一、兔抗猪Ⅱ型胶原抗血清的制备与检测（论文文献综述）
田佳琪[1]（2019）在《猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株全基因组测序及HSP100/Clp基因转录水平差异分析》文中研究指明化脓隐秘杆菌（Trueperella pyogenes）又名化脓放线菌或化脓棒状杆菌。化脓隐秘杆菌可通过侵染易感动物的黏膜和皮肤诱发化脓性炎症,该菌也可与其他病原菌混合感染。本研究建立的间接ELISA方法可用于调查猪群中化脓隐秘杆菌抗体情况,该方法可作为化脓隐秘杆菌抗体检测的一种新手段。本研究采用二代加三代测序技术分别对猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株进行全基因组测序,完成了猪源化脓隐秘杆菌强毒株（TP-2849;NZCP029004.1）与弱毒株（TP4479;NZCP029001.1）的基因岛预测、致病菌毒力因子预测、抗生素抗性基因预测、COG注释、KEGG注释、GO注释与基因组圈图的绘制,以上结果填补了猪源化脓隐秘杆菌全基因组的相关数据。Virulence Factors Database（VFDB）数据库预测结果中发现,猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株中均存在5种HSP100/Clp基因。本研究以猪源化脓隐秘杆菌强毒株TP-2849与弱毒株TP4479对BABL/c小鼠进行攻毒试验,以实时荧光定量PCR检测5种HSP100/Clp基因在BALB/c小鼠的7种脏器组织和血液中的表达量,结果显示,猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株的5种HSP100/Clp基因表达量差异极显着。绘制猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株生长曲线,结果显示,弱毒株的迟缓期长于强毒株;强毒株的稳定期长于弱毒株的稳定期。综上所述,猪源化脓隐秘杆菌毒力的强弱及生长速率的快慢与5种HSP100/Clp基因转录水平表达量有着紧密的联系。
袁琴琴,刘文营[2]（2019）在《非洲猪瘟及其防控措施》文中认为近年来,在全世界范围内由非洲猪瘟病毒引发的猪瘟疫情屡见报道,并呈现频率高、影响范围广和持续时间长的特征。猪肉及其制品是我国居民消费量最大的动物蛋白质,非洲猪瘟疫情的持续爆发严重打击了消费者的消费耐心,极大阻碍了生猪养殖和猪肉制品加工产业的发展,带来了严重负面影响。该文通过对非洲猪瘟病毒、传播途径、鉴定方法和疫苗研究等方面的分析,结合我国生猪养殖产业和畜产品消费的现状等因素,提出了可行的控制措施。针对非洲猪瘟病毒及其疫情的控制,该文认为通过控制传染源、切断传播途径和采取适当措施保护生物群体,并建立长效运行机制,实现对实施过程的监督和管理。通过多维度、多层次控制措施的实施能够抑制疫情的大面积爆发,将有力保护猪肉制品生产安全,但是彻底消灭非洲猪瘟病毒需要所有国家的有效合作,将是一个十分漫长艰辛的过程。
陈奕明[3]（2015）在《异种脱细胞动脉基质修复胆道上皮及滇南小耳猪肝外胆道缺损的实验研究》文中进行了进一步梳理第一部分人源脱细胞动脉基质的制备及其组织学特点目的：通过制备人源脱细胞动脉基质及胆道基质,观察其组织学特点并比较差异,筛选合适的组织工程胆道修复材料。方法：利用昆明医科大学附属甘美医院公民心脏死亡后器官捐献获得的脾动脉组织、部分腹主动脉和肝外胆道组织,使用1%十二烷基磺酸钠、1%聚乙二醇辛基苯基醚、0.25%胰酶进行脱细胞处理,使用苏木精—伊红染色观察人源动脉及肝外胆道组织脱细胞前、后组织学特点,使用扫描电子显微镜观察脱细胞后的动脉组织及肝外胆道组织的组织学特点。提取脱细胞前、后的动脉及肝外胆道组织的总DNA,分光光度计定量测定DNA含量,比较差异。结果：脱细胞后的动脉组织与肝外胆道组织苏木精—伊红染色未见明显的细胞残留,与未脱细胞的组织相比具有明显的组织学差异。扫描电子显微镜下,脱细胞后的动脉组织细胞外胶原纤维完整,分层清晰,具有较好的孔隙率,脱细胞后的脾动脉内膜厚度为114.83±21.67μm,脱细胞后的肝外胆道组织内膜厚度为19.87±4.52μm,二者比较差别具有统计学意义（P=0.000）。脱细胞后脾动脉及肝外胆道组织DNA含量明显降低,与未脱细胞处理的相应组织相比,差异均具有统计学意义（P=0.000,P=0.000）。结论：1%十二烷基磺酸钠、1%聚乙二醇辛基苯基醚、0.25%胰酶能够有效脱去人源动脉及肝外胆道组织中的细胞成分,并且保持了完好的细胞外结构,与脱细胞肝外胆道组织相比,脱细胞后的动脉组织具有更厚的内膜、更好的孔隙率,并且与未脱细胞的处理的组织相比,其DNA含量明显减少。由于动脉组织更易获取,且单一捐献者能获取的动脉组织较肝外胆道更为丰富,因此人源脱细胞动脉基质是理想的组织工程胆道的生物支架。第二部分大鼠肝卵圆细胞的分离、培养、鉴定及定向诱导分化为胆管上皮细胞目的：通过体外分离、培养并定向诱导大鼠肝卵圆细胞分化为胆管上皮细胞,获取用于组织工程研究的种子细胞。方法：使用2-乙酰氨基芴喂食+肝部分切除术方法建立大鼠卵圆细胞活化模型,利用蛋白酶E、胶原酶Ⅳ对活化后的大鼠肝脏进行消化,提取原代肝卵圆细胞,使用表皮生长因子、白血病抑制因子以及干细胞生长因子联合方案诱导大鼠肝卵圆细胞,在体外传代过程中,观察细胞形态变化,使用流式细胞检测不同代次细胞标志OV-6、CK-19,应用免疫荧光显微镜观察不同代次细胞OV-6、CK-19表达,应用实时荧光定量PCR检测不同代次细胞中CK-19、γ-GT、AFP、ALB mRNA表达情况。结果：从大鼠肝脏中提取的原代细胞,形态符合肝卵圆细胞特点,OV-6阳性细胞比例为94.30±1.40%, CK-19阳性细胞比例为3.16±1.87%,通过体外诱导,细胞传至第6代时,OV-6阳性细胞比例为4.97±0.21%,CK-19阳性细胞比例为96.17±1.21%,与原代细胞相比,差异具有统计学意义。免疫荧光显微镜观察提示随着细胞代次的增加,OV-6阳性细胞表达逐渐减少,CK-19阳性表达细胞逐渐增多,并且CK-19阳性细胞形态变化符合肝卵圆细胞向胆管上皮细胞分化过程；QRT-PCR检测第2、8、10、12代细胞中CK-19、γ-GT、AFP、ALB mRNA相对表达量,与第2代细胞相比,第12代细胞中CK-19、γ-GT、AFP、ALB mRNA相对表达量（RQ值）分别为5.3471±0.1057、3.4820±0.2393、0.1980±0.0131、0.6724±0.1700,差异具有统计学意义。结论：利用体外培养及表皮生长因子、干细胞生长因子、白血病抑制因子联合诱导方案,成功将OV-6阳性的大鼠肝卵圆细胞诱导分化为CK-19阳性的胆管上皮细胞,细胞形态及表面标志变化及相关基因表达符合肝卵圆细胞向胆管上皮细胞分化的特点。第三部分胆管上皮细胞在体外培养条件下与脱细胞动脉基质的复合生长目的：通过将诱导后的胆管上皮细胞种植于制备的人源脱细胞动脉基质,在体外培养条件下,观察胆管上皮细胞与脱细胞动脉基质的相容性及胆管上皮细胞的生长情况。方法：将制备的脱细胞动脉基质修剪成大小1×1cm大小,培养基浸泡24小时后,将诱导后的胆管上皮细胞调整浓度为5×106/ml,将0.2ml细胞悬液接种于脱细胞动脉基质,37℃培养箱中静置4小时后加入培养基浸没脱细胞动脉基质。种植后4、6、8周,利用免疫荧光显微镜和扫描电子显微镜,观察胆管上皮细胞在脱细胞动脉基质上的生长情况。结果：种植后的第4周,可观察到胆管上皮细胞在脱细胞动脉基质上生长良好,CK-19阳性细胞尚未完全覆盖脱细胞动脉基质,种植后第8周,可见CK-19阳性胆管上皮细胞已完全覆盖1×1cm的脱细胞动脉基质,扫描电子显微镜下,生长良好的胆管上皮细胞已形成上皮样结构。结论：人源脱细胞动脉基质与大鼠来源的诱导胆管上皮细胞在体外培养条件下具有良好的相容性,脱细胞动脉基质能够为作为胆管上皮细胞体外生长的生物支架,胆管上皮细胞在体外培养条件下覆盖1×1cm的脱细胞动脉基质约需要8周的时间。第四部分异种脱细胞动脉基质修复滇南小耳猪肝外胆道缺损的实验研究目的：通过使用人源脱细胞动脉基质对滇南小耳猪肝外胆道缺损模型进行修复,观察异种脱细胞动脉基质对肝外胆道缺损的修复效果,并对修复的机制进行探讨。方法：10只封闭群滇南小耳猪随机分为A、B、C组,A组（n=4）利用异种脱细胞动脉基质对肝外胆道缺损进行修复,B组（n=4）进行胆道横断后端端吻合,C组（n=2）作为空白对照组。术后不同时点抽取静脉血检测血清碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、总胆红素水平并比较组间差异。术后12周处死实验动物,对修补后的肝外胆道进行取材,HE染色观察肝外胆道组织学特点,并应用免疫组化技术,观察修补后的肝外胆道中CK-19、TGF-β1、CTGF、VEGF表达,利用Image Pro Plus软件包,比较组间免疫组化切片累积光密度值差异,并利用扫描电子显微镜,观察修补肝外胆道缺损后脱细胞动脉基质黏膜面细胞生长情况。结果：A组实验动物中,1只实验动物于术后61天死亡,其余实验动物在12周内无死亡。A组实验动物血清总胆红素、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶与B、C组比较,差别有统计学意义。免疫组化提示A组肝外胆道中CK-19、TGF-β1、 CTGF、VEGF表达差别有统计学意义。修补肝外胆道12周后的脱细胞动脉基质中,有大量受体细胞长入,并且有少量新生血管,扫描电镜观察到脱细胞动脉基质内膜面有类似胆管上皮细胞生长,但结构不完整。结论：人源脱细胞动脉基质在修补滇南小耳猪肝外胆道缺损12周后,能够部分重建缺失的肝外胆道结构,并能部分重建血供,受体与异种脱细胞动脉基质相容性良好,胆管上皮细胞能够在脱细胞动脉基质表面部分再生。但脱细胞动脉基质修复后的肝外胆道与正常胆道仍有较大差异,仅能实现结构重建,若期望达到功能重建的目的,尚需进一步研究。
