一、中药复方对去卵巢大鼠骨转换生化指标的影响(论文文献综述)
张念军[1](2020)在《骨宝丸靶向调节BMP-2治疗Ⅰ型骨质疏松的机制探讨》文中研究指明目的:研究证明骨宝丸的抗骨质疏松作用;通过临床研究,证实骨宝丸对绝经后骨质疏松症的治疗疗效;通过动物实验研究,证实骨宝丸通过调控BMP通路促进骨生成作用而发挥抗骨质疏松的作用,明确其抗骨质疏松机制;明确BMP通路在成骨细胞分化与骨形成中的作用机制,并寻找其可能的作用鞭点,为骨宝丸BMP通路促进骨生成防治绝经后骨质疏松症研究提供实验依据。方法:实验一:选择绝经后骨质疏松患者80人,随机分两组,对照组(阿仑膦酸钠)和治疗组(骨宝丸联合阿仑膦酸钠)各40例,连续治疗6个月,观察两组中医证候疗效评分、骨密度检测、血清ALP及骨钙素,及治疗过程中的不良反应和并发症。实验二:选SPF级Balb/c种小鼠,共24只,随机分组,正常对照组、模型组(环磷酰胺造模),正常对照组、观察组(维甲酸造模),观察两组一般情况观察、胸腺指数、检测骨密度,确立建立骨质疏松小鼠模型的方法。实验三:采用维甲酸诱导骨质疏松小鼠模型,模型组和骨宝丸各剂量组小鼠灌服维甲酸(100 mg/kg)建立骨质疏松模型,同时骨宝丸各剂量组小鼠灌服药物溶液进行防治,连续30天。实验结束后,取小鼠股骨,称取质量、测量股骨直径和股骨长度;利用HE染色法在光学显微镜下观察股骨组织变化;利用Micro-CT检测骨密度;采用ELISA试剂盒检测血清中OC、BALP分泌水平。实验四:将选取小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1细胞)作为研究对象,检测骨宝丸对MC3T3-E1细胞活性的影响;试剂盒法检测骨宝丸对MC3T3-E1细胞ALP活性的影响;WB法检测骨宝丸对MC3T3-E1细胞ALP、BMP-2表达的影响,进一步验证骨宝丸促进成骨的作用机制。结果:实验一:6月后,两组的中医证候疗效评分较治疗前均有所改善,治疗组优于对照组(P<0.05);两组骨密度较治疗前均有所提高,治疗组优于对照组(P<0.05);两组血清ALP及骨钙素持续降低,治疗组更加明显(P<0.05)。实验二:1.环磷酰胺造模的模型组小鼠活动度及进食量显着下降,毛发失去光泽,实验结束后体重显着低于正常组(P<0.5)。维甲酸造模的模型组小鼠与正常组比较在实验期间多数情况下活动度及进食量无明显差异,实验结束前一周有所减少(无显着差异)。此外,实验结束后模型组体质量与对照组比较无显着差异(图1B)。2.与造模前相比较,环磷酰胺造模小鼠胸腺指数显着降低(P<0.01);维甲酸造模小鼠胸腺指数无明显差异。3.与正常组比较,环磷酰胺造模的模型组小鼠骨密度有减少趋势,但是并无统计学意义;维甲酸造模的模型组小鼠骨密度较正常组减少,且差异具有统计学意义(P<0.05)。实验三:1.骨宝丸对维甲酸导致的小鼠股骨的质量、直径、骨密度和骨髓组织减少有防治作用;2.骨宝丸对维甲酸诱导小鼠血清促进OC和P1NP分泌增加。实验四:1.骨宝丸对MC3T3-E1细胞几乎无毒副作用,且在剂量1-8 mg/ml时具有促进细胞增殖的作用。2.骨宝丸对MC3T3-E1的ALP活性有显着增强的作用(P<0.05或P<0.01),并且呈现剂量依赖性。3.骨宝丸显着提高了MC3T3-E1细胞ALP蛋白和BM-2蛋白生成水平,且呈现一定的剂量依赖性。结论:1.骨宝丸治疗对绝经后骨质疏松,临床效果明显,短期内能够提高骨密度和骨转换率。2.维甲酸诱导绝经后骨质疏松小鼠模型可靠性高,本课题后续研究将采用维甲酸造模。3.骨宝丸可防治维甲酸诱导的小鼠骨质疏松,其作用机制可能与保护BMP-2分泌进而促进骨形成有关。4.骨宝丸可促进小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1细胞)增殖分化,其作用机制可能与保护BMP-2分泌进而促进骨形成有关。
胡臣玲[2](2020)在《基于数据挖掘的骨质疏松症用药规律分析及天畅胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松症的机制研究》文中指出目的:通过数据挖掘方法对陈秋教授临床治疗骨质疏松症(OP)的中药处方进行统计,分析治疗OP的常用药物、组方规律,系统总结陈秋教授治疗OP的学术经验,且为天畅胶囊组方奠定理论基础。并进一步探讨天畅胶囊对去卵巢大鼠发挥抗骨质疏松的作用机制。方法:1.通过四川省中医院门诊系统,收集陈秋教授在2016年9月到2019年9月期间治疗OP的电子病例中的中药处方。通过EXCEL建立数据库,并用SPASS23.0进行数据挖掘分析。2.将60只雌性SD大鼠经过去卵巢或假性手术后分为6组,假性手术组(S ham,n=10),模型对照组(OVX,n=10),阳性对照组(OVX+AL,n=10),天畅胶囊低剂量组(OVX+LTC,n=10),天畅胶囊中剂量组(OVX+MTC,n=10),天畅胶囊高剂量组(OVX+HTC,n=10)。按照设置药物剂量,连续灌胃12周,然后测定大鼠骨密度、骨组织病理学、子宫系数以及ELISA测定大鼠血清E2、OPG、RANKL值。结果:1.本研究共纳入114例处方,共115味中药,药频:总计频数2085次。累计频数前15味中药分别为黄芪、当归、党参、甘草、白术、桑寄生、淫羊藿、枳壳、茯苓、牡蛎、补骨脂、续断、杜仲、熟地黄、柴胡等。主要药类:补虚类(53.9%)、活血化瘀类(4.41%)、清热类(6.52%)、理气类(5.32%)、平肝息风类(6.95%)、利水渗湿类(6.52%)、解表类(5.27%)、祛风湿类(5.56%)等。聚类分析四组药方,因子分析出7个相关因子。与假手术组相比,模型对照组BMD降低(P<0.01),与模型对照组相比,阳性对照组、天畅胶囊低剂量组、天畅胶囊中剂量组的BMD增加(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组、天畅胶囊各个剂量组明显改善了骨组织形态学的病变。与模型对照组相比,阳性对照组、天畅胶囊低剂量组OPG/RANKL的值升高(P<0.05)。与模型对照组相比,阳性对照组、天畅胶囊各组的子宫系数、血清E2值的变化无统计学意义(P>0.05)。结论:1.陈秋教授治疗OP核心药物为黄芪、当归、党参、甘草、白术、桑寄生、淫羊藿、枳壳、茯苓、牡蛎、补骨脂、续断、杜仲、熟地黄、柴胡。以益气养血、补益肝肾为主,兼以活血、化湿等治法。2.天畅胶囊可能通过调节OPG/RANKL/RANK信号通路起到抗OP的作用。
叶孟亮[3](2019)在《牦牛骨胶原蛋白肽抗骨质疏松作用机制研究》文中提出牦牛(Bos grunniens)是我国珍贵的畜种资源,牦牛骨中含有丰富的胶原蛋白(约占21.5%),补充胶原蛋白肽可以增加骨胶原纤维网架的规则性和牢固性。深入开展对牦牛骨精深加工技术的研究探讨,充分利用牦牛骨中丰富的骨胶原蛋白开发功能性食品,对提高牦牛附加值、增加藏区牧民收益、促进牧区社会经济发展和稳固边疆具有重要意义。本研究以牦牛骨为研究对象,利用酸溶酶提技术制备得到较高纯度牦牛骨胶原蛋白,并对其结构进行了鉴定。基于靶向酶解技术考查了复合蛋白酶(Protamex)、风味蛋白酶(Flavourzyme)、胰蛋白酶(Trypsin)、中性蛋白酶(Neutrase)、碱性蛋白酶(Alcalase)、木瓜蛋白酶(Papain)等6种常用商业蛋白酶对牦牛骨胶原蛋白酶解效果差异,并以水解度、促成骨细胞增殖活性为指标优选了最适用酶;采用响应面法优化了中性蛋白酶酶解牦牛骨胶原蛋白制备促成骨细胞增殖活性肽的最佳工艺参数。利用超滤、体积排阻色谱、反向液相色谱串联质谱技术对牦牛骨胶原蛋白肽进行了进一步分离、纯化和鉴定。通过模拟胃肠道消化、Caco-2细胞单层膜转运模型考查了牦牛骨胶原蛋白肽的消化、吸收、转运机制。基于Real-time qPCR、Western blot和分子对接技术探究了牦牛骨胶原蛋白肽促成骨细胞增殖潜在作用机制。利用骨转换生化标志物、骨生物力学指标、骨形态力学指标考查了牦牛骨胶原蛋白肽抗骨质疏松活性效应;首次基于非靶向代谢组学技术系统探究了牦牛骨胶原蛋白肽抗骨质疏松活性作用机制。取得主要研究成果如下:(1)通过比较分析6种蛋白酶酶解牦牛骨胶原蛋白水解液促成骨细胞增殖率差异,筛选出中性蛋白酶为酶解牦牛骨胶原蛋白制备促成骨细胞增殖活性肽最适用酶,并优化得到最佳酶解工艺组合为:酶解液温度54℃、酶解时间3.6 h、酶底比(E/S)5637 U/g、初始pH 6.12。(2)利用超滤、体积排阻色谱、反向高效液相色谱等方法对酶解牦牛骨胶原蛋白制备得到的促成骨细胞增殖活性肽进行了分离纯化。其中,经超滤后收集得到的组分UF-IV(Mw<3 kDa)表现出较高的促成骨细胞增殖活性;经SuperdexTM peptide 10/300 GL色谱柱(体积排阻色谱法)分离后,组分SP-III表现出较高的促成骨细胞增殖活性,在0.5 mg/mL作用浓度下,促成骨细胞增殖率高达160.6%;经RP-HPLC分离纯化,组分SP-III经Innoval C18色谱柱进一步分离后的组分F8表现出较强的促成骨细胞增殖活性(190.6%)。利用反向液相色谱串联质谱法联合Mascot2.4 search engine对其氨基酸序列进行测定,共鉴定得到35条肽段。基于相对丰度、分子量、比对标准得分等指标筛选出9条具有较高潜在促成骨细胞增殖活性肽进行化学合成验证其体外生物活性,结果表明,GPAGPPGPIGNV(GP-12)肽相较其他8条肽段具有更高的促成骨细胞增殖活性(142.7%)。(3)模拟胃肠道消化试验结果表明,GP-12肽对胃-肠道消化具有一定的抗性,虽部分GP-12肽经肠道内肽酶水解为GPAGPPGPIGN(GP-11)和GPAGPPGPI(GP-9),经消化后仍可发挥促成骨细胞增殖活性。