂）能抑制AngⅡ诱导的TRPC3表达上调,而PD 123 319（AT2R抑制剂）对AngⅡ诱导的心房成纤维细胞增殖无作用;（3）在TGF-β1/Smad 2/3的信号通路中:即在心房成纤维细胞中加药处理48 h后,Ang II组的TGF-β1（0.16±0.02 vs0.30±0.01）以及p-Smad 2/3（0.14±0.02 vs 0.30±0.03）的表达均明显增加;与Ang II（0.30±0.01）组相比,Ang II+Pyr3组（0.16±0.009）TGF-β1表达下调;Smad 2/3的总蛋白表达无明显差异,同时Pyr3明显抑制了p-Smad 2/3的表达。结论:1.老龄和高血压可导致心房纤维化;2.TRPC3在老龄和高血压心房中表达明显上调。3.TRPC3经AT1R/TGF-β1/Smad 2/3信号通路上调参与了老龄和高血压导致的心房纤维化过程。4.TRPC3可能是老龄和高血压逆转心房纤维化的潜在的治疗靶点。
冯宇,周曼丽,王健章,张家齐,钱舒乐,简维雄[5]（2020）在《替米沙坦对自发性高血压大鼠左心室肥厚相关蛋白质谱的影响》文中进行了进一步梳理目的研究替米沙坦对自发性高血压大鼠（SHR）左心室心肌组织蛋白质谱的影响。方法将16只SHR随机分为对照组、替米沙坦组,分别给予无菌注射用水（10 mL/kg）和替米沙坦（4.33 mg/kg）进行灌胃,另外选取8只Wistar-Kyoto（WKY）大鼠给予无菌注射用水（10 mL/kg）进行灌胃（WKY组）,连续给药12周。12周后处死大鼠,取心脏样本制成蛋白质剂。随后将蛋白质剂分离部分进行同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）、强阳离子交换柱液相分离并用串联质谱仪进行质谱鉴定。最后通过差异蛋白通路富集分析选出与通路相关的蛋白质及其参与的生化代谢途径和信号转导途径。结果与通路相关的总共23个差异蛋白,与替米沙坦组比较,SHR组上调的差异蛋白:促蛋白激酶激酶3、转胶蛋白、结合珠蛋白亚型2;下调的差异蛋白:血管性血友病因子（片段）、激肽原1、小核糖核蛋白相关蛋白、纤维蛋白原β链、蛋白质质量3（片段）、蛋白酶体、热休克蛋白27相关蛋白1、腱糖蛋白X、纤维粘连蛋白亚型2、转铁蛋白受体蛋白、血小板1、组织蛋白酶L1、补体因子B,同种型CRAb、纤维蛋白原异构体、免疫球蛋白重链（γ多肽）、α1抗蛋白酶。结论替米沙坦可能通过热休克蛋白27、纤维蛋白原、纤维粘连蛋白、蛋白酶体26s、转胶蛋白这些差异蛋白及其参与的生化代谢途径、信号转导途径影响高血压大鼠左心室肥厚。
宋晶[6]（2020）在《基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用》文中指出目的:以盐酸异丙肾上腺素腹腔注射法复制大鼠心肌纤维化（Myocardial fibrosis,MF）模型,用细胞分子生物学技术和方法,观察TGF-β1/LIMK1信号通路在心肌纤维化过程中的表达情况,观察解毒通络方对TGF-β1/LIMK1信号通路的调控方式及干预MF的作用机制。方法:实验一:50只SD雄性大鼠随机分为5组,正常对照组、3d组、7d组、14d组、28d组,正常对照组给予生理盐水注射,其他组给予异丙肾上腺素腹腔注射5mg.kg-1,分别于3天、3天、7天、14天、28天时,记录大鼠体重并乙醚麻醉状态下迅速取SD大鼠心脏,测量心脏重量后,取出心室部,放入4%多聚甲醛固定液,供组织学HE染色,免疫组化法测α-肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vim）阳性表达面积,取出心尖部迅速置于液氮中保存,分光光度法测羟脯胺酸含量。实验二:根据实验一结果,将60只SD雄性大鼠分为正常对照组、模型组、卡托普利组、中药低、中、高剂量组,正常对照组给予生理盐水注射,其他组给予异丙肾上腺素腹腔注射5mg.kg-1,中药组每日按10g、20g、30g.kg-1灌胃解毒通络方冲剂悬液;卡托普利组每日按5mg.kg-1灌胃卡托普利片悬液;正常对照组每日给予以等体积自来水灌胃。记录大鼠体重后乙醚麻醉状态下迅速取SD大鼠心脏,测量心脏重量计算心重指数;心尖部迅速置于液氮中保存,分光光度法测定羟脯胺酸含量。将心室部,放入4%多聚甲醛固定液,供组织学HE及MAasson染色,免疫组化法测I型胶原蛋白（Col I）、III型胶原蛋（Col III）、α-SMA、Vim、单丝氨酸蛋白激酶（LIMK1）阳性表达面积;眼球采血,收集血清并置于-20℃冰箱,收集的血清进行细胞分组培养。实验三:用提前制备的动物血清分正常对照组、模型组、卡托普利组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组培养成纤维细胞,Western-blot法检测各组成纤维细胞中α-SMA、Vim、ROCK1、LIMK1蛋白相对表达量;实时荧光定量PCR法检测成纤维细胞中TGF-β1、RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量;MTT法检测TGF诱导成纤维细胞增殖时相;用TGF刺激成纤维细胞后,实时荧光定量PCR法检测成纤维细胞中RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量。结果:实验一:大鼠心肌纤维化模型构建:1.HE染色结果:正常对照组心肌细胞横纹清晰,细胞和大小、间隙一致,胞浆染色清晰,注射异丙肾上腺素后3天、7天、14天、28天大鼠心肌组织细胞均出现细胞排列紊乱,坏死区细胞核固缩,胞浆减少或缺失,结缔组织增生。在3d组这种改变最明显,7d组、14d组相对减轻,28d组有所改善。2.心重指数:与正常对照组比较,3d组心重指数无明显差异,P>0.05。7d组、14d组、28d组心重指数下降,P<0.05。3.羟脯氨酸含量测定:与正常对照组比较,3d组、7d组、14d组、28d组羟脯胺酸含量明显增加,P<0.05,且随时间变化呈递增趋势。4.免疫组化结果:与正常对照组比较,3d组、7d组的大鼠心肌组织中,可见明显α-SMA、Vim蛋白阳性表达,且P<0.05。14d、28d组与正常对照组比较无显着差异P>0.05。实验二:解毒通络方动物体内药效学观察:1.心重指数:应用异丙肾上腺素制备大鼠心肌纤维化模型,采用注射后3天的造模方法。与正常对照组比较,模型组大鼠心重指数无明显增加,且P>0.05,与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组心脏指数无明显改变,且P>0.05。2.羟脯胺酸含量测定结果:与正常对照组比较,模型组羟脯氨酸含量明显增加,P<0.05;与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组羟脯氨酸含量明显下降,且P<0.05。3.HE染色:正常对照组细胞排列整齐,细胞间隙大小均一,胞浆染色均匀,模型组、卡托普利组以及各剂量中药组则出现不同程度的心肌纤维化表现,主要以细胞核固缩、心肌纤维溶解、断裂为主,细胞排列不规则,细胞结构破坏,细胞浆染色不均匀为主,卡托普利组与不同剂量中药组心肌纤维化程度较轻。4.Masson染色:与正常对照组比较,模型组、卡托普利组以及不同剂量中药组均出现不同程度的心肌组织损伤,具体表现为细胞核固缩,细胞排列紊乱,细胞间隙不规则,并出现大量蓝染的纤维胶原,并破坏心肌细胞,坏死部分有少量炎症浸润。与模型组比较,卡托普利组以及各剂量中药组心肌纤维化程度较轻。大鼠心肌组织中胶原纤维容积比（CVF）,与正常对照组比较,模型组明显增加,且P<0.05,与模型组比较,卡托普利组以及中药低、中、高剂量组明显减少,且P<0.05。5.免疫组化法测定ColI、ColIII、α-SMA、Vim、LIMK1蛋白阳性表达面积:（1）I型胶原蛋白及III型胶原蛋白在免疫组化染色中显示为棕色,与正常对照组比较,模型组I型胶原蛋白及III型胶原蛋白阳性表达面积明显高于正常对照组,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组及中药低、中、高剂量组阳性表达面积明显低于模型组。P<0.05。