张思春[4]（2012）在《人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原介导的猪血管内皮细胞永生化研究》文中认为血管内皮细胞（EC）指血管内表面形成的单层扁平细胞，它们在多种生理过程中发挥着重要的作用。猪的血管内皮细胞是猪瘟病毒（CSFV）的主要靶细胞，其感染CFSV后可引起严重的广泛性出血，是导致病猪死亡的主要原因之一。因此EC是研究CSFV感染及致病机制的良好细胞模型。原代EC作为一种终末分化的细胞，在体外的培养时间有限，传代10次左右就会进入衰老期而不能再继续增殖。反复分离原代EC不仅费时费力，而且各批次细胞间存在差异，不能保持各种细胞生理指标的稳定性。为了在CSFV感染与致病机制的研究过程中拥有稳定的、充足的细胞材料，我们拟建立能在体外无限培养的永生化猪EC细胞系。本研究首先采集新生小猪脐带，分离出静脉血管，灌注0.1%的I型胶原酶溶液，在37℃水浴消化10min后收集并培养血管内皮细胞。从共计200多条脐静脉中分离获得了大量的猪脐静脉血管内皮细胞（SUVEC）。这些细胞呈单层铺路石样排列生长，2～3d能长满单层，von Willbrand factor阳性，并能大量摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil-Ac-LDL），证明这些细胞为血管内皮细胞。前2～6代的SUVEC生长速度较快，可用于CSFV感染研究，之后细胞生长速度逐渐减慢，总共可培养10代左右。为了提高基因重组效率，本研究使用重组逆转录病毒介导的基因转导来将人端粒酶催化亚基（hTERT）基因或SV40大T抗原（SV40LT）基因分别转移进入SUVEC中。重组逆转录病毒载体pBABE-neo-hTERT和pBABE-puro-SV40LT分别与pVSV-G质粒共转染到GP2-293细胞中，收集假病毒液并感染SUVEC，利用G418或嘌呤霉素筛选出阳性克隆，并进行传代研究和细胞形态学及表型鉴定。获得的两个稳定的猪血管内皮细胞系分别命名为SUVEC-hT（携带hTERT基因）和SUVEC-ST（携带SV40LT基因）。两种细胞系均呈铺路石样单层排列生长，具有高度的增殖活性，生长速度比原代血管内皮细胞快，能稳定地传代培养而不表现衰老细胞的特征，迄今已培养至第120代和第115代，细胞生长仍然稳定，形态正常。利用RT-PCR及Western Blotting检测到SUVEC-hT细胞系持续表达hTERT，SUVEC-ST细胞系持续表达SV40T抗原。SUVEC-hT细胞还表达特异的内皮细胞标志CD31、CD34和von Willebrand factor，并能摄取Dil-Ac-LDL。SUVEC-ST细胞系持续表达CD31和CD34分子，并能摄取Dil-Ac-LDL。核型分析表明，两种细胞系均保持与SUVEC相同的染色体数目和形态，含有38条染色体及正常的核型。细胞保持贴壁依赖性、接触抑制性，并且不能在软琼脂中生长。细胞增殖能力研究表明，这两个细胞系保持血清依赖性，它们不能在无血清培养基中生长；细胞增殖速度随着血清浓度的增加而加快，在血清浓度为10%时达到最大值，更高的血清浓度及内皮细胞生长支持物对细胞的生长没有进一步的促进作用。CSFV感染结果表明，两个细胞系保持了对CSFV的敏感性。以上研究表明，本研究在成功分离培养SUVEC的基础上，通过转录病毒转导的方法利用hTERT或SV40LT基因成功地建立了永生化的猪血管内皮细胞系SUVEC-hT及SUVEC-ST。它们保留了EC的主要生物学特征，并且是正常的而非转化的细胞。这些细胞将有助于出血性疾病病毒如CSFV的致病机理研究。
方富贵[5]（2010）在《重组MBP—GnRH—I6研制及其免疫公猪的效果与机理的研究》文中认为目的:动物去势术仍是畜牧生产中一个急需解决的问题。因为传统的手术去势往往遗留后遗症,且在施术过程中对人畜的安全构成威协等,而免疫去势法可以克服传统方法的不足。本研究系统地研究了免疫去势疫苗MBP-GnRH-I6的制备、效果以及免疫去势的机理,旨在研制出一种免疫原性强且成本低的免疫去势疫苗并阐明其去势的机制。方法:（1）将人工合成的GnRH-I六聚体基因插入麦芽糖结合蛋白融合表达系统载体pMAL-c4x中,重组质粒转化到大肠杆菌（E.coli TB1）中并用IPTG进行诱导表达,多糖树脂（amylose resin）亲和层析法纯化蛋白。应用SDS-PAGE、HPLC法对纯化蛋白进行分析。Western blot鉴定融合蛋白的反应原性。（2）同龄健康的杜洛克×长白×大白初生公猪,随机平均分为3组,分别为免疫组,阳性对照组（不去势组）和阴性对照组（手术阉割组）。用PBS溶解MBP-GnRH-I6,并与AL（OH）3佐剂充分乳化。免疫组猪颈部肌肉注射2mL的乳化剂（含1mg MBP-GnRH-I6）,采用同样的剂量与路线加强免疫一次。实验期间从前腔静脉采血置于4℃过夜,然后4℃2000g离心20min,收集血清-80℃保存。游标卡尺测量阴囊直径,酶联免疫分析法测血清GnRH-I抗体效价,放射免疫分析法测血清睾酮浓度,屠宰时取睾丸,称重并测量大小,取睾丸组织用福尔马林固定,制做5μm厚的切片,HE染色后观察其组织学变化,随机选取每头猪的5张睾丸组织切片,用形态学分析软件统计生精小管中不同发育阶段的生殖细胞数目,探明MBP-GnRH-I6的免疫去势效果。（3）屠宰后,迅速取出下丘脑、腺垂体和睾丸,置于液氮中,-80℃保存。采用实时荧光定量PCR法,分析下丘脑GnRH-I和GnRH-IR mRNA,垂体中GnRH-IR,FSHβ和LHβmRNA以及睾丸中GnRH-IR、FSH受体、LH受体、3βHSD和17βHSD mRNA的变化。透射电镜观察垂体促性腺激素细胞,睾丸生精细胞、支持细胞和间质细胞的超微结构,探讨MBP-GnRH-I6主动免疫对生殖轴上相关生殖激素及其受体的影响以及垂体和睾丸组织超微结构的变化。（4）免疫前和屠宰时称猪体重,酶联免疫分析法检测血清猪生长激素,放射免疫分析法检测血清IGF-I水平,Pearson相关分析血清睾酮与IGF-I的相关性,探讨免疫去势猪生长快的初步机理。（5）HPLC法分析背膘脂肪中雄烯酮和3-甲基吲哚的含量,探明MBP-GnRH-I6主动免疫对公猪肉膻味的影响。结果:（1）与麦芽糖结合蛋白基因融合的GnRH-I六聚体基因在E.coli TB1中能够高效表达,且为可溶性表达,经多糖树脂亲和层析纯化后,获得高纯度的MBP-GnRH-I6融合蛋白（纯度达97.68%）,其分子量大小与理论值（50kDa）一致,且Western blot表明MBP-GnRH-I6融合蛋白与GnRH-I抗体发生特异性反应。（2）MBP-GnRH-I6主动免疫能诱导公猪产生高效的抗GnRH-I抗体,导致血清睾酮浓度显着下降（P<0.05）,阴囊直径增大缓慢且比阳性对照组短（P<0.05）,屠宰时睾丸的纵径、横径、纵周长、横周长和重量均小于阳性对照组（P<0.05）,睾丸组织切片显示,生精小管严重发育不良,精原细胞、初级精母细胞和精子细胞退化且没有精子,管壁不同发育阶段的生精细胞数目明显减少（P<0.01）。（3）免疫组,阳性对照组和阴性对照组公猪下丘脑GnRH-IR和GnRH-I mRNA表达差异不显着（P>0.05）,垂体中FSHβmRNA、LHβmRNA显着地低于阴、阳对照组（P<0.05）,GnRH-IR mRNA显着地低于阴性对照组和阳性对照组（P<0.05）。