构建的Caco-2细胞单层膜试验结果表明,GP-12肽会被上皮细胞膜肽酶进一步水解为GPPGPIGNV(GV-9)、AGPPGPIGNV(AV-11)肽,仍有部分GP-12肽可以完整通过Caco-2细胞单层膜而转运,但吸收率较低,其吸收机制为细胞旁路途径吸收。(4)牦牛骨胶原蛋白肽GP-12通过激活Wnt/β-catenin信号通路和EGFR信号通路之间交互作用从而诱导成骨细胞的增殖和分化。体外模拟分子对接结果显示,GP-12肽和表皮生长因子受体EGFR的氨基酸残基结合位点为Asn12、Lys13、Leu14、Thr15、Gln16、Leu17、Gly18、Tyr45、Leu325和Phe357,结合力主要为氢键作用和范德华力。牦牛骨胶原蛋白肽GP-12潜在促成骨细胞增殖作用机制可能为:GP-12肽首先将表皮生长因子受体EGFR激活,活化后的EGFR进一步将GSK-3β因子磷酸化,从而阻止β-catenin蛋白降解,造成β-catenin蛋白在成骨细胞内的积累,从而激活Wnt/β-catenin信号通路诱导成骨细胞增殖过程。(5)牦牛骨胶原蛋白肽(<3kDa)具有较好的促成骨增殖活性,且呈现良好的剂量-效应关系。所提取的牦牛骨胶原蛋白肽(<3kDa)中分子量在1 kDa以下的多肽所占比例高达96.8%。牦牛骨胶原蛋白肽(<3kDa)的促成骨细胞增殖活性可能归因于GPSGPAGKDGRIGQPG(GP-16)、GDRGETGPAGPAGPIGPV(GD-18)或者含有类似氨基酸序列的多肽与表皮生长因子受体EGFR相互作用。(6)牦牛骨胶原蛋白肽(<3kDa)可显着提高机体骨形成相关转换生化标志物(BGP、BALP)的表达和降低机体骨吸收相关生化标志物(TRACP、S-CTX、DPD)表达。大鼠股骨骨生物力学指标方面,相较模型组,牦牛骨胶原蛋白肽(<3kDa)和雌二醇处理组大鼠骨弹性载荷和断裂载荷均呈显着上升趋势(P>0.05)。此外,牦牛骨胶原蛋白肽(<3kDa)和雌二醇可显着提高大鼠骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁密度(Tb.BMD)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨体积分数(BV/TV),降低骨小梁间距(Tb.Sp)的作用(P<0.05)。综上,牦牛骨胶原蛋白肽(<3kDa)能够明显改善去卵巢大鼠骨质疏松症状,且呈现一定的剂量-效应作用关系。(7)共筛选出8种脂类和类脂分子(牛磺酸、花生四烯酸、1-棕榈酰-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸、1-硬脂酰-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、牛磺酸脱氧胆酸、Taurochenodeoxycholate、牛磺胆),2种有机酸及其衍生物(D-erythro-鞘氨醇-1-磷酸、L-瓜氨酸),以及1种神经递质类物质(血清素)等11种代谢物为潜在生物标志物。去卵巢大鼠骨质疏松发病机制与机体磷脂代谢、氨基酸代谢和脂肪酸代谢紊乱密切相关。牦牛骨胶原蛋白肽干预去卵巢大鼠骨质疏松过程与Membrane transport(ABC transports)、消化系统(Protein digestion and absorption、Mineral absorption)、翻译(Aminoacyl-tRNA biosynthesis)、氨基酸代谢(Arginine and proline metabolism、Valine,leucine and isoleucine degradation)和脂质代谢(Bile secretion、Primary bile acid biosynthesis、Taurine and hypo taurine metabolism)密切相关,且与细胞免疫、神经系统、碳代谢及内分泌系统等多种代谢通路交互作用,多信号通路、多环节、多靶点和多维度干预大鼠骨质疏松症预防、改善与治疗。
楼家晖[4](2019)在《补正密骨方对去势骨质疏松症大鼠骨密度和骨代谢影响的实验研究》文中认为目的:观察院内制剂“补正密骨方”对去势大鼠骨质疏松的影响,并且探讨其潜在作用机理。材料与方法:选取60只SPF级雌性SD大鼠,随机分为6组,分别为空白对照组、模型组、雌二醇对照组、补正密骨方高、中、低剂量组,除空白对照组之外,其余5组均手术摘除大鼠双侧卵巢。空白对照组与模型组给予生理盐水灌胃,雌二醇对照组给予12ug/kg雌二醇溶液灌胃;补正密骨低、中、高组分别给予5.56g/kg、11g/kg、22g/kg补正密骨方混悬剂灌胃,各组均日2次灌胃。给药12周后取材,记录大鼠体质量,子宫质量,检测大鼠股骨骨密度(BMD),骨矿物含量、生物力学特性、血清Ca、血清P;用Elisa法测定血清碱性磷酸酶(ALP)、雌二醇(E2)、骨钙素(BGP)含量;电镜下观察股骨切片骨组织形态学。结果:1.相比于空白对照组,模型组12周后体质量、ALP及BGP含量均提高,而骨矿物含量、BMD、生物力学特性及血清Ca、P、E2均下降(P<0.05或P<0.01)。2.与模型组相比,雌二醇对照组及补正密骨高、中、低剂量组均可以改善去势大鼠股骨的生物力学特性、子宫系数、血清E2、血清Ca、血清P的含量,及具有改善BMD的作用(P<0.05)。3.补正密骨组组内比较,补正密骨高剂量组BMD、生物力学特性及骨组织形态学特性比较补正密骨中、低剂量组略有改善(P<0.05)。4.雌二醇对照组、空白对照组骨组织形态学、BMD、骨矿物含量、生物力学特性及血清雌激素含量均显着高于模型组(P<0.05);雌二醇对照组与空白对照组相比,BMD、生物力学特性及血清ALP、BGP含量均无明显差异(P>0.05)。结论:1.补正密骨方对去势大鼠的体质量和子宫质量的干预具有统计学意义,补正密骨方能在一定程度上改善去势大鼠的各项骨代谢指标,从而对骨质疏松产生一定的影响。2.补正密骨高剂量组对改善去势大鼠的骨代谢各项指标,相比于其他组效果较好,综合分析其作用机理,补正密骨三剂量组的体质量、子宫系数及血清雌激素含量均高于雌二醇对照组,猜测补正密骨混悬剂的作用机理可能为补正密骨方具有类似雌激素的作用,从而促进骨生成,抑制骨破坏,进而提高BMD,预防高转换型骨质疏松的发生。
柴勇[5](2019)在《雌雄去势大鼠骨微观结构和生物力学性能的比较及右归丸干预作用的研究》文中研究指明目的对比观察去卵巢大鼠与去睾丸大鼠骨微观结构和生物力学性能的异同点、以及右归丸对其干预作用的异同点,并从MAPK(Erk1/2)/c-Fos/AP-1信号通路的角度,部分揭示差异产生的机制。为中医治疗骨质疏松症提供进一步的实验依据,并进一步丰富“肾主骨”理论的科学内涵。方法选用同月龄(3月龄)SD大鼠156只,SPF级,雌雄各半。先将大鼠按照体重随机分为8个组,分别是:雌性基础组与雄性基础组,雌性空白对照组与雄性空白对照组,雌性假手术组与雄性假手术组,每组各12只;雌性造模组与雄性造模组,每组各42只。使用3%的戊巴比妥钠按照0.15ml/100g体重的剂量对雌、雄造模组大鼠进行麻醉,之后分别施以双侧卵巢切除手术或睾丸切除手术(去势);手术过程中,雌性造模组死亡5只,雄性造模组死亡4只;雌、雄假手术组大鼠的手术过程与雌、雄造模组大鼠相同,但是不切除卵巢或睾丸,仅切除卵巢或睾丸周围少许的脂肪组织。在进行上述手术的前一天,将雌、雄基础组大鼠麻醉后处死,取双侧股骨,用于Micro CT骨组织形态指标与电子万能试验机骨生物力学指标的检测,将测得的数据作为其它各分组实施处理因素之前的基础值。手术3个月后,将雌性造模组37只大鼠按照体重再随机分为3个组,分别是:卵巢切除组(OVX组)13只,OVX+戊酸雌二醇组(雌激素组,即阳性对照组)12只,OVX+右归丸组(雌性右归丸组)12只;将雄性造模组38只大鼠按照体重再随机分为3个组,分别是睾丸切除组(ORX组)13只,ORX+甲睾酮组(雄激素组,即阳性对照组)13只,ORX+右归丸组(雄性右归丸组)12只。分组结束后,对各给药组大鼠进行灌胃给药:雌性右归丸组与雄性右归丸组给予右归丸水煎液,给药浓度、体积分别为:1.024g生药/ml、1ml/100g体重,给药剂量为10.24g生药/kg体重(此剂量是以往研究已被证实的有效剂量,相当于成人临床用药的等效剂量,为成人临床用量的6.5倍);雌激素组大鼠给予戊酸雌二醇(E2)药液,给药浓度,体积分别为:0.0184mg/ml、1ml/100g体重,给药剂量为0.184mg/kg体重;雄激素组大鼠给予甲睾酮(T)药液,给药浓度、体积分别为:0.184mg/ml、1ml/100g体重,给药剂量为1.84mg/kg体重。以上各组给药,一天一次,连续6天,休息1天后,再连续给药6天,如此连续给药3个月。雌、雄空白对照组,雌、雄假手术组,OVX组与ORX组则按照上述方法给予等体积的纯净水进行灌胃。灌胃期间,每周对大鼠进行一次体重称量,根据体重变化调整给药体积。给药结束后,将实验各组大鼠麻醉后迅速处死,取双侧股骨,用于Micro CT骨组织形态指标与电子万能试验机骨生物力学指标的检测;取胫骨,制作脱钙骨冰冻切片,用于MAPK(Erk1/2)、c-Fos、AP-1三者蛋白表达的检测。采用SPSS 20.0软件进行统计学处理。实验结果以均数±标准差(x±s)表示。若数据呈正态分布,则采用单因素方差分析(ANOVA)进行处理;方差齐性的,组间两两比较采用LSD检验;方差不齐的,采用Dunnett’s T3(3)检验。若数据呈非正态分布,则采用非参数检验Kruskal-Wallis单因素ANOVA(k样本)(W)进行处理;组间两两比较,采用其项下的Stepwise step-down检验。