（2）α-SMA、Vim蛋白阳性表达表现为棕色,与正常对照组比较,模型组中α-SMA、Vim蛋白表达面积明显高于正常对照组,且P<0.05;与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组α-SMA、Vim蛋白表达面积明显下降,P<0.05;（3）与正常对照组比较,模型组LIMK1蛋白表达量明显高于正常对照组,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组明显低于模型组,P<0.05。实验三:解毒通络方对心肌成纤维细胞TGF-β1/LIMK1信号通路的作用1.Western-blot法检测各组成纤维细胞中α-SMA、Vim、ROCK1、LIMK1蛋白含量:（1）与正常对照组比较,模型组α-SMA、Vim蛋白表达量有所升高,有统计学差异P<0.05,卡托普利组与模型组比较表达量下降,具有显着差异,P<0.05。中药低、中、高剂量组与模型组比较有所下降,具有显着差异,P<0.05;（2）与正常对照组比较,模型组成纤维细胞中ROCK1蛋白表达含量明显增加,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组、中药低、中剂量组与中药高剂量组成纤维细胞中ROCK1蛋白表达含量明显下降,有统计学差异,P<0.05。（3）与正常对照组比较,模型组LIMK1蛋白表达量有所升高,有统计学差异,P<0.05,卡托普利组与模型组比较表达量下降,具有显着差异,P<0.05。中药低、中、高剂量组与模型组比较有所下降,且具有统计学差异,P<0.05;2.荧光定量PCR法检测成纤维细胞中TGF-β1、RhoA、ROCK1、LIMK1mRNA含量:（1）荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中TGF-β1的mRNA表达量,与正常对照组比较,模型组中TGF-β1mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中TGF-β1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。（2）荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中RhoA、ROCK1的mRNA的表达量:与正常正常对照组比较,模型组中RhoA、ROCK1的mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中RhoA、ROCK1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。（3）应用荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中LIMK1mRNA的表达量,结果显示,与正常对照组比较,模型组中LIMK1mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中LIMK1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。3.MTT法检测TGF-β1诱导成纤维细胞增殖时相:用不同浓度的TGF-β1刺激成纤维细胞后,根据吸光值计算细胞增殖率,结果显示不同浓度的TGF-β1刺激成纤维细胞时,细胞表现出增殖现象,低浓度组、中浓度及高浓度组TGF-β1对细胞增殖均表现为24小时后出现增殖,48小时达到高峰,72小时后出现下降。而低浓度组在不同时间点均表现为最强的增殖率。中浓度组在各个时间点增殖率最低。所以在成纤维细胞增殖的研究中,选择低浓度(0.025 ng.ml-1)的TGF-β1为药物剂量,以48小时为时间点干预成纤维细胞。4.用TGF-β1刺激成纤维细胞后,荧光定量PCR法检测成纤维细胞中RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量:结果显示,（1）与正常对照组比较,模型组中RhoAmRNA含量明显增高。P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中RhoAmRNA含量明显减少。P<0.05。（2）与正常对照组比较,模型组中ROCK1、LIMK1的mRNA含量明显增加,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组以及中药低、中、高剂量组ROCK1、LIMK1的mRNA含量明显减少,P<0.05。结论:1.应用盐酸异丙肾上腺素注射液5mg.kg-1腹腔注射大鼠,3天后大鼠心肌组织病理形态改变,心肌组织中羟脯胺酸含量增加,心肌组织中α-SMA、Vim蛋白表达量增多,说明注射异丙肾上腺素3天后大鼠心肌纤维化模型制备成功。2.在应用解毒通络方干预大鼠心肌纤维化模型时,心肌纤维化有明显的改善。并通过抑制心肌胶原蛋白的分泌及沉积而实现抑制心肌纤维化。3.在体外应用解毒通络方干预大鼠成纤维细胞时,可通过下调TGF-β1/LIMK1信号通路中RhoA、ROCK1、LIMK1因子,抑制成纤维细胞中α-SMA、Vim蛋白表达,从而抑制心肌纤维化。4.在TGF-β1诱导大鼠成纤维细胞增殖时,解毒通络方可以抑制成纤维细胞增殖,并通过下调TGF-β1/LIMK1信号通路中RhoA、ROCK1、LIMK1因子而实现的。
姚涛[7]（2020）在《基于“心肾相关”理论探讨高血压心衰肾纤维化机制及以方测证干预研究》文中研究指明目的:1.基于“心肾相关”理论研究高血压心衰导致肾纤维化的病理机制,并运用以方测证方法明确高血压心衰肾纤维化模型大鼠的证候本质。2.明确参麦注射液和参附注射液调控TGF-β/Smad信号转导通路干预高血压心衰肾纤维化的作用机制与关键靶点。方法:1.成模前实验动物分为三组,即空白对照组（Dahl/SS盐敏感性大鼠6只）,模型组（Dahl/SS盐敏感性大鼠44只）,盐敏感对照组（SS-13BN盐耐受性大鼠10只）。低盐饮食给予空白对照组,高盐饮食给予模型组和盐敏感对照组,喂养20周后验证盐敏感高血压心衰肾纤维化大鼠模型成功。成模后的40只Dahl/SS大鼠随机分为模型组、参麦注射液组、参附注射液组、吡非尼酮抑制剂组,每组各10只,采用腹腔注射与灌胃相结合的方式给药15天后进行指标检测[1],超声心电图检测各组大鼠心功能指标（EF、FS值）,ELISA法检测大鼠血清指标（NT-pro BNP、TGF-β、Cystatin C、NGAL）,收集各组大鼠尿液检测24h尿蛋白定量和肾功能（Scr、BUN、UA）,HE染色和Masson染色方法观察大鼠肾脏组织病理形态以及纤维化状态改变,免疫荧光染色法检测大鼠肾脏组织中TGF-β1、Col I含量变化,Western Blot法检测大鼠肾脏组织中纤维化蛋白TGF-β1表达量、Smad2、Smad3磷酸化程度,RT-q PCR法检测大鼠肾脏组织中Smad2、Smad3、TGF-β、Col I m RNA相对表达量。2.30只Dahl/SS盐敏感性大鼠随机分成空白对照组、参麦注射液组、参附注射液组,每组各10只,采用腹腔注射方式给予每只大鼠药物6.0m L/kg,每日1次,连续给药7天后腹主动脉取血制备含药血清。不同浓度的含药血清（空白血清、参麦血清、参附血清）、TGF-β1、吡非尼酮分别作用于大鼠肾小管上皮细胞,作用时间为别24h、48h、72h。然后采用CCK-8法确定最佳给药浓度（量效）和最佳干预时间（时效）[1]。设置空白对照组、TGF-β1组、参麦血清+TGF-β1组、参附血清+TGF-β1组、空白血清+TGF-β1组、吡非尼酮+TGF-β1组,CCK-8法检测各组药物作用于肾小管上皮细胞48h的增值抑制率,Western Blot法检测细胞Smad2、Smad3磷酸化程度,RT-q PCR法检测细胞Smad2、Smad3的m RNA相对表达量[1]。结果:1.造模结束后,与对照组（空白对照、盐敏感对照）大鼠比较,一般情况方面:模型组大鼠整体状态出现（饮食状况、精神状态、行为体征）异常,腹部肿胀膨大,血压明显升高,收缩压高可达200mm Hg以上;心功能方面:模型组大鼠心功能参数（EF、FS）水平明显降低,血清NT-pro BNP水平明显升高;肾功能方面:模型组大鼠尿蛋白排出量增加,肾功能指标（Scr、BUN、UA）水平升高,并且肾组织出现不同程度的肾小管萎缩、间质纤维化、炎症细胞浸润等病理改变,以上结果表明高血压心衰肾纤维化大鼠模型制备成功。