免疫组公猪睾丸FSH受体、LH受体mRNA表达均显着地低于阳性对照组（P<0.05）,但3βHSD和17βHSD mRNA却高于阳性对照组（P<0.05）。超微结构显示,免疫猪垂体促性腺激素细胞颗粒减少,睾丸生精小管基膜增生,初级精母细胞线粒体数量明显减少,精子细胞核内染色质聚集成块状,分布于核膜四周,细胞器少,支持细胞线粒体少数空泡变性,线粒体嵴断裂。间质细胞少数线粒体空泡变性,胞浆内溶酶体增多。（4）MBP-GnRH-I6主动免疫猪体重显着重于阴性对照组（P<0.05）,但不影响公猪血清pGH水平（P>0.05）。在17～21周龄时,免疫组公猪血清IGF-I浓度显着低于阳性对照组（P<0.05）,21～25周龄时免疫组公猪血清IGF-I显着高于阴性对照组（P<0.05）。相关分析表明血清睾酮与IGF-I呈正相关。（5）免疫组背膘脂肪雄烯酮下降,和阴性对照组一样低于检测下限;但是免疫组、阳性对照组和阴性对照组公猪3-甲基吲哚水平差异不显着（P>0.05）。结论:（1）成功构建出GnRH-I6基因工程体,获得高纯度且具有良好反应原性的MBP-GnRH-I6。（2）MBP-GnRH-I6主动免疫使公猪血清睾酮浓度维持在较低的水平,睾丸显着萎缩,表明是成功的免疫去势。（3）MBP-GnRH-I6主动免疫降低公猪垂体FSHβmRNA、LHβmRNA和GnRH-IR mRNA以及睾丸FSH受体、LH受体、3βHSD和17βHSD mRNA的表达,损伤了垂体促性腺激素细胞及睾丸组织的支持细胞、间质细胞和生精细胞的超微结构。揭示MBP-GnRH-I6主动免疫可能通过降调生殖轴生殖激素及其受体mRNA数量,以及破坏生殖轴细胞的亚显微结构影响公猪生殖机能。（4）MBP-GnRH-I6主动免疫改变了公猪生长性能,增加体重,其作用途径可能是睾酮通过调控血清IGF-I水平来调控的。（5）MBP-GnRH-I6主动免疫降低脂肪雄烯酮含量,消除膻味,改善了肉质。
张慧兴[6]（2010）在《异种肌腱移植修复山羊跟腱的实验研究》文中研究指明目的研究异种肌腱替代同种异体肌键移植修复肌腱缺损的可行性及移植后的生物力学以及组织形态学改变。方法成年山羊24只,12-15m,体重28.5-37kg,雌雄不限,随机分2组,使用异种肌腱（猪）为实验组、使用异体肌腱为对照组,各8只。每组术后又随机分为4w、8w、12w三个观察时相小组,每组4只。均采用山羊左后肢跟腱部分缺损作为修复模型。以氯胺酮麻醉山羊,常规切开手术造成跟腱2cm缺损,取肌腱移植物约6cm,稍跖屈踝关节维持跟腱缺损约2cm,以5／0肌腱套针按编织缝合法桥接缺损的肌腱。全层缝合皮肤,伤口以无菌纱块覆盖。以管型石膏配合铁丝将山羊左后腿固定于稍跖屈位。术后抗生素预防感染,不给免疫抑制剂。术后4w松开石膏,自由活动。术后分4w、8w、12w三个时间点处死动物,解剖手术区域,肉眼观察粘连程度、图像分析,免疫水平检测,观察病理切片中组织学变化,并作生物力学性能测试。结果大体观察：实验组：术后4w解剖过程中可见肌腱色泽正常,吻合口稍膨大,瘢痕较大,质地较硬,周围无明显组织水肿,肌腱表面尚光滑,周围疤痕组织粘连明显,滑动度差。个别与腱鞘呈宽带样粘连,但仍可锐性分离。术后8w、12w随时间推移,对比4w时情况肌腱移植段可见纤维粘连减少,滑动度稍变大,周围肉芽组织无明显增生、增宽,锐性分离后见吻合口已愈合。随时间推移粘连程度稍减低,滑动度稍有提高。对照组：大致与实验组相同,术后4w解剖过程可见肌腱色泽正常,吻合口少许膨大,周围无明显组织水肿,肌腱表面光滑,周围有明显的粘连带,周围瘢痕组织明显,滑动度差。术后8w、12w,周围疤痕组织粘连仍然明显,滑动度较前有所改善,周围疤痕组织稍软。随时间推移,肌腱粘连程度稍降低,滑动度稍改善。术后4w、8w、12w实验组与空白组肉眼观察粘连无明显差异（P>0.05）。体液免疫检测：检测羊白细胞介素-2,4w、8w、12w,实验组、对照组与正常值,P>0.05,且两组之间无显着性差异。检测羊白细胞介素-6,4w时,实验组、对照组与正常值,P<0.05,但两组之间无显着性差异。8w、12w时,实验组、对照组与正常值,P>0.05,两组间对比,P>0.05。生物力学测试：术后4w,实验组与对照组肌腱移植段的最大抗拉力值。由表5可知,4w、8w、12w,实验组与对照组的最大载荷无明显差异。12w与4w相比,最大载荷有明显差异,随时间延长而增加,但均未达到正常肌腱水平。提示异种肌腱移植后生物力学性能可以达到异体肌腱整体水平。异种肌腱最大载荷随时间延长而增加。病理切片检查：异种移植组术后4w与受体肌腱及周围腱膜有纤维粘连,体部表层可见新生纤维组织包绕,局部可见成纤维细胞伸入异种肌腱表层,周围的纤维组织内可见少量散在分布的浆细胞,缝合处可见小血管出现,与受体肌腱粘连紧密。术后8w胶原纤维束间较前有更多肌腱细胞长入,这些细胞在形态上有纤维母细胞的特征,异种肌腱被分割成束状,腱束内肌腱细胞沿长轴排列,不甚整齐,在移植腱的两端有小血管形成。12w缝合处粘连纤维增加,胶原纤维长入移植的异种肌腱,异体肌腱呈多个团块状,被纤维组织分割,其中,部分肌腱镜下可见局部腱细胞和胶原纤维变性明显,局部可见坏死,周围少量炎细胞,缝合处可见大量增生的成纤维细胞和毛细血管,与异体肌腱结合紧密。中间部异体肌腱：异体肌腱被纤维条索分割成多个团块状,团块内纤维组织变性,异体肌腱周围可见新生的纤维组织包绕,局部可见新生的成纤维细胞伸入异体肌腱内部,周围的纤维组织内可见少量散在分布的浆细胞。异体肌腱移植组术后4w,移植肌腱体部细胞化进行中,表层可见2～5层细胞覆盖,构成新的腱外膜。肌腱内部,进入肌腱的细胞不仅分布在较远纤维束间,腱束内可见有顺腱长轴方向排列的细胞,具有与自体肌腱相似的形态。在移植腱的两端有小血管出现,远侧段小血管长入较多,与受体肌腱及周围腱膜粘连较少。同样未见明显淋巴细胞浸润现象。8w,缝合部与腱周组织间的纤维联系更多。腱束内的肌腱细胞沿长轴方向排列更整齐,小血管浸润更多。12w肌腱缝合部愈合更加完善,重叠面间的界线及腱外膜小时,断端与腱表的接触可见细胞增殖。移植腱内的胶原纤维束无可见的变形现象,纤维束排列整齐,主体是胶原纤维,弹力纤维含量很少。形态上与邻近缝合部的正常自体肌腱相似,腱内细胞成分多于后者。结论从免疫反应、肌腱愈合过程、生物力学、粘连情况考虑,异种肌腱作为肌腱缺损修复的移植物,和异体肌腱没有差异。
王宝松[7]（2009）在《猪链球菌2型MRP-FBP串联黏附素的免疫保护力》文中指出猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2, SS2）是重要的人畜共患病病原,主要引起脑膜炎、肺炎、败血症和突发性死亡等。溶菌酶释放蛋白（MRP）和纤维蛋白原结合蛋白（FBP）是SS2的两种粘附素。经DNAstar分析其基因序列,各选抗原性较强的片段,PCR扩增,单独及串连两片段构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a–fbp和pET32a-mrp-fbp,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定,表达蛋白的分子量分别为MRP 47KD、FBP 52KD、MRP-FBP 80kD。MRP-FBP的Western blot结果表明,重组蛋白可被SS2阳性血清所识别。免疫保护试验表明,串联表达的融合蛋白对Balb/c小鼠的保护率达80%,是目前为止筛选到的制备SS2亚单位疫苗保护力最高的短片段串联免疫原。
姜旭淦,朱敏娟,葛彦文,吴亮,陈盛霞,许化溪[8]（2008）在《Ⅱ型胶原蛋白抗血清的制备和检测》文中提出目的:探讨Ⅱ型胶原蛋白（collagen protein typeⅡ,CⅡ）抗体产生规律,制备CⅡ抗血清。方法:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔,每隔10 d收集血清,以改良间接ELISA法检测抗CⅡ抗体效价。结果:鸡CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天抗体效价为1∶3 200,第20天升至1∶204 800;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别达到1∶409 600和1∶819 200。猪CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天血清中未能检测出抗体,第20天血清抗体效价为1∶3 200;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别为1∶51 200和1∶102 400。结论:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔后,经一定潜伏期血清中出现抗体,可以获得高效价抗CⅡ抗体血清。抗体产生情况符合机体初次及再次免疫应答的有关规律,但血清抗体产生的潜伏期和效价与不同种属来源的胶原蛋白有关。