结果1雌雄去势大鼠股骨松质骨形态结构的比较及右归丸对其的干预作用1.1雌雄去势大鼠股骨松质骨BV/TV变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌性假手术组和雄性假手术组大鼠股骨松质骨的BV/TV大幅度增加;而OVX组和ORX组的呈现负增长,即大幅度的减少,分别与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的BV/TV均呈现负增长,与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异;但其减少的程度要明显低于它们相应的OVX组和ORX组。OVX组BV/TV的减少程度明显大于ORX组;而雌性右归丸组的减少程度明显小于雄性右归丸组。1.2雌雄去势大鼠股骨松质骨Conn.Dn变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌性假手术组和雄性假手术组大鼠股骨松质骨的Conn.Dn大幅度增加;而OVX组和ORX组的呈现负增长,即大幅度的减少,分别与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的Conn.Dn均呈现负增长,与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异;但其减少的程度要明显低于它们相应的OVX组和ORX组。OVX组Conn.Dn的减少程度明显大于ORX组;而雌性右归丸组的减少程度明显小于雄性右归丸组。1.3雌雄去势大鼠股骨松质骨Cb.C变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌性假手术组和雄性假手术组大鼠股骨松质骨的Cb.C呈现负增长,即减少;而OVX组和ORX组的增加,分别与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的Cb.C也增加,与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异;但其增加的程度要明显小于它们相应的OVX组和ORX组。与ORX组比较,OVX组Cb.C的增加程度明显要大;雌性右归丸组的Cb.C较雄性右归丸组虽有减少的趋势,但无统计学意义。1.4雌雄去势大鼠股骨松质骨DA的比较及右归丸对其的干预作用OVX组、雌激素组和雌性右归丸组大鼠股骨松质骨DA显着低于雌性假手术组;而雌激素组和雌性右归丸组的DA显着高于OVX组。与雄性假手术组比较,ORX组、雄激素组和雄性右归丸组的DA明显降低;而与ORX组比较,雄激素组、雄性右归丸组的DA均显着提高。ORX组的DA明显高于OVX组;雄性右归丸组的与雌性右归丸组比较,无显着性差异。1.5雌雄去势大鼠股骨松质骨Tb.Pf的比较及右归丸对其的干预作用与雌性假手术组大鼠股骨松质骨Tb.Pf 比较,OVX组、雌激素组和雌性右归丸组的皆明显提高;而与OVX组比较,雌激素组和雌性右归丸组的Tb.Pf皆显着降低。ORX组、雄激素组和雄性右归丸组的Tb.Pf较雄性假手术组的均明显提高,而雄激素组和雄性右归丸组的Tb.Pf较ORX组的均明显降低。ORX组的Tb.Pf显着低于OVX组;雄性右归丸组的与雌性右归丸组比较,无显着性差异。2雌雄去势大鼠股骨皮质骨生物力学性能的比较及右归丸对其的干预作用大鼠股骨最大载荷(ML)、断裂强度(BS)和弹性模量(EM)变化率能够反映股骨皮质骨生物力学性能情况。2.1雌雄去势大鼠股骨皮质骨ML变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌、雄假手术组大鼠股骨皮质骨ML大幅度增加;而OVX组和ORX组的ML虽也有增加,但增加的程度要显着小于它们相应的假手术组。雌激素组、雌性右归丸组ML的增加程度明显大于OVX组,而与雌性假手术组比较,差异不明显。雄激素组、雄性右归丸组ML的增加程度明显大于ORX组,但明显小于雄性假手术组。OVX组ML的增加程度明显小于ORX组;雌性右归丸组的亦明显小于雄性右归丸组。2.2雌雄去势大鼠股骨皮质骨BS变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌、雄性假手术组大鼠股骨皮质骨BS大幅度增加;而OVX组和ORX组的呈现负增长,即减少,分别与它们相应的假手术组比较,差异显着。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的BS均增加,增加的程度与它们相应的假手术组比较,无显着性差异,但明显大于它们相应的OVX组和ORX组。OVX组BS的减少程度明显大于ORX组;而雌性右归丸组的与雄性右归丸组比较,无显着性差异。2.3雌雄去势大鼠股骨皮质骨EM变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌性假手术组和雄性假手术组大鼠股骨皮质骨EM大幅度增加;而OVX组和ORX组的EM呈现负增长,即减少,与它们相应的假手术组比较,具有明显差异。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的EM均增加,增加的程度与它们相应的假手术组比较,无显着性差异,而明显大于它们相应的OVX组和ORX组。OVX组EM减少的程度与ORX组比较,无显着性差异;雌性右归丸组EM增加的程度与雄性右归丸组比较,亦无显着性差异。3雌雄去势大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)、c-Fos、AP-1蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用3.1雌雄去势大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erkl/2)蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用OVX组大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度显着高于雌性假手术组,雌激素组和雌性右归丸组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度与雌性假手术组比较,无显着性差异;与OVX组比较,雌激素组和雌性右归丸组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度显着减少。ORX组MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度与雄性假手术组的相比,明显增加,雄激素组和雄性右归丸组的与之相比,无显着性差异;与ORX组比较,雄激素组和雄性右归丸组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度明显减少。ORX组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度与OVX组的比较,明显减少。雄性右归丸组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度明显高于雌性右归丸组。3.2雌雄去势大鼠胫骨骨髓中c-Fos蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用与雌性假手术组比较,OVX组大鼠胫骨骨髓中c-Fos蛋白表达阳性密度显着增加,雌激素组和雌性右归丸组的无显着性变化;与OVX组比较,雌激素组和雌性右归丸组的c-Fos蛋白表达阳性密度显着减少。ORX组和雄性右归丸组的c-Fos蛋白表达阳性密度较雄性假手术组的明显增加,雄激素组的与雄性假手术组比较,无显着性差异;与ORX组比较,雄激素组和雄性右归丸组的c-Fos蛋白表达阳性密度皆明显减少。ORX组的c-Fos蛋白表达阳性密度较OVX组显着减少。雄性右归丸组的较雌性右归丸组的明显增加。3.3雌雄去势大鼠胫骨骨髓中AP-1蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用OVX组大鼠胫骨骨髓中AP-1蛋白表达阳性密度显着高于雌性假手术组,雌激素组和雌性右归丸组的与雌性假手术组比较,无显着性差异;雌激素组、雌性右归丸组的AP-1蛋白表达阳性密度显着低于OVX组。与雄性假手术组的AP-1蛋白表达阳性密度比较,ORX组、雄性右归丸组的明显增加,雄激素组的无显着性差异;与ORX组的AP-1蛋白表达阳性密度比较,雄激素组和雄性右归丸组的均明显减少。ORX组的AP-1蛋白表达阳性密度显着低于OVX组。雄性右归丸组的则显着高于雌性右归丸组。以上指标,雌性假手术组与雌性空白对照组比较以及雄性假手术组与雄性空白对照组比较,均无显着性差异,从而排除了手术因素对实验的影响。结论(1)雌、雄大鼠去势后,均发生了骨质疏松症;但两者在微观结构方面存在明显差异,体现在:雌性去势大鼠股骨松质骨的BV/TV、Conn.Dn的减少程度以及Cb.C的增加程度明显大于雄性去势大鼠;DA明显低于而Tb.Pf明显高于雄性去势大鼠。右归丸对去势所致的雌、雄大鼠骨质疏松症均具有明显的治疗作用,但在微观结构的改善方面存在一定的差异,体现在:右归丸对雌性去势大鼠BV/TV、Conn.Dn的改善程度要优于对雄性去势大鼠的改善程度;而对DA、Cb.C、Tb.Pf的改善作用,两者无明显差异。(2)雌、雄大鼠去势后,皮质骨的生物力学性能均明显下降,但存在明显差异,体现在:雌性大鼠最大载荷、断裂强度的下降程度明显大于雄性大鼠,而弹性模量雌、雄之间无明显差异。右归丸对此均具有明显的增加作用,但存在一定的差异,体现在:右归丸对雄性去势大鼠最大载荷的增加程度要明显大于雌性去势大鼠;而对断裂强度、弹性模量的增加作用,两者无明显差异。(3)MAPK(Erk1/2)/c-Fos/AP-1信号通路在骨质疏松症发生中起重要作用。雌、雄大鼠去势后,骨髓(松质骨部分)中的MAPK(Erk1/2)、c-Fos和AP-1蛋白表达明显增强,而雌性去势大鼠的这三个关键因子的表达明显强于雄性去势大鼠,这是去势所致雌、雄大鼠松质骨在微观结构方面存在性别差异的机制之一。右归丸能通过抑制这一通路达到治疗去势所致骨质疏松症的作用;其对雌性去势大鼠的抑制作用要明显强于雄性去势大鼠,这是右归丸对雌性去势大鼠松质骨微观结构的改善程度要优于对雄性去势大鼠的机制之一。