2.给药后,与参附组比较,模型组大鼠尿蛋白增加,肾功能指标Scr、BUN与UA水平升高,大鼠肾脏组织中TGF-β和Col I含量升高、Smad2和Smad3蛋白磷酸化程度加重,提示模型大鼠存在肾小管上皮细胞-间充质转分化（EMT）过程。与模型组比较,参麦组模型大鼠尿蛋白排出量减少,肾功能Scr、BUN与UA水平下降,肾小管萎缩、间质纤维化以及炎症细胞浸润等病理改变减轻;Smad2和Smad3蛋白磷酸化程度减轻,TGF-β1含量、胶原容积分数以及Col I平均荧光强度均有降低,肾纤维化程度减轻,提示参麦注射液能够抑制肾纤维化的发展进程,其作用机制可能与调控EMT过程有关。3.TGF-β1、参麦血清、参附血清、空白血清对大鼠肾小管上皮细胞均有不同程度的增殖作用,吡非尼酮对大鼠肾小管上皮细胞具有明显的抑制作用,但剂量依赖性不明显,最终确定10%含药血清、10μg/L TGF-β1、1g/L吡非尼酮为最佳给药浓度（量效）,48h为最佳干预时间（时效）;各药物与TGF-β1联合孵育细胞后,参附联合组和空白联合组细胞增殖明显,参麦联合组和吡非尼酮联合组细胞生长抑制明显,并且参麦联合组细胞抑制率明显高于其他组别。4.各组含药血清、吡非尼酮分别与TGF-β1联合作用于大鼠肾小管上皮细胞后,与其他各组比较,参麦联合组细胞Smad2、Smad3的蛋白磷酸化程度和m RNA相对表达量均明显降低,提示参麦注射液抑制肾纤维化的作用机制可能与阻止肾组织中TGF-β1/Smad信号转导通路活化有关。结论:1.本研究证实了心肾双向交互损害是高血压心衰肾纤维化发生发展的主要原因,模型大鼠肾组织TGF-β/Smad信号转导通路活化,并参与肾小管上皮-间质细胞转分化过程是高血压心衰肾纤维化的重要病理机制。2.参麦注射液能够调控TGF-β/Smad信号转导通路而抑制肾纤维化状态,其用机制可能与阻止TGF-β1/Smad信号转导通路活化以及肾小管上皮-间质细胞转分化过程有关。3.本研究从“以方测证”角度,以参麦注射液为主,参附注射液参照对比,证实了高血压心衰肾纤维化大鼠的证候本质为心肾气阴两虚证。
田海萍[8]（2020）在《SSBP1通过P53抑制AngⅡ诱导的心肌纤维化》文中指出背景:心肌纤维化（MF）是慢性心功不全难以逆转的原因之一,且MF的程度决定着患者的预后。因此预防和逆转MF成为心力衰竭治疗的重点之一。心肌成纤维细胞是MF主要效应细胞,其过度增殖和胶原蛋白合成降解失衡是MF初始因素。RAS系统在促进MF发生发展过程中有着重要作用。AngⅡ可以激活TGF-β1信号,增加胶原蛋白合成,在MF和心肌重塑中起着关键作用。AngⅡ主要与ATI受体结合。缬沙坦是高选择的ATI受体拮抗剂,能够阻断AT1受体促进细胞增长、促进醛固酮释放和收缩血管的作用。线粒体单链DNA结合蛋白1（SSBP1）,属于单链DNA结合蛋白家族。通过与线粒体单链mtDNA结合,在线粒体DNA复制、重组和修复中发挥重要作用。研究发现SSBP1可能是TGFβ-1的负调控因子,并在心肌成纤维细胞活化中起到抑制作用。P53是一种转录因子,主要作用在于在维持线粒体功能,调控细胞增殖和分化。有研究发现SSBP1可以通过乙酰化增强P53稳定性。因此我们推测可以通过SSBP1/P53抑制心肌纤维化。第一部分 小鼠心肌纤维化模型制备目的:采用外源性给与AngⅡ的方法制备小鼠心肌纤维化模型。方法:C57BL/6J小鼠,23只,皮下置入ALzet 2002 200ul渗透泵。对照组（n=12）,泵入稀释后乙酸。实验组（n=11）泵入乙酸稀释的Ang Ⅱ,1.44μg/g/d,2周后检测小鼠血压,心脏超声相关指标。处死小鼠,制备心脏组织切片行天狼星红染色并测定胶原染色面积。结果:AngⅡ能够使小鼠收缩压升高,心脏重量增加,室壁增厚。实验组心肌组织切片胶原纤维染色面积为19.4%,对照组为42.1%。（P<0.05）第二部分 缬沙坦通过SSBP1抑制AngⅡ诱导的心肌纤维化目的:①探究SSBP1是否参与MF。②缬沙坦是否通过SSBP1干预MF。方法:C57BL/6J小鼠,植入ALzet2002 200ul渗透泵,对照组（n=12）,泵注稀释后乙酸;实验组（n=11）泵注AngⅡ;缬沙坦组（n=11）泵注AngⅡ+灌注缬沙坦（40 mg/kg/d）。泵注量1.44μg/g/d,2W。①心肌组织切片行天狼星红苦味酸染色,用图像J软件定量染色面积。②检测心肌COL1A1、COL3A1、SSBP1蛋白（WB法）和mRNA（qRT-PCR法）。③检测心肌组织线粒体功能。包括比色法测柠檬酸合成酶、ComplexⅠ和ComplexⅢ、GSH-Px活性。和NBT法测SOD活性。qRT-PCR法测Nox1和Nox4 mRNA。④分离并培养MCFs分4组:空白对照;AngⅡ0.5umol/l 组;AngⅡ 1.0umol/l组;AngⅡ 1.0umol/l+缬沙坦1.0umol/l 组;WB 法检测组 COL1A1、COL3A1、NOX1、NOX4 以及 SSBP1 蛋白。结果:①与对照组相比较,Ang II使得胶原蛋白染色面积、COL1A1和COL3A1 mRNA以及蛋白表达增加。柠檬酸合成酶、复合物I和复合物III、SOD和GSH酶活性降低;Nox1和Nox4 mRNA表达增加。SSBP1表达减少。②相比于实验组,缬沙坦组胶原蛋白染色面积、COL1A1和COL3A1 mRNA以及蛋白表达明显减少。柠檬酸合成酶、复合物Ⅰ和复合物Ⅲ、SOD和GSH酶活性增加;Nox1和Nox4 mRNA合成降低;但是SSBP1表达则有所增加。第三部分 P53和SSBP1对Ang Ⅱ刺激的MCFs增殖能力和胶原蛋白合成的影响目的:明确SSBP1是否能够通过P53抑制AngⅡ诱导的MCFs增殖和胶原蛋白表达。方法:(①沉默（感染SSBP1shRNA）和上调SSBP1（转染PCDNA3.1SSBP1）,分别在有和没有AngⅡ刺激的情况下,MCFs增殖能力（MTT法）、Ⅰ型Ⅲ型胶原蛋白表达、NADPH氧化酶NOX1和NOX4合成、以及P53蛋白表达的变化（蛋白检测使用WB法）。②感染Ad-P53-GFP上调P53,分别在有和没有AngⅡ刺激时,MCFs增殖能力、COL1A1和COL3A1、NOX1和NOX4表达的变化。结果:①沉默SSBP1,P53蛋白合成减少,并使得AngⅡ诱导的MCFs增殖和胶原蛋白表达更加明显;上调SSBP1,P53蛋白合成增多,并使得AngⅡ诱导的MCFs增殖和胶原蛋白表达受到抑制。②调控SSBP1不影响Nox1和Nox4表达。③上调P53可抑制MCFs增殖和胶原蛋白表达。全文结论:1.AngⅡ诱导的MF中SSBP1表达受抑制。2.缬沙坦能够抑制胶原蛋白表达和ROS激活,通过增加SSBP1表达拮抗AngⅡ诱导的MF。3.SSBP1是通过P53抑制AngⅡ诱导的MCFs增殖和胶原蛋白表达。4.SSBP1抑制MF与ROS途径无关。