戴梦红[9]（2005）在《猪抵抗素、脂联素和脂联素受体基因的克隆和分子特征》文中研究表明脂肪组织不仅是储藏及供给能量的场所，而且还是一个代谢十分活跃，功能复杂的内分泌器官，它能分泌许多脂肪细胞因子（Adipocytokines），包括肿瘤坏死因子—α（tumor necrosis factor—α，TNFα）、瘦素（leptin）、白介素—6（interleukin—6，IL-6）、脂联素（adiponectin）和抵抗素（resistin）等。这些脂肪细胞因子通过内分泌或旁分泌方式对全身各器官系统功能具有重要调节作用，特别是参与调节与肥胖相关的胰岛素抵抗和葡萄糖代谢紊乱。胰岛素抵抗也即胰岛素生理作用减弱，是多数2型糖尿病的主要的病理生理缺陷，往往与肥胖密切相关。 抵抗素（resistin）和脂联素（adiponectin）是近来发现的两个最为典型的脂肪细胞因子。Resistin的重要生理作用就是将肥胖与胰岛素抵抗联系起来。对resistin进一步深入研究对于预防、检测和治疗2型糖尿病具有重要指导意义。Adiponectin由脂肪细胞分泌后进入血液，以多种形式在血液中循环。脂联素球状区在体内独立存在，与完整的脂联素功能相似。脂联素能够促进肌肉脂肪酸氧化、降低血浆甘油三酯、通过增强胰岛素的敏感性而促进葡萄糖代谢。另外，脂联素在抗心血管疾病方面也发挥着重要作用。 本文以梅山猪为研究对象，以半定量RT-PCR、Western Bloting和辐射杂种细胞板技术等方法，对抵抗素、脂联素以及脂联素受体进行了基因克隆、表达及染色体定位等研究，取得了如下结果： 1．利用cDNA末端快速扩增（Rapid Amplification of cDNA Ends，RACE）的方法得到了猪resistin cDNA的5’和3’末端，通过拼接得到全长535bp的resistin cDNA序列；利用PCR的方法得到了resistin的全长DNA序列，并对其基因组结构进行分析。结果显示猪resistin cDNA序列含330bp的开放阅读框，编码109aa，分子量为12kDa，推导的氨基酸序列与人resistin氨基酸序列具有75.2％的同源性。猪resistin基因由四个外显子组成，与人resistin基因具有相同的外显子结构，而与小鼠resistin基因结构差异较大。
张永国[10]（2005）在《猪瘟Shimen株致猪血管内皮细胞病变前后表达差异基因寻找及E2基因PK-15细胞表达》文中研究表明猪瘟（Classical Swine Fever,CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的猪急性高度接触性传染性疾病,是严重威胁养猪业,具有重要经济意义的病毒性疾病之一,猪瘟可引起猪的全身组织器官弥漫性出血,小血管和毛细血管内皮细胞发生变性、坏死。猪瘟病毒为黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）成员,基因组大小约12.3kb,含一个大的开放阅读框（ORF）,由11 个编码结构蛋白与非结构蛋白的基因组成。猪瘟病毒对血管组织具有亲嗜性,病理组织学检查时发现,组织器官的出血斑点主要是由于小血管和毛细血管内皮细胞发生肿胀、变性和坏死;梗死灶的发生主要是由于小动脉管内皮细胞发生变性、坏死、剥脱后,血管内膜粗糙,官腔内血栓形成,导致官腔狭窄或闭塞所致。此外,还可见到心肌呈实质变性,但病猪的肾脏等器官的实质细胞没有变性、坏死等病理变化。而目前在体外增殖猪瘟病毒利用的培养细胞大多数是猪肾细胞（如PK–15、PK–2a、SK–6等）,其他还有猪肺、脾、睾丸、骨髓细胞等。这些细胞即使在猪瘟病猪体内都不会发生病理变化,所以在体外受CSFV 感染时不产生CPE也是理所当然的。病理组织学观察发现猪血管内皮细胞在猪瘟感染猪后发生明显的细胞病变,建立猪血管内皮细胞体外培养方法,观察猪瘟病毒感染猪血管内皮细胞致细胞病变后的细胞形态变化和细胞器的变化,探讨猪瘟病毒致猪血管内皮细胞病变的机理。猪瘟病毒E2基因编码的gp55 蛋白是猪瘟病毒的主要保护性抗原,是目前研制猪瘟基因工程疫苗的首选基因。采用来源于猪的PK–15 细胞做为受体细胞,利用哺乳动物细胞表达载体表达E2基因,一方面可充分利用受体细胞遗传密码子的嗜好性,提高重组蛋白的表达量,另一方面因为PK–15 细胞来源于猪,后加工与其他表达宿主相比具有无比的优越性,其免疫原性和疫苗的免疫保护力可望得到很大提高,为猪瘟病毒基因工程疫苗投入实际应用奠定基础。本研究由三部分构成,第一部分是建立猪脐静脉血管内皮细胞的培养方法,利用猪瘟病毒Shimen株感染猪脐静脉血管内皮细胞,研究猪瘟Shimen 株致细胞病变效应后的形态变化和细胞器的变化,初步探讨了猪瘟病毒致猪血管内皮细胞病变的分子基础。第二部分利用DDRT–PCR技术分析了猪瘟Shimen 株致猪脐静脉血管内皮细胞病变前后表达差异的基因,共发现了推测为猪瘟Shimen 株致猪血管内皮细胞病变的11条敏感基因。第三部分是利用PK–15 细胞作为受体细胞,表达猪瘟病毒E2基因,为建立以重组蛋白为抗原的猪瘟病毒检测方法和猪瘟基因工程疫苗的应用奠定基础。主要试验和结果如下: 1.选用I 型胶原酶,采用Jaffe 式灌流法成功的分离和培养了猪脐静脉血管内皮细胞。扫描电镜观察和第Ⅷ因子相关抗原（F-ⅧR Ag）检测阳性,证明分离培养的细胞为血
二、兔抗猪Ⅱ型胶原抗血清的制备与检测（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、兔抗猪Ⅱ型胶原抗血清的制备与检测（论文提纲范文）
（1）猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株全基因组测序及HSP100/Clp基因转录水平差异分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 化脓隐秘杆菌的研究进展 |
| 1.1 化脓隐秘杆菌毒力基因的研究进展 |
| 1.2 HSP100/Clp蛋白家族 |
| 1.3 化脓隐秘杆菌的检测方法 |
| 1.4 化脓隐秘杆菌病的临床治疗 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 猪化脓隐秘杆菌的分离鉴定与抗体间接ELISA检测方法的建立 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果与分析 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株全基因组测序与分析 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 测序流程 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 5种HSP100/Clp基因转录水平检测与分析 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 简介 |
| 致谢 |
（2）非洲猪瘟及其防控措施（论文提纲范文）
| 1 非洲猪瘟病毒及其传播 |
| 1.1 非洲猪瘟病毒 |
| 1.2 非洲猪瘟病毒的传播 |
| 2 非洲猪瘟病毒的鉴定及疫苗开发 |
| 2.1 非洲猪瘟病毒的鉴定技术研究 |
| 2.1.1 基于聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction, PCR) 的检测研究 |
| 2.1.2 基于酶联免疫吸附测定技术 (enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA) 的检测研究 |
| 2.1.3 基于重组酶聚合酶扩增技术 (Recombinase polymerase amplification technique, RPA) 的检测研究 |
| 2.2 非洲猪瘟疫苗的制备研究 |
| 3 非洲猪瘟的发生对我国猪肉制品产业的影响 |
| 3.1 非洲猪瘟对我国肉制品生产产业的影响 |
| 3.2 非洲猪瘟对我国本土猪种资源保护的影响 |
| 4 非洲猪瘟的应对策略 |
| 4.1 加强原位检验检疫管理、禁止疫区生猪的跨地区转移 |
| 4.2 加强非洲猪瘟病毒的境外传入防御 |
| 4.3 加强禁止餐厨剩余物进入生猪养殖环节的监管 |
| 4.4 增加屠宰副产物的利用途径, 严控污染物的排放 |
| 4.5 加强猪肉制品的追溯机制建设 |