柴爽[6](2019)在《去卵巢大鼠骨组织mRNA和lncRNA表达特征及中药的干预作用》文中指出目的:1.筛选去卵巢大鼠股骨远端骨组织中差异表达的mRNA和lncRNA并进行功能性分析和生物信息学分析,探讨其在绝经后骨质疏松症中潜在作用;2.研究差异表达的mRNA富集的通路在去卵巢大鼠中的变化及骨疏康的调控作用;3.研究差异表达的lncRNA的靶基因及相关通路在去卵巢大鼠中的变化及骨疏康的调控作用。方法:1.去卵巢大鼠股骨mRNA和lncRNA表达谱研究24只6月龄SD大鼠随机分为假手术组(sham,12只)和模型组(OVX,12只)。通过去卵巢法建立绝经后骨质疏松症大鼠模型,以假手术大鼠作为对照,取两组大鼠的股骨远端骨组织进行高通量测序,建立股骨远端骨组织中mRNA和lncRNA的表达谱并进行差异性分析,然后采用Real-time PCR对差异表达的结果进行扩大样本量验证,验证测序结果的可靠性,最后对差异表达的mRNA和lncRNA进行功能性分析和生物信息学分析,以探讨这些差异表达的mRNA和lncRNA在绝经后骨质疏松症中潜在作用。2.骨疏康抑制去卵巢大鼠骨细胞凋亡,激活BMP-2/Smads信号通路(1)骨疏康对去卵巢大鼠的骨保护作用48只6月龄SD大鼠随机分为4组,每组12只:假手术组(sham组),模型组(OVX组),骨疏康组(GSK组),阿仑膦酸钠组(ALN组)。建立去卵巢大鼠骨质疏松模型,12周后进行药物干预,给药剂量按照人与大鼠体表面积折算,GSK组给药剂量为0.27g/kg,ALN组给药剂量为1.02mg/kg,sham组和OVX组分别给予等体积生理盐水灌胃。药物干预12周后取材,进行各项指标的检测:①麻醉后检测大鼠全身骨密度和腰椎骨密度,②检测离体股骨骨密度,③股骨远端microCT扫描,④股骨远端HE染色。(2)骨疏康对去卵巢大鼠BMP2/Smads信号通路的影响取上述实验中大鼠,麻醉生效后,大鼠取仰卧位,大腿内侧入路去除肌肉组织,迅速分离双侧股骨,①左侧股骨采用10%中性多聚甲醛固定24小时,进行ALP染色、Trap染色,②右侧股骨采用液氮冻存,提取总RNA进行qRT-PCR检测相关基因的表达,提取总蛋白和磷酸化的蛋白,采用western blot检测相关蛋白的表达。(3)去卵巢大鼠骨组织中骨细胞凋亡情况及骨疏康的干预作用取上述实验中大鼠左侧股骨,进行TUNEL染色;取右侧股骨提取总RNA进行qRT-PCR检测相关基因的表达,提取总蛋白进行western blot检测相关蛋白的表达。结果:1.去卵巢大鼠股骨mRNA和lncRNA表达谱研究(1)去卵巢大鼠动物模型的建立两组大鼠造模12周后进行骨密度检测,与sham组相比,OVX组大鼠全身骨密度和腰椎骨密度均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。对离体股骨的骨密度检测和microCT扫描发现,与sham组相比,OVX组离体股骨的整体骨密度和股骨头、股骨近端、股骨干、股骨远端骨密度水平均显着降低(P<0.05)。对于microCT检测结果,与sham组相比,OVX组中BV/TV,BS/TV和Tb.N的水平显着降低,而Tb.Sp水平明显增加(P<0.05),两组间Tb.Th比较虽然无统计学差异,但OVX组Tb.Th水平有下降趋势。HE染色结果显示,与sham组相比,OVX组骨小梁变薄,骨小梁数量明显减少,排列稀疏,骨小梁间隙相对较宽,这与microCT的三维图像相一致。这些结果表明,与sham组相比,OVX大鼠股骨的骨量明显减少,股骨远端的骨微结构明显变差。(2)转录本的差异表达分析对两组骨组织样本进行高通量测序和转录本的差异表达分析,发现440条mRNA存在组间差异表达,其中160条上调和280条下调,17条lncRNA存在组间差异表达,其中9条上调和8条下调,21条TUCP存在组间差异,其中11条上调和10条下调。对差异表达的mRNA进行生物信息学分析发现所富集到的信号通路主要包括破骨细胞分化,抗原处理和呈现,Hippo信号通路,雌激素信号通路,吞噬,RNA转运,核糖体,泛素介导的蛋白水解,mTOR信号通路等,对lncRNA和TUCP进行靶基因预测,发现多个差异表达的转录本预测到BMP家族,对所有靶基因进行KEGG富集分析发现,lncRNA和TUCP对核糖体途径,胞吞作用,粘蛋白型O-聚糖生物合成,长期抑郁,FcγR介导的吞噬作用,甲状腺激素信号通路,血管平滑肌收缩,神经活性配体-受体相互作用,细胞溶质DNA传感途径,RIG-I样受体信号通路,TRP通道的炎症介质调节等信号通路均有调节作用。2.骨疏康抑制去卵巢大鼠骨细胞凋亡,激活BMP-2/Smads信号通路实验过程中,因各种意外死亡6只大鼠,最终纳入研究的实验动物数量为42只。(1)骨疏康对去卵巢大鼠的骨保护作用①对各组大鼠进行骨密度测定,发现与sham组相比,OVX组大鼠全身骨密度和腰椎骨密度均明显减低(P<0.05);与OVX组相比,GSK组和ALN组大鼠全身骨密度和腰椎骨密度均明显升高(P<0.05)。②对离体股骨的骨密度检测发现,OVX组股骨头,股骨近端,股骨干,股骨远端和股骨整体的骨密度水平均显着低于sham组(P<0.05)。在GSK组和ALN组中,股骨头股骨,股骨近端,股骨干,股骨远端和股骨整体的骨密度水平均显着高于OVX组(P<0.05)。其中,GSK组股骨远端的骨密度水平高于ALN组,尽管没有统计学差异。③对股骨远端进行microCT扫描,发现与sham组相比,OVX组BV/TV,BS/TV,Tb.Th和Tb.N的水平显着降低,而Tb.Sp水平增加(P<0.05)。GSK和ALN组中Tb.Sp水平显着降低,而其他参数水平则增加(P<0.05)。而且,GSK和ALN组之间没有统计学差异。这些数据表明GSK和ALN都能够增加骨小梁体积。④对股骨远端进行HE染色,发现OVX组骨小梁变薄,断裂,骨小梁数量减少,骨小梁间隙增宽,而GSK组和ALN组骨小梁相对较厚实,连接较多,骨小梁间隙变窄。对比microCT的三维重建图发现,股骨骨小梁结构的变化与HE染色显示的组织学变化一致。(2)骨疏康对去卵巢大鼠BMP2/Smads信号通路的影响①ALP染色和Trap染色发现,OVX组骨小梁上ALP阳性成骨细胞数量减少,染色较浅,呈灰色甚至灰白色,TRAP阳性破骨细胞数量增加,酒红色染色明显甚至融合成片,主要位于骨小梁边缘。与OVX组相比,GSK组ALP阳性成骨细胞染色变深,破骨细胞数量变少,染色呈浅红色。②进行qRT-PCR检测分析发现,与sham组相比,OVX组中BMP-2,Osterix和Runx2的mRNA表达显着下调(P<0.05)。而Smadl和Smad5基因没有明显变化。有趣的是,GSK治疗可引起BMP-2,Osterix和Runx2 mRNA水平的明显上调,而ALN组只有Runx2mRNA 水平上调(P<0.05)。③进行western blot检测分析发现,与sham组相比,OVX组的BMP-2,Smadl,p-Smadl,p-Smad5和Runx2的蛋白质表达水平下调(P<0.05),Smad5和Osterix有下降趋势,但无统计学差异,这说明在去卵巢大鼠模型中,BMP-2/Smads信号通路受到抑制。与 0VX 组相比,GSK 组 BMP-2,p-Smadl,p-Smad5,Osterix 和 Runx2 的蛋白表达水平均升高(P<0.05)。ALN组BMP-2,p-Smadl,Osterix和Runx2的表达水平升高(P<0.05)。(3)去卵巢大鼠骨组织中骨细胞凋亡情况及骨疏康的干预作用①TUNEL染色和凋亡率的测定提示,OVX组具有更多的TUNEL阳性骨细胞,与OVX组相比,GSK组TUNEL阳性骨细胞显着减少(P<0.05)②通过qRT-PCR检测基因表达水平发现,与sham组相比,OVX组Bcl-xL基因的表达水平降低(P<0.05),Bak水平升高(P<0.05),Bcl-2表达水平有所降低,但缺乏统计学意义。与OVX组相比,GSK组Bcl-xL的基因水平显着增加,Bak水平显着降低(P<O.05)。③通过Western blot检测蛋白水平发现,与sham组相比,0VX组各蛋白水平与基因水平的检测结果相符合。与OVX组相比,GSK组Bcl-xL蛋白水平升高,Bak蛋白水平降低(P<0.05)。结论:1.去卵巢大鼠骨组织中存在440条差异表达的mRNA(160条上调和280条下调),其主要富集的通路与凋亡密切相关。2.去卵巢大鼠骨组织中存在差异表达的17条lncRNA(9条上调和8条下调)和21条TUCP(11条上调和10条下调),对差异表达的lncRNA和TUCP的进行靶基因预测发现多个差异表达的转录本预测到BMP家族。3.骨疏康可通过刺激BMP-2/Smads信号途径的活化,降低骨细胞的凋亡率来改善去卵巢大鼠股骨的骨密度和骨微结构特性。
李杨,关雪峰[7](2019)在《中药对骨质疏松症骨代谢影响研究进展》文中研究指明目的:归纳与总结近几年中药在实验研究及临床研究方面对骨质疏松症骨代谢影响的研究进展。方法:检索国内外数据库中中药对骨质疏松症骨代谢影响的相关文献,按照实验研究及临床研究分别阐述中药对骨质疏松症骨代谢影响的作用机制。结果:国内外对于中药如何治疗骨质疏松症及其如何调节骨代谢的相关研究逐年增多,但系统的归纳与总结较少。结论:从实验及临床研究来看,中药对骨质疏松症骨代谢的影响确切,对骨质疏松症疗效较好,具有增强ALP活性、促进成骨细胞增殖分化、抑制破骨细胞活性、降低异常升高的骨转换率、补充雌激素等作用,但仍有待进一步研究,为中药在影响骨质疏松症骨代谢方面提供更全面的科学依据。