胡长清[9]（2020）在《ADAMTS16通过激活TGF-β1调控心肌纤维化和心功能障碍》文中指出心力衰竭（heart failure,HF）,以下简称心衰,发生于心脏疾病的终末阶段,具有极高的发病率和死亡率。心肌纤维化是心衰的重要原因,然而临床上治疗心肌纤维化的效果却十分有限。心肌纤维化是一种瘢痕形成的过程,其主要特点是成纤维细胞的异常增殖和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）蛋白的过度沉积,从而导致心脏结构和功能的异常。ECM中积聚的胶原蛋白会导致心脏左心室的顺应性降低和僵硬度的增加,同时会诱导心肌细胞内的病理性信号传导,最终导致心衰。过度累积的ECM也会损害心肌细胞间的电活动,增加心律失常的风险。心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）和肌成纤维细胞（myofibroblasts,MFs）是ECM的主要来源。CFs的表型转化受到严格的调控,是心脏维持稳态的重要基础。多数心脏类疾病与心肌纤维化有关。转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）信号通路在心肌纤维化和心衰的发生发展进程中扮演着重要角色,它们通过通过自分泌或旁分泌的方式参与信号传递。在许多组织中,TGF-β1的持续产生是纤维化发生的基础。TGF-β1信号通路的激活依赖于成熟TGF-β1的释放。通常TGF-β1均以无活性的LAP-TGF-β1复合物形式存在。该复合物包含前体TGF-β潜在相关蛋白（latency associated protein,LAP）和活性TGF-β1部分。生理条件下,TGF-β1活性受到严格调控。血小板反应蛋白1（TSP1）是TGF-β1最重要的活化因子之一。研究发现TSP1蛋白的KRFK基序可以与LAP蛋白的LSKL基序结合,从而改变复合物的空间构象,使TGF-β1和LAP蛋白发生分离,暴露出下游受体TβRⅠ/TβRⅡ结合位点,激活下游Smad蛋白,将胞外信号传递至细胞核内。在心肌纤维化的过程中,TGF-β1信号通路参与到了成纤维细胞的表型转化。研究表明,TGF-β1刺激诱发CFs向MFs的表型转化,增加细胞外基质蛋白质合成。同时TGF-β1通过抑制基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）的活性和促进PAI-1、TIMPs等蛋白酶抑制剂的合成,导致ECM的过度沉积。血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶家族（ADAMTS）是一组多功能蛋白酶,在结构上与ADAMs家族相关联。具有典型的金属蛋白酶活性,能降解ECM中的关键蛋白,对形态发生、组织修复过程中涉及的软骨基质重塑起到重要作用。ADAMTS16是ADAMTS成员之一。ADAMTS16能够对α2巨球蛋白（α2-macroglobulin）进行切割,提示ADAMTS16具有潜在的蛋白酶活性。ADAMTS16突变大鼠中,与对照组大鼠相比,血压降低36 mm Hg,主动脉脉搏波速度和血管中膜厚度明显降低。提示ADAMTS16对心血管疾病的发生有重要的调控作用。TSP1蛋白通过KRFK基序和Wxx W基序（WSPW,WSHW,WGPW）与LAP-TGF-β1结合,从而激活LAP-TGF-β1。在ADAMTS16蛋白序列中,我们也发现了与Wxx W类似的基序。同时在ADAMTS16序列中没有找到KRFK基序,但是发现了一个与KRFK基序带有相同电荷的RRFR序列,因此我们提出假说:ADAMTS16可能通过RRFR和Wxx W基序与LAP-TGF-β1形成互作;同时TGF-β1是心血管疾病中最重要的促纤维化生长因子,ADAMTS16可能通过激活LAP-TGF-β1,参与心肌纤维化过程的调节。本文以ADAMTS16为研究对象,在细胞和模式动物水平探讨了其在心肌纤维化中的调控作用。主动脉弓缩窄（transverse aortic constriction,TAC）手术可造成主动脉狭窄,引起左心室压力增加,最终导致慢性心衰。首先我们发现ADAMTS16蛋白TAC手术诱导的小鼠心衰模型中表达量显着升高,并且其m RNA表达水平和心肌纤维化标志物MMP2、MMP9、Col1a1和Col3a1表达成正相关,提示ADAMTS16可能与心肌纤维化过程紧密关联。在CFs中,ADAMTS16能促进MFs分子标志物α-SMA的表达,同时增强CFs的收缩和迁移能力,表明ADAMTS16促进了CFs向MFs的表型转化。在ADAMTS16蛋白结构分析中,我们发现RRFR和Wxx W基序与可以同LAP-TGF-β1结合的TSP1蛋白同源性很高。免疫共沉淀（Co-IP）实验表明,ADAMTS16和LAP-TGF-1β存在相互作用。分子生物学的研究表明,过表达WTADAMTS16促进LAP-TGF-β1的激活,但是将ADAMTS16的RRFR基序突变为IIFI（Mut ADAMTS16）,以及在CFs中si RNA干扰ADAMTS16的表达或者TGF-β1中和抗体（TGF-β1 NAb）孵育处理,ADAMTS16对LAP-TGF-β1的激活效应明显受到抑制。由于RRFR基序是ADAMTS16序列中激活CFs中TGF-β1的关键位点,我们假设RRFR四肽小分子模拟了ADAMTS16的功能,并在TGF-β1的激活过程中起到关键作用。体外实验表明,小分子肽RRFR能拮抗ADAMTS16和LAP-TGF-β1之间的相互作用,且与小分子肽RRFR存在浓度依赖性。此外在敲低ADAMTS16表达的CFs中,小分子肽RRFR能促进TGF-β1的激活,表明这种促进作用独立于ADAMTS16本底水平的表达。在TAC诱导的心衰模型中,腹腔注射小分子肽RRFR能激活TGF-β1下游Smad2/Smad3信号通路,同时使心功能障碍和纤维化程度进一步恶化,而这一效应能够被TGF-β1中和抗体治疗所阻断。研究数据表明:（1）ADAMTS16基因是一新的心肌纤维化及心衰进程的影响因子。（2）ADAMTS16的RRFR基序介导了LAP-TGF-β1的激活。（3）小分子肽RRFR通过激活TGF-β1信号通路,在心肌肥厚与心衰的程度过程中发挥关键调节作用。（4）阐明了ADAMTS16/TGF-β1信号通路在心肌纤维化和心衰过程中的重要作用。我们研究发现ADATMTS16在心血管疾病中发挥新的调控作用,并提示ADAMTS16是一个新的治疗心衰及心肌纤维化的靶点,这将为心衰及心肌纤维化的治疗提供新的思路。
于永慧[10]（2019）在《心梗后纤维化心肌ECM蛋白表达谱构建及水蛭素的干预效应研究》文中进行了进一步梳理心肌纤维化是众多心血管疾病,如心肌梗死、冠心病、心肌病等发展至后期的共同病理改变。如何防治心肌纤维化是当前世界医学研究的难点和热点。心肌梗死后心肌纤维化（Cardiac fibrosis after myocardial infraction,CFMI）是心肌纤维化常见的临床类型之一,其核心病理环节是CFMI的主要效应细胞心肌成纤维细胞（Cardiac fibroblasts,CFs）在氧化应激、炎症因子等促纤维化因素的诱导下,出现增殖、表型分化、迁移、分泌等生物学行为的改变,导致细胞外基质（Extracellularmatrix,ECM）大量沉积,影响心脏舒缩功能和电信号传导,出现心力衰竭、心律失常,影响CFMI患者预后。AMPK介导的Integrin β1信号通路在CFs参与的ECM过度沉积中发挥重要作用。现代中医理论认为,CFMI属于“胸痹”、“症瘕”等范畴,与血瘀证的病因病机密切相关。课题组前期研究发现,活血化瘀中药在调节AMPK代谢通路、优化心肌能量代谢的同时,下调CollagenⅠ、CollagenⅢ、骨桥蛋白、腱糖蛋白-C等ECM关键蛋白,抑制心肌梗死后心室重构和心功能异常。但是目前对于CFMI中ECM表达情况的研究局限于个别蛋白,活血化瘀中药在其中发挥的关键调节机制亦尚不明确。水蛭是祖国医学中经典的活血化瘀中药,具有破瘀血、通经络、消症瘕等确切功效,以及抗凝、抗栓、抗血小板、抗心肌纤维化等药理作用。目前含水蛭中成药和水蛭素衍生物比伐芦定在抗心肌纤维化、减少心梗面积方面获得一些证据,但缺乏对水蛭素单一成分抗CFMI的疗效和机制研究。本研究采用Label-free亚蛋白质组学技术探索CFMI主要病理产物ECM的组成特点,通过建立大鼠CFMI模型和AngⅡ诱导乳鼠CFs模型,以水蛭主要有效组分水蛭素为治疗手段,从AMPK介导的Integrinβ1及其下游FAK/PI3K/Akt、TGF-β1/Smad2/3信号通路,观察水蛭素对CFMI修复过程中关键ECM蛋白表达的影响,为中医药延缓CFMI、改善心梗患者预后提供科学依据。1文献综述分别阐述CFMI的病理机制、早期识别、临床干预,突出中医药活性成分在CFMI治疗中的潜力。对传统活血化瘀中药水蛭的基源、典籍记载、成药组方、制剂开发,以及水蛭主要活性成分水蛭素治疗心血管疾病的药理学机制进行了综述,为研究水蛭素干预CFMI的实验研究奠定理论基础。2实验研究研究一心肌梗死后纤维化心肌ECM蛋白表达谱的构建与生信分析目的:通过Label-free亚蛋白质组学技术分析大鼠CFMI组织中ECM蛋白的组成特点和差异蛋白的互作机制。方法:采用结扎左冠状动脉前降支建立Wistar大鼠CFMI模型,随机分为假手术组（Sham）、模型2周组（Model 2W）、模型4周组（Model 4W）,每组10 只。