| 4.6 加强农业保险制度建设, 为受冲击严重企业提供经济援助 |
（3）异种脱细胞动脉基质修复胆道上皮及滇南小耳猪肝外胆道缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| References |
| 第二部分 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| References |
| 第三部分 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| References |
| 第四部分 |
| 前言 |
| 一、实验试剂及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| References |
| 全文总结 |
| 综述 |
| References |
| 攻读学位期间文章发表情况 |
| 致谢 |
（4）人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原介导的猪血管内皮细胞永生化研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 血管内皮细胞生物学 |
| 1.1 内皮细胞的结构 |
| 1.2 内皮细胞的功能 |
| 1.3 内皮细胞的典型特征 |
| 1.4 内皮细胞的培养历史 |
| 第2章 细胞的衰老和永生化 |
| 2.1 细胞的衰老 |
| 2.2 端粒与复制性衰老 |
| 2.3 细胞永生化的方法 |
| 2.4 永生化内皮细胞系 |
| 第二篇 实验内容 |
| 第1章 猪脐静脉血管内皮细胞的分离及培养 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第2章 猪脐静脉血管内皮细胞的永生化 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 导师简介 |
| 致谢 |
（5）重组MBP—GnRH—I6研制及其免疫公猪的效果与机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 图表目录 |
| 缩略词表 |
| 文献综述 GnRH-I 及其疫苗的研究进展 |
| 1 GnRH-I 的特征 |
| 1.1 GnRH-I 基因的结构 |
| 1.2 GnRH-I 的分子结构 |
| 2 GnRH-I 的生理功能 |
| 2.1 调控LH 和FSH 的合成与释放 |
| 2.2 自我激发作用 |
| 2.3 对性腺的作用 |
| 3 GnRH-I 的作用分子机制 |
| 3.1 GnRH-I 受体 |
| 3.2 信号转导 |
| 3.2.1 磷脂酶C/蛋白激酶通路 |
| 3.2.2 G 蛋白偶联 |
| 3.2.3 胞内信息通路 |
| 4 GnRH-I 免疫中和技术 |
| 5 GnRH-I 疫苗的研究 |
| 5.1 GnRH-I 疫苗的发展过程 |
| 5.1.1 第一代GnRH-I 疫苗——化学合成肽疫苗 |
| 5.1.2 第二代GnRH-I 疫苗——基因工程疫苗 |
| 5.1.3 第三代GnRH-I 疫苗—核酸疫苗 |
| 5.2 GnRH-I 疫苗免疫对动物机体的影响 |
| 5.2.1 对动物生殖内分泌的影响 |
| 5.2.2 对生殖器官的影响 |
| 5.2.3 对垂体的影响 |
| 5.2.4 对发情周期的影响 |
| 5.2.5 对生产性能的影响 |
| 5.2.6 对动物生殖的短期与长期效应 |
| 5.3 GnRH-I 疫苗免疫去势的机理 |
| 5.4 GnRH-I 疫苗的应用 |
| 5.4.1 用于去势 |
| 5.4.2 用于避孕、终止妊娠 |
| 5.4.3 用于促进动物生长，提高肉品质量 |
| 5.4.4 用于治疗癌症 |
| 5.5 影响GnRH-I 疫苗免疫效果的因素 |
| 5.5.1 抗原的影响 |
| 5.5.2 佐剂的影响 |
| 5.5.3 其它因素 |
| 5.6 GnRH-I 疫苗商业化的困境 |
| 5.6.1 个体反应差异大 |
| 5.6.2 多次重复注射 |
| 5.6.3 佐剂的副作用 |
| 5.6.4 昂贵的价格 |
| 5.7 GnRH-I 疫苗应用前景 |
| 引言 |
| 第一章 GnRH-16 的原核表达 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 菌株与质粒 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液、试剂及培养基的配制 |
| 1.1.4 主要仪器与用品 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 技术路线 |
| 1.2.2 重组表达质粒的构建 |
| 1.2.3 重组表达质粒的诱导表达 |
| 1.2.4 表达蛋白的分离纯化 |
| 1.2.5 表达蛋白的鉴定 |
| 1.2.6 纯化蛋白的冷冻干燥 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 目的基因合成的结果 |
| 2.2 重组质粒的构建与鉴定结果 |
| 2.3 目的蛋白的诱导表达结果 |
| 2.4 纯化蛋白的纯度鉴定结果 |
| 2.5 目的蛋白的Western blot 鉴定结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 关于原核表达 |
| 3.2 关于重组MBP-GnRH-16 融合蛋白 |
| 3.2.1 GnRH-16 基因序列的设计 |
| 3.2.2 MBP 的作用 |
| 3.3 关于重组MBP-GnRH-16 融合蛋白的表达、纯化与鉴定 |
| 4 小结 |
| 第二章 MBP-GnRH-16 对公猪的免疫去势试验 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 技术路线 |
| 1.2.2 免疫程序 |
| 1.2.3 血样的采集 |
| 1.2.4 阴囊测定 |
| 1.2.5 性腺测量与组织学观察 |
| 1.2.6 公猪血清中抗GnRH-I 抗体测定 |
| 1.2.7 血清睾酮的测定 |
| 1.2.8 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 GnRH-I 抗体效价 |
| 2.2 血清睾酮浓度 |
| 2.3 阴囊直径 |
| 2.4 睾丸发育 |
| 3 讨论 |
| 3.1 免疫应答与血清抗GnRH-I 抗体水平 |
| 3.2 免疫对血清睾酮浓度的影响 |
| 3.3 免疫对睾丸发育的影响 |
| 3.4 关于免疫程序与去势效果 |
| 4 小结 |
| 第三章 MBP-GnRH-16 对公猪免疫去势的机理研究 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 样品的采集 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 技术路线 |
| 1.2.2 基因的定量 |
| 1.2.3 超微结构的观察 |
| 1.2.4 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 生殖轴上相关生殖激素基因的表达变化 |
| 2.1.1 RNA 质量 |
| 2.1.2 标准曲线与扩增曲线 |
| 2.1.3 下丘脑中GnRH-I 和GnRH-IR mRNA 的变化 |
| 2.1.4 垂体中GnRH-IR，FSHβ和LHβmRNA 的变化 |
| 2.1.5 睾丸中GnRH-IR、FSHR、LHR、3βHSD 和17βHSD mRNA 的变化 |
| 2.2 垂体和睾丸中细胞的超微结构 |
| 2.2.1 垂体促性腺激素细胞 |
| 2.2.2 睾丸组织 |
| 3 讨论 |
| 3.1 免疫对下丘脑中GnRH-I 和GnRH-IR mRNA 表达的影响 |
| 3.2 免疫对垂体中GnRH-IR 、FSHβ和LHβmRNA 表达的影响 |
| 3.2.1 对GnRH-IR mRNA 表达的影响 |
| 3.2.2 对FSHβ和LHβmRNA 表达的影响 |
| 3.3 免疫对睾丸中FSHR、LHR、3βHSD 和17βHSD mRNA 表达的影响 |
| 3.3.1 对FSHR 和LHR mRNA 表达的影响 |
| 3.3.2 对3βHSD 和17βHSD mRNA 表达的影响 |
| 3.4 关于垂体促性腺激素细胞超微结构 |