朱宇溪[8](2019)在《天畅胶囊对卵巢切除骨质疏松大鼠的疗效及作用机制研究》文中指出目的:本研究通过卵巢切除法建立骨质疏松症的大鼠模型,并予大鼠天畅胶囊治疗,通过与阳性对照药物的比较来探索天畅胶囊治疗骨质疏松症的疗效及作用机制。方法:雌性SD大鼠被随机分为6组:假手术组、模型对照组(卵巢切除)、阳性对照组(卵巢切除+阿仑膦酸钠)、天畅胶囊低剂量组(卵巢切除+低剂量天畅胶囊)、天畅胶囊中剂量组(卵巢切除+中剂量天畅胶囊)、天畅胶囊高剂量组(卵巢切除+高剂量天畅胶囊),每组10只大鼠。假手术组大鼠切除卵巢附近的脂肪,其余组切除大鼠双侧卵巢。造模完成后,予药物治疗12周,对大鼠的骨密度、骨吸收和骨形成指标及股骨病理学改变进行检测。结果:骨密度:与假手术组相比,模型对照组大鼠骨密度明显降低(P<0.01);阳性对照组、天畅胶囊低、中剂量组的骨密度水平与模型对照组相比升高(P<0.05)。骨形成指标:与假手术组相比,模型对照组的骨形成指标(BALP和BGP)均明显升高(P<0.01);BALP水平仅有阳性对照组与模型组相比具有统计学意义(P<0.05);BGP水平仅有天畅胶囊低剂量组与模型组相比具有统计学意义(P<0.05)。骨吸收指标:与假手术组相比,模型对照组骨吸收指标(DPD和TRACP)相比均升高(P<0.01或P<0.05);阳性对照组和天畅胶囊低剂量组的DPD水平与模型对照组相比,均显着降低(P<0.01);四个给予药物的治疗组TRACP水平与模型对照组相比均降低(P<0.05)。病理组织学:模型对照组的股骨病理学镜检出现明显的骨小梁破坏;四个给予药物的治疗组对骨小梁破坏均有不同程度的改善作用。结论:天畅胶囊在治疗卵巢切除大鼠的骨质疏松症上有着较好的疗效,可以提升骨密度水平,抑制过度活跃的骨吸收,并且对改善骨小梁损害有着一定的作用。
王大伟[9](2019)在《基于Wnt3a/β-catenin信号通路探究补肾益气活血方对绝经后骨质疏松症疗效机制研究》文中进行了进一步梳理研究目的:肾虚血瘀为骨质疏松症常见病机,补肾益气活血方临床疗效确切。本研究基于Wnt3a/β-catenin信号通路及骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖成骨分化,探讨补肾益气活血方防治绝经后骨质疏松症的作用机制,为“肾藏精”藏象理论及应用提供部分实验依据,对临床防治绝经后骨质疏松症具有一定的理论意义和应用价值。材料与方法:第一部分:理论研究通过梳理古今文献及检索现代临床研究资料,运用理论分析方法,对骨质疏松症相关的中医学病名、病因、病机、辨证、治疗进行归纳和总结,重点对骨质疏松症病机进入深入的探讨和剖析,阐释骨质疏松症的名、因、机、证、治的深刻内涵。第二部分:体内实验研究将90只SPF级SD雌性大鼠随机分为5组:正常组、模型组、补肾益气活血方低剂量组、补肾益气活血方高剂量组、福善美组(阳性药对照组)。除正常组外,其余各组均使用手术摘除双侧卵巢法建立绝经后骨质疏松症大鼠模型。正常组、模型组以生理盐水灌胃,其余各组灌胃相应等容积实验药物。各组均于手术后第2天给药。每日am9:00准时给药,共计12周。最后一次灌胃后,禁食24h,处死动物,取材检测相应指标。应用qRT-PCR和ELISA法检测各组大鼠骨、肾组织Wnt3a、CyclinD1mRNA及蛋白表达。第三部分:体外实验研究实验细胞来源:OriCellTMWistar大鼠骨髓间质干细胞购于赛业(苏州)生物科技有限公司,细胞复苏及培养参照OriCellTMWistar大鼠骨髓间质干细胞说明书步骤规范操作。实验所用药物:补肾益气活血方的有效组分,按功能配伍分为补肾组、益气活血组、补肾益气活血组。实验三的目的是筛选功能配伍各组促进BMSCs增殖与成骨分化的最佳量效。实验分为11组:正常组;成骨诱导组;补肾高剂量组(1);补肾中剂量组(2);补肾低剂量组(3);益气活血高剂量组(4);益气活血中剂量组(5);益气活血低剂量组(6);补肾益气活血高剂量组(7);补肾益气活血中剂量组(8);补肾益气活血低剂量组(9)。分别作用于BMSCs。实验四、五是通过Wnt3a/β-catenin信号通路相关指标观察最佳剂量功能配伍各组对BMSCs增殖与成骨分化的作用机制。Wnt通路抑制剂为DKK1。分为9组:正常组、成骨诱导组、补肾中剂量组(1);益气活血中剂量组(2);补肾益气活血中剂量组(3);成骨诱导+DKK1组(4);补肾中剂量+DKK1组(5);益气活血中剂量+DKK1组(6);补肾益气活血中剂量+DKK1组(7)。实验指标检测:实验三:MTT法检测各组BMSCs24、48、72h增殖情况;ELISA法检测各组细胞12、15d ALP、BGP水平;茜素红染色法观察对15d骨钙结节。实验四:ELISA法检测各组(加入DKK1)15d ALP、BGP水平变化情况;茜素红染色法观察18d骨钙结节;实验五:qRT-PCR法检测各组15dWnt3a、CyclinD1 mRNA表达情况;ELISA法检测各组Wnt3a蛋白表达。实验研究全部采用SPSS17.0统计软件处理实验数据,所有数据以±s表示,体内、体外实验各组数据均用单因素方差分析进行统计分析,P<0.05具有统计学意义。结果:第一部分:理论研究骨质疏松症多归属于中医学的“骨痿”“骨枯”“骨痹”范畴。肾虚髓减,为骨质疏松症发生、发展、变化的基本病机;脾胃虚弱,气血生化乏源;或脾虚及肾,精血互化不及;肝失疏泄,气血失和或运行不畅;或肝肾亏虚,精血不足;久病及肾,多虚多瘀,肾虚血瘀;为骨质疏松症的常见病机;外因多为诱发因素;骨质疏松症性骨折多见气滞血瘀。现代专家共识将骨质疏松症分为肾虚血瘀、肝肾阴虚、气滞血瘀、肾阳亏虚、脾胃虚弱、脾肾阳虚六种证候,以肾虚血瘀证为新增证候,令人关注。临床对于防治肾虚血瘀证骨质疏松症,在补肾方剂中酌情加入益气活血之品,往往可收良效。故本研究补肾益气活血方为基础,开展实验研究,以部分阐明其作用机制。第二部分:体内实验研究1.各组大鼠骨组织Wnt3amRNA表达及蛋白表达变化的情况与正常组比较,模型组骨组织Wnt3a mRNA表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各用药组骨组织中Wnt3a mRNA表达有不同程度上调(P<0.01),以福善美组最明显(P<0.01);福善美组及补肾益气活血高剂量组均可上调骨组织中Wnt3a mRNA表达,两组比较无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组骨组织Wnt3a蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各用药组骨组织中Wnt3a蛋白表达有不同程度上调(P<0.01),以补肾益气活血方高剂量组最明显(P<0.01);补肾益气活血高剂量组及福善美组均可上调骨组织中Wnt3a蛋白表达,两组比较无统计学意义(P>0.05)。2.各组大鼠骨组织CyclinD1 mRNA表达的变化情况与正常组比较,模型组骨组织CyclinD1 mRNA表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各用药组骨组织中CyclinD1 mRNA表达有不同程度上调(P<0.01),以福善美组最明显(P<0.01);福善美组及补肾益气活血高剂量组均可上调骨组织中CyclinD1mRNA表达,两组比较无统计学意义(P>0.05)。3.各组大鼠肾组织Wnt3amRNA表达及蛋白表达变化的情况与正常组比较,模型组肾组织Wnt3a mRNA表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各用药组肾组织中Wnt3a mRNA表达有不同程度上调(P<0.01),以福善美组最明显(P<0.01);福善美组及补肾益气活血高剂量组均可上调骨组织中Wnt3a mRNA表达,两组比较无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组肾组织Wnt3a蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,其他各用药组肾组织中Wnt3a蛋白表达有不同程度上调(P<0.01),以补肾益气活血方高剂量组最明显(P<0.01);其次为福善美组。4.各组大鼠肾组织CyclinD1 mRNA表达的变化情况与正常组比较,模型组肾组织CyclinD1 mRNA表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,其他各用药组肾组织中CyclinD1 mRNA表达有不同程度上调(P<0.01),以福善美组最明显(P<0.01);福善美及补肾益气活血高剂量组均可上调肾组织中CyclinD1 mRNA表达,两组比较无统计学意义(P>0.05)。第三部分:体外实验研究1.24h、48h、72h各组BMSCs增殖情况(实验三)24h:与成骨诱导组比较,补肾高剂量组BMSCs增殖能力提高差异不明显(P>0.05)、补肾中剂量组、补肾益气活血中剂量组BMSCs增殖能力略有升高差异不明显(P>0.05),其他各用药组BMSCs增殖有所降低,但无统计学意义(P>0.05)。48h:与成骨诱导组比较,补肾高剂量组BMSCs增殖能力提高差异不明显(P>0.05)、益气活血中剂量组、补肾益气活血中剂量组BMSCs增殖能力接近,无统计学意义(P>0.05),其他各用药组BMSCs增殖有所降低,但无统计学意义(P>0.05)。72h:与成骨诱导组比较,补肾高剂量组、益气活血低剂量组、补肾益气活血中剂量组BMSCs增殖能力接近,无统计学意义(P>0.05),其他各用药组BMSCs增殖有所降低,但无统计学意义(P>0.05)。2.12d、15d各组细胞ALP水平的变化情况(实验三)12d:与成骨诱导组比较,补肾高、中、低剂量组、益气活血高、中、低剂量组、补肾益气活血低剂量组ALP水平均有下降(P<0.01),而补肾益气活血高、中剂量组ALP水平与成骨诱导组接近(P>0.05)。