运用Label-free亚蛋白质组学技术分析CFMI后2周、4周大鼠心肌ECM差异蛋白改变,GO分析从细胞组分、分子功能、生物过程描述ECM差异蛋白特征,KEGG分析参与ECM差异蛋白表达的调控通路,最后通过Western Blot技术对筛选出的ECM差异蛋白进行验证。结果:共筛选出243个ECM差异蛋白。与Sham 比较,Model 2W上调显着的是骨甘氨酸（Osteoglycin）,Model 2W下调显着的是巢蛋白-1（Nidogen-1）,Model 4W上调显着的是光蛋白聚糖（Lumican）、胶原Ⅵ型α2链（Collagen 6A2）,Model 4W 下调显着的是 Nidogen-1;与 Model 2W 比较,Nidogen-1、踝蛋白-1（Talin-1）在Model4W显着下调（P<0.05）。GO分析显示,ECM差异蛋白功能显着富集在细胞外区域、细胞外基质等细胞组分,受体结合、金属离子结合、Integrin结合等分子功能,以及免疫调节、蛋白转运、膜组织、细胞间信号转导、细胞粘附等生物过程。KEGG分析显示,黏着斑激酶（FAK）、磷脂酰肌醇-3-羟激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、Integrinβ1与ECM受体通路显着富集。Western Blot 结果显示,与 Sham 比较,Model 2W 组 Collagen 6A2、Lumican、Talin-1 表达上调,Model 4W组 Collagen 6A2、Lumican 显着升高,Nidogen-1 显着下降（P<0.05）。与 Model2W组比较,Model4W 组 Nidogen-1、Lumican、Talin-1 表达下调（P<0.05）。其中,与 Sham 比较,Model 4W 组 Collagen 6A2、Lumican 表达上调,Nidogen-1 表达下调;与 Model 2W 组比较,Model 4W组Nidogen-1、Talin-1 表达下调,Label-free 结果与 Western Blot 结果一致。结论:参与CFMI发生的ECM差异蛋白调控靶点为Collagen 6A2、Nidogen-1、Lumican、Talin-1、Osteoglycin 等,其作用机制可能涉及 FAK、PI3K/Akt、Integrinβ1等信号通路。研究二水蛭素调节ECM表达干预大鼠心梗后心肌纤维化的效应机制目的:观察水蛭素对CFMI大鼠心脏功能、血清标记物、心肌病理、分子病理的影响,探讨水蛭素干预ECM重建防治CFMI的效应机制。方法:采用结扎左冠状动脉前降支建立Wistar大鼠CFMI模型,随机分为4组:假手术组（Sham,生理盐水）、模型组（Model,生理盐水）、缬沙坦组（Valsartan,144mg·kg-1）、水蛭素组（Hirudin,270mg·kg-1）,每组 20 只,每天给药 1 次,连续给药4周。心脏超声检测各组大鼠舒张末期/收缩末期的左室内径（LVD）、室间隔厚度（IVST）、左室后壁厚度（LVPWT）、左室容积（EDV/ESV）、左室射血分数（LVEF）;血清学检测心肌损伤（CK-MB、cTnT）、心力衰竭（ANP、BNP）、氧化应激（Ang Ⅱ、MDA、SOD）等标记物;TTC染色、HE染色、Masson染色、天狼星红染色观察心肌梗死及纤维化病变情况;免疫组化和Western Blot技术观察ECM差异蛋白表达;Western Blot技术观察AMPK、Integrin β1、FAK、PI3K p110α PI3K p110(3、Akt、TGF-β1、Smad2/3 等信号通路蛋白表达。结果:（1）与 Sham 组比较,Model 组 IVST、LVPWT 减少,LVD、EDV、ESV增高,LVEF降低（P<0.05）,提示CFMI模型建立成功。与Model组比较,Hirudin 组 IVSTs、LVPWT、LVEF 升高,LVD、EDV、ESV 降低（P<0.05）。（2）与 Model 组比较,Valsartan 组、Hirudin 组 CK-MB、cTnT、ANP、BNP、Ang Ⅱ、MDA水平显着下降,SOD显着升高（P<0.05）。（3）与Model组比较,Valsartan组、Hirudin组心重指数、心梗面积减少,胶原容积分数显着降低;Hirudin组血管周围胶原容积分数显着降低（P<0.05）。与Model组比较,Valsartan组、Hirudin 组 Collagen 6A2、Lumican 表达减少,Nidogen-1 表达增多（P<0.05）。（4）与 Model 组比较,Valsartan 组、Hirudin 组 AMPKα、FAK、PI3K p110α、Akt蛋白活性上调,Integrinβ1、TGF-β1、Smad2/3蛋白表达下调（P<0.05）,PI3K p110β蛋白表达无显着变化（P>0.05）。结论:水蛭素能够改善CFMI大鼠左室扩张,提高心脏功能,减轻心肌损伤,减少心重指数、心梗面积,减轻心肌组织和血管周围胶原沉积,从而延缓CFMI进展;其机制与调节Collagen 6A2、Lumican、Nidogen-1等ECM差异蛋白代谢,调控心肌 AMPKα/Integrin β1/FAK 及其介导的下游 PI3K/Akt、TGF-β1/Smad2/3 信号通路有关。研究三水蛭素干预Ang Ⅱ诱导乳鼠心肌成纤维细胞ECM表达的机制目的:通过Ang Ⅱ诱导乳大鼠心肌成纤维细胞（NRCFs）模型,观察水蛭素对NRCFs形态、增殖、表型分化、迁移、分泌等细胞生物学行为的影响机制。方法:分离、提取、培养NRCFs,经免疫荧光鉴定波形蛋白（+）/vWF（-）后,给予不同浓度（10-9 mol·L-1、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1）AngⅡ诱导不同时间（6h、12h、24h、48 h）,采用CCK-8法观察NRCFs增殖活力,确立Ang Ⅱ诱导NRCFs促纤维化模型的适宜浓度和时间。NRCFs分为4组:对照组（Control）、模替型组（Ang Ⅱ）、缬沙坦组（Valsartan）、水蛭素组（Hirudin）,给予相应药物预干预30 min后加入Ang Ⅱ诱导NRCFs。采用流式细胞法观察各组NRCFs细胞周期,α-SMA法观察NRCFs表型转化,Transwell小室试验和划痕试验观察NRCFs迁移,HYP含量测定法观察NRCFs胶原蛋白分泌,免疫荧光染色技术观察ECM差异蛋白分泌情况,Western Blot技术观察AMPKα1/α2、Integrinβ1、FAK、TGF-β1、Smad2/3、Nideogen-1 蛋白表达情况。结果:（1）NRCFs培养24h后生长良好,波形蛋白（+）/vWF（-）的NRCFs比例在（98.09±1.03）%。选定 Ang Ⅱ以10-6mol·L-1刺激24h作为诱导NRCFs纤维化改变的理想模型。（2）与Ang Ⅱ组比较,Valsartan组、Hirudin组静止期G0G1期细胞百分比增多、增殖期S期细胞百分比降低,α-SMA免疫荧光染色阳性的细胞数量、穿越Transwell小室的细胞数量减少,划痕宽度延长（P<0.05）。（3）与 Ang Ⅱ 组比较,Valsartan 组、Hirudin 组 HYP 含量降低,Lumican、Collagen 6A2荧光强度下降,Hirudin组Nidogen-1、Talin-1荧光强度升高（P<0.05）。（4）与Ang Ⅱ组比较,Valsartan组、Hirudin组AMPKα1/α2、FAK表达上调,Integrin β1 表达下调,Valsartan 组 TGF-β1、Smad2/3 表达下调（P<0.05）;Hirudin组 TGF-β1、Smad2/3,Valsartan 组、Hirudin 组 Nidogen-1 表达无差异（P>0.05）。结论:水蛭素能够抑制Ang Ⅱ诱导的NRCFs增殖、表型分化、迁移、分泌等细胞生物学行为的改变,其机制与调节AMPK/Integrin β1/FAK信号通路表达,进而优化NRCFs对Ang Ⅱ诱导的促纤维化因素的处理能力有关。