| 3.5 关于睾丸组织的超微结构 |
| 3.5.1 生精小管界膜 |
| 3.5.2 生精上皮 |
| 3.5.3 间质细胞 |
| 4 小结 |
| 第四章 MBP-GnRH-16 主动免疫对公猪体重及生长激素和IGF-I 的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 样品的采集与处理 |
| 1.1.2 试剂盒 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 技术路线 |
| 1.2.2 体重的称量 |
| 1.2.3 血清中IGF-I 的放射免疫测定 |
| 1.2.4 血清中生长激素的酶免测定 |
| 1.2.5 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 体重的变化 |
| 2.2 血清中pGH 水平 |
| 2.3 血清中IGF-I 水平 |
| 2.4 血清睾酮与IGF-I 相关分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 免疫对公猪体重的影响 |
| 3.2 免疫对公猪血清pGH 水平的影响 |
| 3.3 免疫对公猪血清IGF-I 水平的影响 |
| 4 小结 |
| 第五章 MBP-GnRH-16 主动免疫对公猪肉膻味的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 样品的采集 |
| 1.1.2 试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 雄烯酮的 HPLC 测定 |
| 1.2.2 3-甲基吲哚的 HPLC 测定 |
| 1.2.3 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 背膘脂肪雄烯酮含量 |
| 2.2 背膘脂肪 3-甲基吲哚含量 |
| 3 讨论 |
| 3.1 关于雄烯酮 |
| 3.2 关于 3-甲基吲哚 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 本研究尚待解决的问题 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）异种肌腱移植修复山羊跟腱的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 材料与设备 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 实验药品 |
| 3. 肌腱移植物(图2) |
| 4. 实验器材、仪器 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 实验分组 |
| 2. 手术方式:(图4-13) |
| 3. 大体标本观察 |
| 4. 免疫水平测定 |
| 5. 生物力学测定:(图14、15) |
| 6. 组织形态学观察 |
| 二、实验结果 |
| (三) 大体标本观察 |
| (四) 免疫检测 |
| 1. 淋巴细胞毒试验 |
| 2. 对白细胞介素-2的影响 |
| 3. 对白细胞介素-6的影响 |
| (五) 力学测试 |
| (六) 病理切片检查:(图15-20) |
| 三、讨论 |
| 四、小结 |
| 五、结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附:综述 |
| 致谢 |
（7）猪链球菌2型MRP-FBP串联黏附素的免疫保护力（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 第一部分 文献综述 |
| 猪链球菌2 型研究进展 |
| 1 病原学 |
| 2 流行病学 |
| 3 SS2 黏附机制 |
| 4 细胞外基质 |
| 5 SS2 的致病机理 |
| 6 对猪链球菌毒力因子免疫保护作用的研究 |
| 7 临床症状与诊断方法 |
| 8 黏附素与基因工程疫苗 |
| 参考文献 |
| 第二部分 研究报告 |
| 猪链球菌 2 型 MRP-FBP 串联黏附素的免疫保护力 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 菌种和质粒 |
| 1.2 目的片段的获得 |
| 1.3 目的片段的A/T 克隆与鉴定 |
| 1.4 重组质粒PET32A-MRP、PET32A-FBP 的构建与鉴定 |
| 1.5 串联表达载体PET32A-MRP-FBP 的构建与鉴定 |
| 1.6 重组质粒的诱导表达 |
| 1.7 表达产物的WESTERN-BLOT 分析 |
| 1.8 间接ELISA 方法的建立 |
| 1.9 免疫保护试验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 目的基因片段的扩增 |
| 2.2 T/A 克隆的筛选与鉴定 |
| 2.3 重组质粒PET32-MRP、PET32A-FBP 的构建与鉴定 |
| 2.4 串联表达载体PET32A-MRP-FBP 的构建与鉴定 |
| 2.5 表达产物的SDS-PAGE 检测 |
| 2.6 WESTERN BLOT 免疫印迹 |
| 2.7 间接ELISA 方法的建立 |
| 2.8 免疫攻毒保护试验 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（8）Ⅱ型胶原蛋白抗血清的制备和检测（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 免疫用动物 |
| 1.4 Ⅱ型胶原蛋白的提取、纯化和鉴定 |
| 1.5 兔抗Ⅱ型胶原蛋白抗血清的制备与标本采集 |
| 1.6 血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体的检测 |
| 1.7 血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体效价的检测 |
| 2 结 果 |
| 2.1 Ⅱ型胶原蛋白纯度鉴定 |
| 2.2 Ⅱ型胶原蛋白抗体产生情况 |
| 2.2.1 兔抗鸡Ⅱ型胶原蛋白抗体产生情况 |
| 2.2.2 兔抗猪Ⅱ型胶原蛋白抗体产生情况 |
| 3 讨 论 |
（9）猪抵抗素、脂联素和脂联素受体基因的克隆和分子特征（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.Resistin研究进展 |
| 1.1 Resistin的发现 |
| 1.2 Resistin基因结构 |
| 1.3 Resistin蛋白质结构特征 |
| 1.4 Resistin的组织分布 |
| 1.5 Resistin样分子家族(RELMs) |
| 1.6 Resistin的生物学功能 |
| 1.6.1 Resistin与肥胖相关的胰岛素抵抗 |
| 1.6.2 Resistin与炎症反应 |
| 1.6.3 Resistin对葡萄糖的调控作用 |
| 1.7 小结 |
| 2.脂联素及其受体研究进展 |
| 2.1 脂联素的发现 |
| 2.2 脂联素基因 |
| 2.3 脂联素蛋白质结构多态性 |
| 2.4 体内脂联素的表达调控 |
| 2.5 脂联素的功能 |
| 2.5.1 脂联素对葡萄糖和脂代谢的调控作用 |
| 2.5.2 脂联素与动脉粥样硬化 |
| 2.6 脂联素受体 |
| 2.7 小结 |
| 3.研究目的和意义 |
| 第二章 猪抵抗素基因的克隆和表达研究 |
| 1.前言 |
| 2.实验材料与试剂 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 样品采集 |
| 2.1.3 菌株及质粒 |
| 2.2 主要仪器、试剂及溶液配制 |
| 2.2.1 主要仪器 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 主要溶液配制 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 血液白细胞的分离与纯化 |
| 3.2 血液白细胞总DNA提取 |
| 3.3 血液白细胞／组织样品总RNA提取 |
| 3.4 总RNA纯化 |
| 3.5 总RNA含量及纯度鉴定 |
| 3.6 SDS-PAGE和Western杂交 |
| 3.7 目标片段的扩增与纯化 |
| 3.7.1 引物设计 |
| 3.7.2 全长resistin cDNA的扩增 |