15d:与成骨诱导组比较,用药各组ALP水平均有下降(P<0.01);其中,补肾中剂量组、益气活血中剂量组、补肾益气活血高、中剂量组ALP水平略高,但无统计学意义(P>0.05)。3.12d、15d各组细胞BGP水平的变化情况(实验三)12d:与成骨诱导组比较,用药各组BGP水平均有下降(P<0.01),其中,补肾中剂量组、补肾益气活血高、中、低剂量组BGP水平略高,但无统计学意义(P>0.05)。15d:与成骨诱导组比较,用药各组BGP水平均有下降(P<0.01);其中,补肾益气活血高、中、低剂量组BGP水平略高,但无统计学意义(P>0.05)。4.15d细胞形态学骨钙结节情况(实验三)从茜素红染色对骨钙结节的细胞形态学观察,以成骨诱导组、补肾中剂量组、补肾益气活血中剂量组最为明显,提示在BMSCs成骨分化过程中对骨钙结节形成有促进作用。5.15d各组细胞(用药组加入DKK1)ALP水平的变化情况(实验四)与正常组比较,成骨诱导组ALP水平明显升高(P<0.01);成骨诱导+DKK1组ALP水平明显上升(P<0.01)。与成骨诱导组比较,益气活血组ALP水平有显着性差异(P<0.01);补肾组、补肾益气活血组略有降低(P<0.01)。与成骨诱导组+DKK1组比较,补肾+DKK1组、益气活血+DKK1组、补肾益气活血+DKK1组ALP水平均有降低(P<0.01),但补肾益气活血组ALP水平比补肾+DKK1组、益气活血+DKK1组明显升高(P<0.01)。6.15d各组细胞(用药组加入DKK1)BGP水平的变化情况(实验四)与正常组比较,成骨诱导组BGP水平明显升高(P<0.01);成骨诱导+DKK1组BGP水平明显上升(P<0.01)。与成骨诱导组比较,补肾组BGP水平无显着性差异(P>0.05);益气活血组、补肾益气活血组略有降低(P>0.05)。与成骨诱导组+DKK1组比较,补肾+DKK1组、益气活血+DKK1组、补肾益气活血+DKK1组BGP水平均有降低(P<0.01),但补肾益气活血+DKK1组BGP水平比补肾+DKK1组、益气活血+DKK1组明显升高(P<0.01)。7.18d(用药组加入DKK1)细胞形态学骨钙结节情况(实验四)从茜素红染色对骨钙结节的细胞形态学观察,以成骨诱导组、补肾中剂量组、补肾益气活血中剂量组最为明显,提示在BMSCs成骨分化过程中对骨钙结节形成有促进作用。8.15d各组细胞(用药组加入DKK1)Wnt3a mRNA及蛋白表达情况(实验五)与正常组比较,成骨诱导组Wnt3a mRNA表达明显上调(P<0.01);成骨诱导+DKK1组Wnt3a mRNA表达明显降低(P<0.01);与成骨诱导组比较,补肾组、益气活血组Wnt3a mRNA表达明显降低(P<0.01),补肾益气活血组有所上调(P<0.01);与成骨诱导+DKK1组比较,补肾益气活血+DKK1组Wnt3a mRNA表达明显上调(P<0.01);补肾+DKK1组明显上调(P<0.01)。与正常组比较,成骨诱导组、成骨诱导+DKK1组Wnt3a蛋白表达明显上调(P<0.01);与成骨诱导组比较,补肾组、益气活血组、补肾益气活血组Wnt3a蛋白表达则有所降低(P<0.01);与成骨诱导+DKK1组比较,补肾益气活血+DKK1组Wnt3a蛋白表达无明显差异(P>0.05),益气活血+DKK1组明显降低(P<0.01)。9.15d各组细胞(用药组加入DKK1)CyclinD1mRNA表达情况(实验五)与正常组比较,成骨诱导组明显上调(P<0.01);与成骨诱导组比较,补肾益气活血组CyclinD1mRNA表达明显上调(P<0.01),补肾组、益气活血组则有所降低(P<0.05);与成骨诱导+DKK1组比较,补肾益气活血+DKK1组CyclinD1mRNA表达明显上调(P<0.01),其次为补肾+DKK1组(P<0.05),益气活血+DKK1组则无明显差异(P>0.05)。结论:1.骨质疏松症属于中医学“骨痿”“骨枯”“骨痹”的范畴,其发病脏腑主要责之肾、肝、脾。肾虚髓减为骨质疏松症的基本病机,贯穿病变始终;脾胃虚弱、肝肾亏虚、脾肾不足、肾虚血瘀等为骨质疏松症的常见病机。故临床治疗多以补肾益髓、补益肝肾、健脾养血、益气活血为主。2.补肾益气活血方可以上调绝经后骨质疏松症模型大鼠骨、肾组织Wnt3a、CyclinD1mRNA表达及Wnt3a蛋白表达,从而起到防治骨质疏松症的作用。3.补肾益气活血方有效组分功能配伍,补肾、益气活血、补肾益气活血方各组均可以促进BMSCs增殖和成骨分化,以补肾益气活血方有效组分效果最为明显,可以升高ALP、BGP水平,促进骨钙结节形成。4.BMSCs成骨分化与Wnt细胞通路上游启动蛋白Wnt3a mRNA及蛋白表达、下游蛋白CyclinD1mRNA表达有关;在Wnt通路抑制剂DKK1作用下,补肾益气活血方有效组分可以对Wnt信号通路的抑制具有激活作用,有效上调Wnt3a/β-catenin信号通路上游启动蛋白Wnt3a的mRNA及蛋白表达、下游相关指标CyclinD1mRNA表达,从而起到防治骨质疏松症的作用。5.补肾益气活血方及其有效组分能够通过调控Wnt3a/β-catenin信号通路,对骨质疏松症发挥防治的作用。
王庆谚[10](2019)在《补肾益气活血方对绝经后骨质疏松症大鼠Wnt7b/β-catenin信号通路作用机制的研究》文中进行了进一步梳理目的:系统论述肾虚血瘀与绝经后骨质疏松症的相关性,明确补肾益气活血治法及其方药对绝经后骨质疏松症的治疗效果及其作用机制,有助于阐明调节骨形成的新方法和开发有效的改善骨代谢的方剂,为临床防治绝经后骨质疏松症提供理论和实验依据。材料与方法:第一部分:理论研究通过文献整理及理论分析方法,从肾的精气、血、阴、阳方面论述其与骨的密切关系,阐释绝经后骨质疏松症的发病根本病机,并从来源和功能两方面论述肾精和骨髓间充质干细胞之间的相关性,进一步探究补肾益气活血为绝经后骨质疏松症的重要治法。第二部分:体内实验将90只SPF级SD雌性大鼠随机分为正常组、模型空白组、补肾益气活血方高剂量组、补肾益气活血方低剂量组、福善美组,共5组,每组各18只。采用一次性摘除大鼠双侧卵巢法建立绝经后骨质疏松症动物模型,正常组不进行手术。正常组和模型空白组大鼠给予0.9%生理盐水灌胃,其余各组给予相应药物灌胃,模型空白组及治疗组大鼠从手术结束后第二天开始给药,每日1次,共12周。在最后一次灌胃后,麻醉、开腹手术,从腹主动脉取血,以3000r/min离心15分钟,取血清,取出肾脏和左后肢股骨,用双能X线检测各组大鼠左后肢股骨骨密度,ELISA法检测大鼠血清ALP、TRACP表达,应用qRT-PCR法及ELISA法检测骨及肾组织Wnt7b、Axin2、Runx2 mRNA及蛋白表达,用Western法检测骨及肾组织Runx2、β-catenin蛋白表达。第三部分:体外实验实验药物:淫羊藿苷和地黄苷D分别为补肾中药淫羊藿和生地黄的有效成分,鹿茸提取液为本实验室用鹿茸冻干粉自制,黄芪甲苷为益气中药黄芪的有效成分,羟基红花黄色素A为活血中药红花的有效成分。实验将大鼠骨髓间充质干细胞分为以下9组:正常组、成骨诱导组、补肾组、益气活血组、补肾益气活血组、成骨诱导+DKK-1组、补肾+DKK-1组、益气活血+DKK-1组、补肾益气活血+DKK-1组。指标检测:用茜素红染色法观察第15d矿化结节形成,用qRT-PCR法检测Wnt7b、Axin2、Runx2 mRNA表达,ELISA法检测Wnt7b、Axin2、Runx2蛋白表达。结果:第一部分:理论研究绝经后骨质疏松症的根本病位在骨,肾虚血瘀为其常见证候之一,从“肾虚血瘀”立论,肾精亏虚,则肾之气血阴阳失调,因虚致瘀,骨髓不生,髓减骨枯,导致绝经后骨质疏松症的发病。补肾益气活血治法通过补肾调理气血,通过益气促进活血,两者相互协同,达到改善肾虚血瘀的病机变化,是防治绝经后骨质疏松症的有效治法。第二部分:体内实验1.骨密度结果显示:与正常组相比较,模型空白组左后肢股骨骨密度显着降低(P<0.01),与模型空白组相比较,各治疗组骨密度均有不同程度的增高(P<0.01)。2.骨代谢指标结果显示:与正常组相比较,模型空白组血清ALP和TRACP水平明显升高(P<0.01);与模型空白组相比较,各用药组血清ALP和TRACP水平均明显降低(P<0.01),其中福善美组降低最明显,补肾益气活血方高剂量组次之(P<0.01)。3.qRT-PCR结果显示:与正常组相比较,骨及肾组织的模型空白组的Wnt7b、Axin2、Runx2的mRNA的相对表达量明显下调(P<0.05);与模型空白组相比较,骨及肾组织的补肾益气活血方高剂量组和福善美组的Wnt7b、Axin2、Runx2的mRNA的相对表达量明显上调(P<0.05);补肾益气活血方高剂量组与低剂量组相比较,骨及肾组织的Wnt7b、Axin2的mRNA的相对表达量明显上调(P<0.05),肾组织的Runx2的mRNA相对表达量明显上调(P<0.05),而骨组织的Runx2的mRNA相对表达量无显着差异(P>0.05)。4.ELISA结果显示:与正常组相比较,骨及肾组织的模型空白组的Wnt7b、Axin2、Runx2蛋白表达均明显下调(P<0.01);与模型空白组相比较,骨及肾组织的补肾益气活血方高剂量组和福善美组的Wnt7b、Axin2、Runx2蛋白表达均明显上调(P<0.01)。5.Western结果显示:与正常组相比较,骨及肾组织的模型空白组的Runx2、β-catenin蛋白表达明显下调(P<0.05);与模型空白组相比较,骨及肾组织的福善美组与补肾益气活血方高剂量组Runx2、β-catenin蛋白表达均明显上调(P<0.05);补肾益气活血方高剂量组与低剂量组相比较Runx2、β-catenin蛋白表达明显上调(P<0.05)。第三部分:体外实验1.15d的茜素红染色结果显示:成骨诱导组的矿化结节数目最多,体积较其他组大;补肾组、益气活血组以及补肾益气活血组的矿化结节均较正常组多,且体积明显增大,其中以补肾益气活血组的矿化结节最多。