二、纤维粘连蛋白对培养的自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、纤维粘连蛋白对培养的自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响（论文提纲范文）
（1）肠道菌群代谢产物丁酸调控心肌梗死大鼠胶原表达的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 肠道菌群概述 |
| 1.1.1 肠道菌群的组成 |
| 1.1.2 肠道菌群与宿主的相互作用 |
| 1.1.3 肠道菌群失调与疾病 |
| 1.2 心肌梗死概述 |
| 1.2.1 心肌梗死简介 |
| 1.2.2 心肌梗死与成纤维细胞 |
| 1.3 肠道菌群与心肌梗死 |
| 1.3.1 肠道菌群与心血管疾病 |
| 1.3.2 肠道菌群与心肌梗死 |
| 1.4 肠道菌群代谢产物与心血管疾病 |
| 1.4.1 肠道菌群代谢产物在心血管疾病中的研究现状 |
| 1.4.2 肠道菌群与短链脂肪酸 |
| 1.4.3 丁酸盐的研究现状 |
| 1.5 肠道菌群代谢产物与HDACS |
| 1.5.1 肠道菌群代谢产物对HDACs的影响 |
| 1.5.2 丁酸盐对HDACs的影响 |
| 1.6 组蛋白去乙酰化修饰与心肌梗死 |
| 1.6.1 组蛋白乙酰化修饰 |
| 1.6.2 组蛋白去乙酰化酶抑制剂与心肌纤维化 |
| 1.6.3 曲古菌素A |
| 1.6.4 丁酸钠 |
| 1.7 C3AR1 |
| 1.7.1 C3AR简介 |
| 1.7.2 C3AR与心血管疾病 |
| 第2章 肠道菌群影响心肌梗死后胶原表达 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验主要仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验给药及分组 |
| 2.2.2 大鼠心肌梗死模型制备 |
| 2.2.3 16S核糖体RNA测序 |
| 2.2.4 大鼠心肌组织HE染色 |
| 2.2.5 天狼猩红染色 |
| 2.2.6 Western Blot |
| 2.2.7 免疫组织化学染色 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 肠道菌群多样性的动态变化 |
| 2.3.2 肠道菌群组成的动态变化 |
| 2.3.3 肠道菌群丰度的动态变化 |
| 2.3.4 肠道菌群对宿主生物学功能影响的预测 |
| 2.3.5 肠道菌群对心肌梗死后胶原表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 肠道菌群代谢产物丁酸通过肠心轴对心肌梗死后胶原表达的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验主要仪器 |
| 3.1.3 实验主要试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 动物给药及分组 |
| 3.2.2 GC-MS |
| 3.2.3 HE染色 |
| 3.2.4 天狼猩红染色 |
| 3.2.5 Western Blot |
| 3.2.6 免疫组织化学染色 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 心肌梗死后血清肠道菌群代谢产物SCFAs含量的变化 |
| 3.3.2 心肌梗死后心肌组织肠道菌群代谢产物SCFAs的变化 |
| 3.3.3 丁酸钠对心肌梗死后胶原表达的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 肠道菌群代谢产物丁酸抑制HDACS活性影响胶原表达的机制 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物及细胞 |
| 4.1.2 实验主要仪器 |
| 4.1.3 实验主要试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 实验给药及分组 |
| 4.2.2 核蛋白提取 |
| 4.2.3 HDACs活性试剂盒 |
| 4.2.4 超声心动图 |
| 4.2.5 ELISA |
| 4.2.6 RNA-Seq |
| 4.2.7 实时定量PCR |
| 4.2.8 Western Blot |
| 4.2.9 NIH3T3成纤维细胞的培养及细胞模型 |
| 4.2.10 CCK-8 |
| 4.2.11 细胞转染 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 肠道菌群对心肌梗死后血清及心肌组织HDACs活性的影响 |
| 4.3.2 丁酸钠通过抑制HDACs活性影响胶原表达 |
| 4.3.3 肠道菌群代谢产物丁酸通过抑制HDACs调控的靶点基因筛选 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 人参皂苷Re药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 CFs形态学观察与纯度检测 |
| 2 过表达miR-489抑制CFs分化和分泌 |
| 3 过表达miR-489抑制myd88/NF-κB通路的活化 |
| 4 抑制miR-489促进CFs分化和分泌 |
| 5 抑制miR-489促进myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究二 人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re改善AMI后心脏功能 |
| 2 人参皂苷Re抑制AMI后心肌代偿性肥厚 |
| 3 人参皂苷Re减轻AMI后心肌损伤 |
| 4 人参皂苷Re改善AMI后心脏组织病理学改变 |
| 5 人参皂苷Re抑制AMI后纤维化相关蛋白的表达 |
| 6 人参皂苷R调控AMI后miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 7 人参皂苷Re抑制AMI诱导的myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re干预CFs的浓度筛选 |
| 2 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs分化 |
| 3 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs迁移 |
| 4 人参皂苷R抑制AngⅡ诱导的CFs中胶原蛋白的表达 |
| 5 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs中myd88/NF-κB通路活化 |
| 6 人参皂苷Re调节CFs中miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究结语 |
| 创新点 |
| 基金项目 |
| 主要仪器设备 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（3）Alamandine通过MrgD受体抑制NOX4诱导自噬减轻肺纤维化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 Alamandine通过MrgD受体抑制氧化应激诱导自嗟减轻AngⅡ诱导的肺成纤维细胞胶原沉积 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验材料及方法 |
| 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 Alamandine通过自嗤减轻小鼠肺纤维化 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结与展望 |
| 综述一 肾素-血管紧张素系统与肺部疾病 |