| 3.7.3 全长resistin DNA的扩增 |
| 3.8 猪resistin mRNA的组织分布 |
| 3.9 兔抗猪resistin多克隆抗血清的制备 |
| 3.9.1 原核表达载体的构建与鉴定 |
| 3.9.2 重组蛋白质表达 |
| 3.9.3 包涵体提取与重组蛋白质的纯化和鉴定 |
| 3.9.4 抗血清的制备 |
| 3.9.5 抗血清的效价检测(ELISA法检测) |
| 3.9.6 抗血清的Western blotting检测 |
| 3.9.7 抗血清的纯化 |
| 3.10 猪血液样品中天然resistin蛋白的检测 |
| 3.11 数据统计分析 |
| 4.结果与分析 |
| 4.1 猪resistin全长cDNA的克隆 |
| 4.2 猪resistin全长基因的克隆 |
| 4.3 猪resistin mRNA的组织分布 |
| 4.3.1 PCR扩增指数期循环数的确定 |
| 4.3.2 组织表达谱分析 |
| 4.4 兔抗猪resistin多克隆抗血清的制备 |
| 4.4.1 表达载体的构建与鉴定 |
| 4.4.2 重组蛋白质的表达 |
| 4.4.3 重组蛋白质的纯化与鉴定 |
| 4.5 兔抗猪多克隆抗血清的检测 |
| 4.6 猪血液样品中天然resistin蛋白的检测 |
| 5.讨论 |
| 第三章 猪脂联素及其受体基因的克隆、表达及染色体定位研究 |
| 1.前言 |
| 2.实验材料与试剂 |
| 2.1 实验动物和样品采集 |
| 2.2 主要仪器、试剂及溶液配制 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 总DNA提取 |
| 3.2 总RNA提取和纯化 |
| 3.3 猪脂联素及其受体基因片段的扩增 |
| 3.3.1 引物设计 |
| 3.3.2 PCR扩增条件 |
| 3.4 猪脂联素及其受体的染色体定位 |
| 3.4.1 引物设计 |
| 3.4.2 PCR扩增 |
| 3.4.3 数据分析 |
| 3.5 猪脂联素及其受体基因的组织分布 |
| 3.6 猪脂联素受体1基因内含子的扩增 |
| 4.结果与分析 |
| 4.1 猪脂联素及其受体基因片段的分离、序列分析与鉴定 |
| 4.1.1 猪脂联素及其受体基因片段的分离 |
| 4.1.2 基因组片段的序列分析与鉴定 |
| 4.2 猪脂联素及其受体基因染色体定位结果分析 |
| 4.3 猪脂联素及其受体基因的组织分布 |
| 4.4 猪脂联素受体1基因组片段的扩增及其基因组结构分析 |
| 5.讨论 |
| 结论与创新点 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 参考文献 |
| 研究生期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（10）猪瘟Shimen株致猪血管内皮细胞病变前后表达差异基因寻找及E2基因PK-15细胞表达（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 文献综述 |
| 第一章 猪瘟及猪瘟病毒的研究进展 |
| 1.1 猪瘟的研究进展 |
| 1.1.1 猪瘟概述 |
| 1.1.2 猪瘟的流行病学和临床症状 |
| 1.1.3 猪瘟病毒的细胞培养 |
| 1.1.4 CSFV 的侵入及其在体内的增殖 |
| 1.1.5 猪瘟的诊断和防制 |
| 1.2 猪瘟病毒的形态及理化特性 |
| 1.3 CSFV 的分子生物学研究进展 |
| 1.3.1 CSFV 的基因组结构 |
| 1.3.2 CSFV 基因组全序列研究概述 |
| 1.3.3 CSFV 的5′-NCR 和3′-NCR 结构 |
| 1.3.4 CSFV 多聚蛋白的翻译与加工 |
| 1.3.5 CSFV 基因组编码的蛋白质及其功能 |
| 1.4 CSFV 的分子免疫学研究进展 |
| 1.5 猪瘟病毒的致病机理 |
| 1.5.1 猪瘟病毒与宿主细胞的相互作用 |
| 1.5.2 致细胞病变型CSFV |
| 1.5.3 NS3 基因在病毒的复制及病毒与宿主细胞关系中的作用 |
| 第二章 差异显示技术及血管内皮细胞的体外培养研究进展 |
| 2.1 基因表达研究方法 |
| 2.1.1 Northern 杂交法 |
| 2.1.2 S1 核酸酶保护法 |
| 2.1.3 差减杂交技术 |
| 2.1.4 差异显示法 |
| 2.2 差异显示逆转录PCR 法 |
| 2.2.1 DDRT-PCR 方法的基本原理 |
| 2.2.2 DDRT-PCR 的引物设计 |
| 2.2.3 DDRT-PCR 的的使用策略 |
| 2.2.3.1 实验材料的选择 |
| 2.2.3.2 RNA 的提取 |
| 2.2.3.3 DDRT-PCR 的逆转录 |
| 2.2.3.4 DDRT-PCR 的PCR |
| 2.2.3.5 差异条带的回收和再扩增 |
| 2.2.3.6 差异片段的筛选鉴定、克隆、顺序 |
| 2.2.3.7 全基因序列的获得 |
| 2.2.4 DDRT-PCR 的展望 |
| 2.3 血管内皮细胞培养的发展简况 |
| 2.3.1 血管内皮细胞体外培养的应用 |
| 2.3.1.1 血管内皮细胞的结构 |
| 2.3.1.2 血管内皮细胞的功能 |
| 2.3.2 血管内皮细胞培养的特性 |
| 2.3.2.1 体外培养内皮细胞的来源 |
| 2.3.2.2 体外培养内皮细胞的形态结构 |
| 2.3.3 体外培养内皮细胞的条件 |
| 2.3.3.1 常用的合成培养基 |
| 2.3.3.2 血清 |
| 2.3.3.3 促生长因子 |
| 第三章 猪瘟基因工程疫苗的研究进展 |
| 3.1 猪瘟传统疫苗研究 |
| 3.2 猪瘟基因工程疫苗研究的意义 |
| 3.3 猪瘟基因工程疫苗研究的进展 |
| 试验研究 |
| 第四章 猪瘟Shimen 株对猪血管内皮细胞的致病变作用 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 细胞培养用材料和毒株 |
| 4.1.2 细胞培养基 |
| 4.1.3 细胞培养用溶液 |
| 4.1.4 检测用试剂 |
| 4.1.5 主要仪器设备 |
| 4.1.6 引物的设计与合成 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 猪脐静脉血管内皮细胞的分离培养及鉴定 |
| 4.2.1.1 培养液的准备 |
| 4.2.1.2 猪脐静脉血管内皮细胞的分离 |
| 4.2.1.3 脐静脉血管内皮细胞的原代培养 |
| 4.2.1.4 血管内皮细胞的传代培养 |
| 4.2.1.5 血管内皮细胞的纯化 |
| 4.2.1.6 血管内皮细胞生长曲线的测定 |
| 4.2.1.7 血管内皮细胞的鉴定 |
| 4.2.2 猪瘟Shimen 株致猪血管血管内皮细胞和PK-15 细胞 |
| 4.2.2.1 猪脐静脉血管内皮细胞的分离培养及鉴定和PK-15 细胞复苏 |
| 4.2.2.2 病毒材料的准备 |
| 4.2.2.3 猪瘟病毒Shimen 猪和C-株接种猪血管内皮细胞 |
| 4.2.2.4 猪瘟病毒Shimen 猪和C-株接种猪血管内皮细胞后的观察 |
| 4.2.2.5 猪瘟Shimen 株和C-株接种猪血管内皮细胞的电镜观察 |
| 4.2.3 猪瘟Shimen 株和C-株接种猪血管内皮细胞和PK-15 细胞后的检测 |
| 4.2.3.1 猪瘟Shimen 株和C-株接种PK-15 细胞后的荧光检测 |
| 4.2.3.2 猪瘟Shimen 株接种猪血管内皮细胞后的PCR 检测 |
| 4.2.4 猪瘟Shimen 株致猪血管内皮细胞病变后E2 和P80 基因的检测 |
| 4.2.4.1 毒株 |
| 4.2.4.2 病毒RNA 提取 |
| 4.2.4.3 RT-PCR 和nPCR |
| 4.2.4.4 扩增产物的纯化 |
| 4.2.4.5 扩增产物的连接转化 |
| 4.2.4.6 重组质粒的鉴定 |
| 4.2.4.7 核酸序列测定及分析 |
| 4.2.5 猪瘟Shimen 株致猪血管内皮细胞病变后DI 颗粒的检测 |
| 4.2.5.1 样品RNA |
| 4.2.5.2 提取的样品总RNA 的鉴定 |
| 4.2.5.3 探针标记 |
| 4.2.5.4 探针浓度的确定 |
| 4.2.5.5 杂交 |
| 4.2.5.6 BCIP/NBT 显色法检测 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 细胞形态和特征 |