成骨诱导组、补肾组、益气活血组和补肾益气活血组在加入DKK-1之后,矿化结节数量明显减少,体积偏小,矿化水平降低。2.qRT-PCR结果显示:与正常组相比较,成骨细胞在成骨诱导组、补肾益气活血组和补肾益气活血+DKK-1组的Wnt7b、Axin2和Runx2的mRNA相对表达量上调(P<0.05);与成骨诱导组相比较,成骨细胞在成骨诱导+DKK-1组和益气活血+DKK-1组的Wnt7b mRNA相对表达量下调(P<0.05),补肾组、益气活血组、成骨诱导+DKK-1组、补肾+DKK-1组和益气活血+DKK-1组的Axin2 mRNA相对表达量下调(P<0.05),益气活血组、成骨诱导+DKK-1组和益气活血+DKK-1组的Runx2 mRNA相对表达量下调(P<0.05);补肾组、益气活血组以及补肾益气活血组加入DKK-1后Wnt7b、Axin2和Runx2的mRNA相对表达量均下调(P<0.05)。3.ELISA结果显示:与正常组相比较,成骨细胞在成骨诱导组、补肾组和补肾益气活血组的Wnt7b、Axin2和Runx2蛋白表达上调(P<0.05);与成骨诱导组相比较,成骨细胞在益气活血组、补肾益气活血组、成骨诱导+DKK-1组、补肾+DKK-1组、益气活血+DKK-1组和补肾益气活血+DKK-1组的Wnt7b、Axin2和Runx2蛋白表达下调(P<0.05);补肾组、益气活血组以及补肾益气活血组加入DKK-1后Wnt7b、Axin2和Runx2的蛋白表达均下调(P<0.05)。结论:1.肾虚为绝经后骨质疏松症发病的根本病机,血瘀为绝经后骨质疏松症的关键病机。补肾益气活血治法及其复方通过益气补肾生精,促进气血运行,调节阴阳平衡,从而改善绝经后骨质疏松症肾虚血瘀的病机变化,标本兼顾,理论依据充分。2.补肾益气活血方可以提高绝经后骨质疏松症大鼠股骨骨密度,显着降低血清ALP和TRACP的表达水平,并呈剂量相关,表明补肾益气活血方能改善绝经后骨质疏松症大鼠骨密度及骨转换率,从而有效防治绝经后骨质疏松症。3.补肾益气活血方的作用机制是上调绝经后骨质疏松症大鼠骨和肾组织Wnt7b、Axin2及Runx2 mRNA及蛋白表达,且上调骨和肾组织的β-catenin蛋白表达,呈剂量相关,通过上调Wnt7b/β-catenin信号通路相关因子以促进成骨分化,从而对绝经后骨质疏松症起到防治作用。4.补肾益气活血有效组分功能配伍增强矿化结节的形成,可以促进BMSCs成骨分化,起到维持正常骨量的作用。5.补肾益气活血有效组分功能配伍能够上调Wnt7b/β-catenin信号通路中Wnt7b、Axin2以及Runx2 mRNA及蛋白表达以促进BMSCs成骨分化。
二、中药复方对去卵巢大鼠骨转换生化指标的影响(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、中药复方对去卵巢大鼠骨转换生化指标的影响(论文提纲范文)
(1)骨宝丸靶向调节BMP-2治疗Ⅰ型骨质疏松的机制探讨(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
引言 |
第一章 文献研究 |
第一节 现代医学对绝经后骨质疏松症的认识 |
一、骨质疏松症定义及流行病学研究 |
二、绝经后骨质疏松机制研究进展 |
第二节 祖国医学对绝经后骨质疏松症的认识 |
一、中医学对绝经后骨质疏松症的病因病机认识 |
二、绝经后骨质疏松症的辨证分型 |
第三节 中医药治疗绝经后骨质疏松症的研究进展 |
一、中医学治疗绝经后骨质疏松症的基本原则 |
二、单味中药治疗骨质疏松症 |
三、中药复方治疗骨质疏松症 |
第二章 实验研究 |
第一节 实验一临床研究 |
一、研究对象 |
二、分组方法 |
三、观察指标 |
四、统计学分析 |
五、结果与分析 |
六、讨论 |
第二节 实验二绝经后骨质疏松症小鼠模型的建立 |
一、实验材料 |
二、实验方法 |
三、统计学分析 |
四、结果与分析 |
五、讨论 |
第三节 实验三骨宝丸对维甲酸诱导骨质疏松小鼠的影响 |
一、实验材料 |
二、实验方法 |
三、统计学分析 |
四、结果与分析 |
五、讨论 |
第四节 实验四 骨宝口服液对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响及其作用机制 |
一、实验材料 |
二、实验方法 |
三、统计学分析 |
四、结果与分析 |
五、讨论 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
在校期间发表论文情况 |
致谢 |
(2)基于数据挖掘的骨质疏松症用药规律分析及天畅胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松症的机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩写词表 |
引言 |
第一部分 基于数据挖掘的骨质疏松症用药规律分析 |
1.研究对象 |
1.1 资料来源 |
1.2 诊断标准 |
1.3 纳入标准 |
1.4 排除标准 |
2.研究方法 |
3.统计学分析方法 |
4.研究结果 |
4.1 患者基本信息分析 |
4.2 频数结果分析 |
4.3 药物聚类分析结果 |
4.4 药物因子分析 |
5.讨论 |
5.1 骨质疏松症的中医认识 |
5.2 药物频数结果分析 |
5.3 聚类和因子的分析 |
5.4 用药经验分析 |
6.结论 |
第二部分 天畅胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松的机制研究及对OPG/RANKL/RANK信号通路的影响 |
1.材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验方法 |
2.统计学方法 |
3.实验技术路线图 |
4.实验结果 |
4.1 各组大鼠股骨骨密度测定结果 |
4.2 各组大鼠子宫系数、血清雌二醇(E2)测定结果 |
4.3 大鼠血清骨保护素(OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)比值测定结果 |
4.4 大鼠股骨病理组织染色形态对比 |
5.讨论 |
5.1 骨质疏松大鼠模型建立和评价 |
5.2 基于去卵巢骨质疏松大鼠雌激素水平及子宫萎缩情况探讨中医药对骨质疏松症的影响 |
5.3 OPG/RANKL/RANK信号因子在骨质疏松症中的作用 |
5.4 Wnt/β-catenin信号通路在骨质疏松症的作用 |
6.结论 |
问题与展望 |
致谢 |
参考文献 |
综述 OPG/RANKL/RANK 信号因子与骨质疏松症及中医药的研究进展 |
参考文献 |
在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
(3)牦牛骨胶原蛋白肽抗骨质疏松作用机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
第一章 引言 |
1.1 牦牛骨研究现状 |
1.1.1 牦牛骨结构及营养特性 |
1.1.2 牦牛骨利用现状 |
1.2 骨胶原蛋白研究现状 |
1.2.1 骨胶原蛋白提取 |
1.2.2 骨胶原蛋白肽制备 |
1.2.3 骨胶原蛋白肽生物活性 |
1.3 骨质疏松症研究进展 |
1.3.1 骨质疏松症分类 |
1.3.2 骨质疏松症治疗 |
1.3.3 骨质疏松症动物模型构建 |
1.3.4 骨代谢信号通路研究进展 |
1.3.5 代谢组学在骨质疏松症研究中的应用 |
1.4 本课题研究背景及内容 |
1.4.1 研究背景 |
1.4.2 研究目的和意义 |
1.4.3 研究内容 |
1.4.4 技术路线 |
第二章 牦牛骨胶原蛋白提取及结构鉴定 |
2.1 前言 |
2.2 材料与方法 |
2.2.1 试验材料与试剂 |
2.2.2 主要仪器设备 |
2.2.3 试验方法 |
2.2.4 数据分析方法 |
2.3 结果与讨论 |
2.3.1 牦牛骨基本成分分析 |
2.3.2 牦牛骨胶原蛋白紫外扫描分析 |
2.3.3 牦牛骨胶原蛋白热变性温度分析 |
2.3.4 牦牛骨胶原蛋白傅里叶变换红外光谱分析 |
2.3.5 牦牛骨胶原蛋白SDS-PAGE电泳分析 |
2.3.6 牦牛骨胶原蛋白微观结构分析 |
2.4 本章小结 |
第三章 牦牛骨胶原蛋白肽酶解工艺优化 |
3.1 前言 |
3.2 材料与方法 |
3.2.1 试验材料与试剂 |
3.2.2 主要仪器设备 |
3.2.3 试验方法 |
3.2.4 数据分析方法 |
3.3 结果与讨论 |
3.3.1 牦牛骨胶原蛋白酶解液水解度分析 |
3.3.2 牦牛骨胶原蛋白酶解液分子量分布分析 |
3.3.3 不同蛋白酶解液促成骨细胞增殖活性比较分析 |
3.3.4 牦牛骨胶原蛋白酶解工艺单因素试验分析 |
3.3.5 牦牛骨胶原蛋白酶解工艺响应面试验分析 |
3.4 本章小结 |
第四章 牦牛骨胶原蛋白肽分离纯化及生物活性研究 |
4.1 前言 |
4.2 材料与方法 |
4.2.1 试验材料与试剂 |
4.2.2 主要仪器设备 |
4.2.3 试验方法 |
4.2.4 数据分析方法 |
4.3 结果与讨论 |
4.3.1 牦牛骨胶原蛋白肽超滤及其组分的促成骨细胞增殖活性分析 |
4.3.2 牦牛骨胶原蛋白肽体积排阻分离及其组分的促成骨细胞增殖活性分析 |
4.3.3 牦牛骨胶原蛋白肽RP-HPLC分离及其组分的促成骨细胞增殖活性分析 |
4.3.4 牦牛骨胶原蛋白肽氨基酸测序及其促成骨细胞增殖活性分析 |
4.3.5 牦牛骨胶原蛋白肽潜在毒性和致敏性分析 |
4.4 本章小结 |
第五章 模拟胃肠道消化及CACO-2转运机制研究 |
5.1 前言 |