| 综述二 肾素-血管紧张素系统的新成员：Alamandine及MrgD受体 |
| 参考文献 |
| 中英文缩写对照 |
| 博士在读期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（4）TRPC3参与老龄和自发性高血压大鼠心房纤维化的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| TRPC3参与纤维化作用机制的研究进展 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（5）替米沙坦对自发性高血压大鼠左心室肥厚相关蛋白质谱的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 动物 |
| 1.1.2 试剂 |
| 1.1.3 器材 |
| 1.2 分组及给药 |
| 1.3 指标测定 |
| 1.3.1 血压测定 |
| 1.3.2 左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)测定 |
| 1.3.3 左心室壁厚度(left ventricular wall thickness,LVWT)测定 |
| 1.4 标本制备 |
| 1.5 分离部分iTRAQ标记和强阳离子交换分级 |
| 1.6 质谱鉴定 |
| 1.7 蛋白质分析方法 |
| 1.7.1 数据库选择 |
| 1.7.2 Mascot搜索 |
| 1.7.3 蛋白质丰度比分布 |
| 1.8 统计学方法 |
| 2 结 果 |
| 2.1 3组不同干预时间的血压水平 |
| 2.2 3组的LVMI、LVWT |
| 2.3 蛋白质丰度比分布 |
| 2.4 差异蛋白的通路富集分析 |
| 2.4.1 差异蛋白富集通路 |
| 2.4.2 富集通路蛋白质标识 |
| 2.4.3 差异蛋白iTRAQ分析 |
| 3 讨 论 |
| 3.1 上调差异蛋白 |
| 3.2 下调差异蛋白 |
| 3.3 替米沙坦影响左心室肥厚蛋白质的变化 |
| 本主题国内外已有的结论 |
| 本文特色与见解 |
（6）基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化的现代研究 |
| 1 心肌纤维化概念 |
| 2 心肌纤维化发病机制 |
| 3 心肌纤维化的现代治疗 |
| 4 小结 |
| 综述二 心肌纤维化的中医研究进展 |
| 1 从中医角度探讨心肌纤维化病因病机 |
| 2 毒伤血络学说 |
| 3 中医药治疗心肌纤维化 |
| 4 解毒通络方药的现代研究 |
| 5 小结 |
| 实验研究 |
| 第一章 心肌纤维化大鼠模型的构建 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 解毒通络方对大鼠心肌纤维化抑制作用的体内研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 解毒通络方对心肌成纤维细胞TGF-β1/LIMK1信号通路的研究 |
| 1 实验材料 |
| 第一部分 解毒通络方对大鼠体外细胞的作用及机制 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 第二部分 解毒通络方抑制大鼠成纤维细胞增殖机制 |
| 4 实验方法 |
| 5 实验结果 |
| 6 讨论 |
| 7 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（7）基于“心肾相关”理论探讨高血压心衰肾纤维化机制及以方测证干预研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 “心肾相关”理论研究 |
| 1 心力衰竭的中医研究 |
| 1.1 病名研究 |
| 1.2 病因病机研究 |
| 1.3 证型研究 |
| 2 肾纤维化的中医研究 |
| 2.1 病因认识 |
| 2.2 病位概括 |
| 2.3 病机特点 |
| 3 “心肾不交”理论研究 |
| 3.1 理论内涵 |
| 3.2 病理概念 |
| 3.3 病位概括 |
| 3.4 证治概括 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 基于TGF-β/Smad信号通路高血压心衰肾纤维化病理机制及参麦注射液干预研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 试剂与耗材 |
| 1.4 仪器 |
| 1.5 各种实验试剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 高血压心衰肾纤维化大鼠模型的制备与验证 |
| 2.2 实验分组及给药方法 |
| 2.3 大鼠血清TGF-β1、Cystatin C、NGAL及肾功能指标的检测方法 |
| 2.4 大鼠肾脏组织染色方法 |
| 2.5 大鼠肾脏Ⅰ型胶原纤维(ColI)免疫荧光检测方法 |
| 2.6 大鼠肾脏组织TGF-β/Smad信号通路相关纤维化蛋白检测方法 |
| 2.7 大鼠肾脏组织TGF-β/Smad信号通路相关纤维化因子m RNA相对表达量检测方法 |
| 2.8 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 模型的制备与验证 |
| 3.2 大鼠一般情况 |
| 3.3 大鼠给药后血清TGF-β1、Cystatin C与 NGAL比较 |
| 3.4 大鼠给药后24小时尿蛋白定量比较 |
| 3.5 大鼠给药后肾功能生化指标的比较 |
| 3.6 大鼠给药后肾脏组织病理学形态比较 |
| 3.7 大鼠胶原容积分数比较 |
| 3.8 大鼠给药后肾脏组织TGF-β1、I型胶原纤维免疫荧光检测 |
| 3.9 大鼠肾脏组织TGF-β/Smad信号通路相关纤维化蛋白检测 |
| 3.10 大鼠肾脏组织TGF-β/Smad信号通路相关纤维化因子m RNA检测 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 含药血清对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞体外生长的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 试剂与耗材 |
| 1.4 仪器 |
| 1.5 各种实验试剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物分组与给药 |
| 2.2 各组大鼠含药血清的制备 |
| 2.3 细胞的消化、计数与传代培养 |
| 2.4 细胞的冻存 |
| 2.5 CCK-8检测方法 |
| 2.6 参麦血清、参附血清、空白血清对大鼠肾小管上皮细胞的作用 |
| 2.7 TGF-β1和吡非尼酮对大鼠肾小管上皮细胞的作用 |
| 2.8 参麦血清、参附血清、空白血清联合TGF-β1、吡非尼酮对大鼠肾小管上皮细胞的作用 |
| 2.9 细胞生长抑制率的计算 |
| 2.10 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 参麦血清、参附血清、空白血清对大鼠肾小管上皮细胞的作用 |
| 3.2 TGF-β1和吡非尼酮对大鼠肾小管上皮细胞的作用 |
| 3.3 参麦血清、参附血清、空白血清联合TGF-β1、吡非尼酮对大鼠肾小管上皮细胞的作用 |
| 4 结论 |
| 第四部分 含药血清对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞相关纤维化因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 仪器 |
| 1.4 各种实验试剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 各组大鼠含药血清的制备 |
| 2.2 不同含药血清对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞相关纤维化蛋白表达的影响 |