| 4.3.2 细胞生长曲线 |
| 4.3.3 猪血管内皮细胞的鉴定结果 |
| 4.3.3.1 第八因子(F-ⅧR)Ag 的检测 |
| 4.3.3.2 扫描电镜观察 |
| 4.3.4 猪瘟Shimen 株感染猪血管内皮细胞的形态特征 |
| 4.3.5 猪瘟C-株感染猪血管内皮细胞的形态特征 |
| 4.3.6 猪瘟Shimen 株和C-株感染PK-15 细胞的形态特征 |
| 4.3.7 猪瘟Shimen 株和C-株感染猪血管内皮细胞的透射电镜观察 |
| 4.3.8 猪瘟Shimen 株和C-株接种PK-15 细胞后的荧光检测 |
| 4.3.9 猪瘟Shimen 株接种猪血管内皮细胞后PCR 检测 |
| 4.3.10 猪瘟Shimen 株致猪血管内皮细胞病变后E2 基因的序列分析 |
| 4.3.10.1 PCR 扩增结果 |
| 4.3.10.2 质粒PCR 及酶切鉴定结果 |
| 4.3.10.3 E2 基因的序列分析 |
| 4.3.11 猪瘟Shimen 株致猪血管内皮细胞病变后P80 基因的序列分析 |
| 4.3.11.1 PCR 扩增结果 |
| 4.3.11.2 质粒PCR 及酶切鉴定结果 |
| 4.3.11.3 P80 基因的序列分析 |
| 4.3.12 猪瘟Shimen 株致猪血管内皮细胞病变后DI 颗粒的检测 |
| 4.3.12.1 甲醛变性凝胶电泳 |
| 4.3.12.2 杂交探针的浓度测定 |
| 4.3.13 Northern 杂交结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 猪瘟Shimen 株致猪血管内皮细胞病变前后表达差异基因的寻找 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 细胞和毒株 |
| 5.1.2 试剂 |
| 5.1.3 随机引物和锚定引物 |
| 5.1.4 主要仪器设备 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 猪瘟Shimen 株感染猪血管内皮细胞后细胞病变(CPE)的观察 |
| 5.2.2 猪瘟Shimen 株感染猪血管内皮细胞病变前后RNA 提取 |
| 5.2.3 RNA 的纯化 |
| 5.2.4 cDNA 第一条链的合成 |
| 5.2.5 PCR 反应条件的筛选 |
| 5.2.5.1 PCR 反应程序的选择 |
| 5.2.5.2 PCR 反应体系的选择 |
| 5.2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 5.2.6.1 电泳装置的安装 |
| 5.2.6.2 制备6%聚丙烯酰胺凝胶溶液 |
| 5.2.6.3 测序胶的安装 |
| 5.2.6.4 加样和电泳 |
| 5.2.6.5 聚丙烯酰胺凝胶染色 |
| 5.2.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳差异条带的回收 |
| 5.2.8 差异条带的二次PCR 及电泳检测 |
| 5.2.9 利用反向Northern 点杂交筛选阳性差异条带 |
| 5.2.9.1 探针标记 |
| 5.2.9.2 反向Northern 点杂交 |
| 5.2.9.3 BCIP/NBT 显色 |
| 5.2.10 纯化回收阳性差异条带的DNA 片段 |
| 5.2.11 纯化产物与PMD18-T Vector 连接 |
| 5.2.12 新鲜感受态细胞的制备(CaCl_2法) |
| 5.2.13 连接产物的转化 |
| 5.2.14 重组质粒的提取 |
| 5.2.14.1 溶液的配制 |
| 5.2.14.2 重组质粒的提取的操作方法 |
| 5.2.15 重组质粒的酶切鉴定 |
| 5.2.16 序列测定 |
| 5.2.17 序列同源性分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 RNA 的提取 |
| 5.3.2 PCR 反应条件的筛选 |
| 5.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 5.3.4 差异条带二次PCR |
| 5.3.5 差异带的反向Northern 点杂交 |
| 5.3.6 差异带的克隆及序列分析 |
| 5.3.6.1 重组质粒酶切鉴定 |
| 5.2.6.2 序列测定 |
| 5.2.6.3 序列同源性分析结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 mRNA 差异显示过程中一些问题的探讨 |
| 5.4.1.1 RNA 的提取与反转录 |
| 5.4.1.2 PCR 扩增条件 |
| 5.4.1.3 DDRT-PCR 扩增产物的显示、回收、再扩增 |
| 5.4.1.4 差异条带的真实性验证 |
| 5.5 结论 |
| 第六章 猪瘟Shimen 株E2基因哺乳动物细胞表达 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 毒株、菌株与表达系统 |
| 6.1.2 酶与试剂 |
| 6.1.3 各种细胞培养基配制 |
| 6.1.3.1 细胞培养用试剂 |
| 6.1.3.2 细胞消化用试剂 |
| 6.1.4 主要仪器 |
| 6.1.5 引物的设计与合成 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 Shimen E2 基因的克隆和鉴定 |
| 6.2.1.1 RNA 的提取 |
| 6.2.1.2 反转录合成cDNA |
| 6.2.1.3 PCR 和nPCR |
| 6.2.1.4 纯化回收DNA 片段 |
| 6.2.1.5 纯化产物与PMD18-T Vector 连接 |
| 6.2.1.6 连接产物的转化、涂板、重组质粒的提取 |
| 6.2.1.7 重组质粒的鉴定 |
| 6.2.2 重组表达载体的构建与鉴定 |
| 6.2.3 重组真核质粒转染PK-15 细胞及筛选 |
| 6.2.4 阳性细胞的免疫组化试验 |
| 6.2.5 夹心ELISA 鉴定转染细胞中Shimen 株病毒抗原 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 猪瘟Shimen 株E2 基因的克隆 |
| 6.3.2 表达引物PCR 扩增 |
| 6.3.3 真核表达质粒的构建图 |
| 6.3.4 真核表达质粒的PCR 和酶切鉴定 |
| 6.3.4.1 PEGFP-E2 的核苷酸测序结果 |
| 6.3.4.2 PEGFP-E2 的氨基酸序列结果 |
| 6.3.5 阳性细胞克隆的PCR 鉴定 |
| 6.3.6 阳性细胞克隆的荧光鉴定 |
| 6.3.7 阳性细胞克隆的免疫组化试验 |
| 6.3.8 夹心ELISA 鉴定转染细胞中Shimen 株病毒抗原 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致 谢 |
| 作者简介 |
四、兔抗猪Ⅱ型胶原抗血清的制备与检测（论文参考文献）
- [1]猪源化脓隐秘杆菌强、弱毒株全基因组测序及HSP100/Clp基因转录水平差异分析[D]. 田佳琪. 吉林农业大学, 2019(01)
- [2]非洲猪瘟及其防控措施[J]. 袁琴琴,刘文营. 食品工业科技, 2019(09)
- [3]异种脱细胞动脉基质修复胆道上皮及滇南小耳猪肝外胆道缺损的实验研究[D]. 陈奕明. 昆明医科大学, 2015(01)
- [4]人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原介导的猪血管内皮细胞永生化研究[D]. 张思春. 吉林大学, 2012(09)
- [5]重组MBP—GnRH—I6研制及其免疫公猪的效果与机理的研究[D]. 方富贵. 安徽农业大学, 2010(05)
- [6]异种肌腱移植修复山羊跟腱的实验研究[D]. 张慧兴. 广州中医药大学, 2010(10)
- [7]猪链球菌2型MRP-FBP串联黏附素的免疫保护力[D]. 王宝松. 甘肃农业大学, 2009(06)
- [8]Ⅱ型胶原蛋白抗血清的制备和检测[J]. 姜旭淦,朱敏娟,葛彦文,吴亮,陈盛霞,许化溪. 江苏大学学报(医学版), 2008(01)
- [9]猪抵抗素、脂联素和脂联素受体基因的克隆和分子特征[D]. 戴梦红. 华中农业大学, 2005(02)
- [10]猪瘟Shimen株致猪血管内皮细胞病变前后表达差异基因寻找及E2基因PK-15细胞表达[D]. 张永国. 西北农林科技大学, 2005(02)