| 2.3 不同含药血清对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞相关纤维化因子mRNA表达的影响 |
| 2.4 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同血清对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞相关纤维化蛋白表达的影响 |
| 3.2 不同血清对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞相关纤维化因子mRNA表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 博士研究生攻读学位期间科研情况 |
| 1.公开发表论文 |
| 2.主持及参与课题 |
| 综述 高血压心衰肾脏纤维化机制中西医研究进展 |
| 参考文献 |
（8）SSBP1通过P53抑制AngⅡ诱导的心肌纤维化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1. 心肌纤维化与肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的关系 |
| 2. 心肌纤维化的调控性细胞因子 |
| 3. 氧化应激和炎性因子 |
| 4. 细胞内的钙离子 |
| 5. 细胞凋亡与心肌纤维化的关系 |
| 6. SSBP1与心肌纤维化的关系 |
| 7. P53与心肌纤维化的关系 |
| 第二章 制备Ang Ⅱ诱导的小鼠心肌纤维化模型 |
| 2.1 实验方法 |
| 2.2 统计方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 缬沙坦通过SSBP1抑制Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化主要试剂 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.2 统计方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 结论 |
| 第四章 SSBP1和P53对AngⅡ刺激的MCFs增殖能力和胶原蛋白合成的影响 |
| 4.1 实验方法 |
| 4.2 统计方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 缩略词 |
| 读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（9）ADAMTS16通过激活TGF-β1调控心肌纤维化和心功能障碍（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 心衰与心肌纤维化概念 |
| 1.2 细胞外基质的代谢平衡 |
| 1.3 细胞外基质和细胞通讯 |
| 1.4 心肌纤维化相关动物模型 |
| 1.5 CFs在心肌损伤修复中的作用 |
| 1.6 参与心肌损伤修复的MFs的来源 |
| 1.7 心肌纤维化的治疗靶点 |
| 1.8 心肌纤维化的病理生理学 |
| 1.9 TGF-β1在心脏损伤修复中的活化 |
| 1.10 ADAMTS16 与心血管疾病 |
| 1.11 研究意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验相关仪器 |
| 2.2 实验相关软件 |
| 2.3 主要试剂材料与常用溶液 |
| 2.4 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 主动脉弓缩窄手术后,小鼠左心室中ADAMTS16 蛋白和mRNA表达量显着上调 |
| 3.2 Adamts16 mRNA表达量在主动脉弓缩窄后的CFs中显着上调,而在CMs中没有明显变化 |
| 3.3 在TAC小鼠来源的CFs中,Adamts16 mRNA的表达水平与心肌纤维化标志物呈正相关性 |
| 3.4 ADAMTS16 参与CFs细胞的表型转化 |
| 3.5 ADAMTS16与LAP-TGF-β1 的相互作用研究 |
| 3.6 ADAMTS16与LAP-TGF-β1 结合介导LAP-TGF-β1 的激活 |
| 3.7 小分子肽RRFR诱导LAP-TGF-β1 的激活 |
| 3.8 小分子肽RRFR促进TAC小鼠心肌肥厚 |
| 3.9 小分子肽RRFR促进TAC小鼠心肌纤维化 |
| 3.10 TAC手术后小鼠心脏中ADAMTS其他家族成员的变化 |
| 4 讨论 |
| 5 总结与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 附录2 本文所用到的主要英文缩略语 |
（10）心梗后纤维化心肌ECM蛋白表达谱构建及水蛭素的干预效应研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 ECM重建与心肌梗死后心肌纤维化的发生机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 心肌梗死后心肌纤维化的早期识别与临床干预 |
| 参考文献 |
| 综述三 水蛭及其有效成分干预心血管疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 研究一 心肌梗死后纤维化心肌ECM蛋白表达谱的构建与生信分析 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究二 水蛭素调节ECM表达干预大鼠心梗后心肌纤维化的效应机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究三 水蛭素干预Ang Ⅱ诱导乳鼠心肌成纤维细胞ECM表达的机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 基金项目 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 攻读博士学位期间发表论文 |
| 附件 |
四、纤维粘连蛋白对培养的自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响（论文参考文献）
- [1]肠道菌群代谢产物丁酸调控心肌梗死大鼠胶原表达的机制研究[D]. 宋潼潼. 吉林大学, 2021(01)
- [2]miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究[D]. 孙敬辉. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]Alamandine通过MrgD受体抑制NOX4诱导自噬减轻肺纤维化[D]. 刘清霞. 南方医科大学, 2021(02)
- [4]TRPC3参与老龄和自发性高血压大鼠心房纤维化的作用机制研究[D]. 罗郸. 西南医科大学, 2021(01)
- [5]替米沙坦对自发性高血压大鼠左心室肥厚相关蛋白质谱的影响[J]. 冯宇,周曼丽,王健章,张家齐,钱舒乐,简维雄. 中华高血压杂志, 2020(08)
- [6]基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用[D]. 宋晶. 长春中医药大学, 2020(08)
- [7]基于“心肾相关”理论探讨高血压心衰肾纤维化机制及以方测证干预研究[D]. 姚涛. 湖南中医药大学, 2020(02)
- [8]SSBP1通过P53抑制AngⅡ诱导的心肌纤维化[D]. 田海萍. 南方医科大学, 2020(01)
- [9]ADAMTS16通过激活TGF-β1调控心肌纤维化和心功能障碍[D]. 胡长清. 华中科技大学, 2020(01)
- [10]心梗后纤维化心肌ECM蛋白表达谱构建及水蛭素的干预效应研究[D]. 于永慧. 中国中医科学院, 2019(12)