5.2 材料与方法 |
5.2.1 试验材料与试剂 |
5.2.2 主要仪器设备 |
5.2.3 试验方法 |
5.2.4 数据分析方法 |
5.3 结果与讨论 |
5.3.1 GP-12肽模拟胃肠道消化后组分鉴定及促成骨细胞增殖活性分析 |
5.3.2 Caco-2 细胞单层模型评价及GP-12 肽转运分析 |
5.3.3 GP-12肽吸收转运机制分析 |
5.4 本章小结 |
第六章 牦牛骨胶原蛋白肽促成骨细胞增殖分子机制研究 |
6.1 前言 |
6.2 材料与方法 |
6.2.1 试验材料与试剂 |
6.2.2 主要仪器设备 |
6.2.3 试验方法 |
6.2.4 数据分析方法 |
6.3 结果与讨论 |
6.3.1 成骨细胞形态学观察结果分析 |
6.3.2 细胞周期结果分析 |
6.3.3 荧光Quantitative real-time PCR结果分析 |
6.3.4 蛋白质免疫印迹Western blot结果分析 |
6.3.5 GP-12肽的分子对接结果研究 |
6.4 本章小结 |
7.1 前言 |
7.2 材料与方法 |
7.2.1 试验材料与试剂 |
7.2.2 主要仪器设备 |
7.2.3 试验方法 |
7.2.4 数据分析方法 |
7.3 结果与讨论 |
7.4 本章小结 |
第八章 牦牛骨胶原蛋白肽抗骨质疏松活性研究 |
8.1 前言 |
8.2 材料与方法 |
8.2.1 试验材料与试剂 |
8.2.2 主要仪器设备 |
8.2.3 试验方法 |
8.2.4 数据分析方法 |
8.3 结果与讨论 |
8.3.1 大鼠体重变化测定 |
8.3.2 大鼠骨转换生化标志物分析 |
8.3.3 大鼠骨生物力学指标分析 |
8.3.4 大鼠骨形态力学指标分析 |
8.4 本章小结 |
第九章 牦牛骨胶原蛋白肽抗骨质疏松活性代谢组学研究 |
9.1 前言 |
9.2 材料与方法 |
9.2.1 试验材料与试剂 |
9.2.2 主要仪器设备 |
9.2.3 试验方法 |
9.2.4 数据分析方法 |
9.3 结果与讨论 |
9.3.1 实验质控数据分析 |
9.3.2 牦牛骨胶原蛋白肽处理组大鼠血清代谢指纹图谱分析 |
9.3.3 PCA和 OPLS-DA数据分析 |
9.3.4 单变量统计分析 |
9.3.5 潜在生物标志物鉴定分析 |
9.3.6 潜在生物标志物生物信息学分析 |
9.4 本章小结 |
第十章 全文结论 |
10.1 结论 |
10.2 论文创新点 |
10.3 展望 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
作者简历 |
(4)补正密骨方对去势骨质疏松症大鼠骨密度和骨代谢影响的实验研究(论文提纲范文)
摘要 |
英文摘要 |
英文缩略词表 |
前言 |
材料与方法 |
实验结果 |
讨论 |
结论 |
创新性的自我评价、问题与展望 |
参考文献 |
综述 |
论文一 中药牛膝单味药及各自复方治疗骨质疏松症综述 |
1.OP现代医学发病机理及骨代谢指标 |
2.OP发病的中医病因病机 |
3.治疗OP的特效药(牛膝) |
4.牛膝及含牛膝复方治疗 OP |
5.小结与展望 |
论文二 中药淫羊藿单味药及各自复方治疗骨质疏松症综述 |
1 治疗 OP 的特效药(淫羊藿) |
2 含淫羊藿复方在临床中的进展 |
3 含淫羊藿复方在实验中的进展 |
4 单味药淫羊藿在实验中的进展 |
5 单味药淫羊藿的有效成分及作用 |
6 小结与展望 |
参考文献 |
个人简介 |
在学期间科研成绩 |
致谢 |
(5)雌雄去势大鼠骨微观结构和生物力学性能的比较及右归丸干预作用的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
缩略词中英文对照表 |
文献综述 中医药防治骨质疏松症的研究进展 |
参考文献 |
前言 |
材料与方法 |
1 材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验药物 |
1.3 实验主要试剂 |
1.4 实验主要仪器 |
2 方法 |
2.1 实验动物分组及处理 |
2.1.1 卵巢切除手术(OVX)的具体方法 |
2.1.2 睾丸切除手术(ORX)的具体方法 |
2.2 取材 |
2.3 脱钙骨冰冻切片的制作 |
2.4 指标检测 |
2.4.1 骨组织形态指标的检测 |
2.4.2 骨生物力学指标的检测 |
2.4.3 胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)、c-Fos、AP-1蛋白表达的检测 |
2.5 统计学分析 |
结果 |
1 雌雄去势大鼠股骨松质骨形态结构的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.1 雌雄去势大鼠股骨松质骨BV/TV变化率的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.2 雌雄去势大鼠股骨松质骨Conn.Dn变化率的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.3 雌雄去势大鼠股骨松质骨Cb.C变化率的比较及右归丸对其的干预作用 711.4 雌雄去势大鼠股骨松质骨DA的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.4 雌雄去势大鼠股骨松质骨DA的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.5 雌雄去势大鼠股骨松质骨Tb.Pf的比较及右归丸对其的干预作用 |
2 雌雄去势大鼠股骨皮质骨生物力学性能的比较及右归丸对其的干预作用 |
2.1 雌雄去势大鼠股骨皮质骨ML变化率的比较及右丸对其的干预作用 |
2.2 雌雄去势大鼠股骨皮质骨BS变化率的比较及右归丸对其的干预作用 |
2.3 雌雄去势大鼠股骨皮质骨EM变化率的比较及右归丸对其的干预作用 |
3 雌雄去势大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)、c-Fos、AP-1蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用 |
3.1 雌雄去势大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用 |
3.2 雌雄去势大鼠胫骨骨髓中c-Fos蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用 |
3.3 雌雄去势大鼠胫骨骨髓中AP-1蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用 |
讨论 |
1 从“性别差异”角度探讨中医“肾主骨”理论与骨质疏松症的关系 |
2 雌雄去势大鼠骨微观结构的比较 |
3 雌雄去势大鼠骨生物力学性能的比较 |
4 右归丸对雌、雄去势大鼠骨微观结构和生物力学性能的干预作用 |
4.1 右归丸对雌、雄去势大鼠骨微观结构的干预作用 |
4.2 右归丸对雌、雄去势大鼠骨生物力学性能的干预作用 |
5 机制探讨 |
结论 |
参考文献 |
致谢 |
个人简介 |
附图 |
(6)去卵巢大鼠骨组织mRNA和lncRNA表达特征及中药的干预作用(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
引言 |
第一章 文献研究 |
第一节 绝经后骨质疏松症的中医学研究 |
一、中医学对绝经后骨质疏松症病因病机的认识 |
二、中医药防治绝经后骨质疏松症的研究进展 |
第二节 绝经后骨质疏松症的现代医学研究 |
一、绝经后骨质疏松症的遗传学研究 |
二、绝经后骨质疏松症相关非编码RNA的研究进展 |
第二章 去卵巢大鼠股骨mRNA和lncRNA表达谱研究 |
一、材料 |
二、方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
第三章 骨疏康抑制去卵巢大鼠骨细胞凋亡,增强BMP-2/Smads信号通路 |
第一节 研究背景 |
第二节 骨疏康对去卵巢骨质疏松大鼠的防治作用 |
一、材料 |
二、方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
第三节 骨疏康对去卵巢骨质疏松大鼠BMP-2/Smads信号通路的影响 |
一、材料 |
二、方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
第四节 骨疏康对去卵巢骨质疏松大鼠骨细胞凋亡的影响 |
一、材料 |
二、方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
在校期间发表论文情况 |
致谢 |
附件 |
详细摘要 |
(7)中药对骨质疏松症骨代谢影响研究进展(论文提纲范文)
1 中药对骨质疏松症骨代谢影响的实验研究 |
1.1 中药对正常小鼠骨质疏松症骨代谢影响 |
1.2 中药对老年大鼠骨质疏松症骨代谢影响 |
1.3 中药对去卵巢鼠骨质疏松症骨代谢影响 |
1.4 中药对去睾丸大鼠骨质疏松症骨代谢影响 |
1.5 中药对继发性骨质疏松大鼠骨代谢影响 |
1.6 中药及中药复方对人体骨代谢相关细胞及信号通路影响 |
2 中药对骨质疏松症骨代谢影响的临床研究 |
2.1 中药对原发性骨质疏松症骨代谢影响 |
2.2 中药对继发性骨质疏松症骨代谢影响 |
3 小结 |
(8)天畅胶囊对卵巢切除骨质疏松大鼠的疗效及作用机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略词表 |
引言 |
1.骨质疏松症现状概述 |
2.骨组织代谢过程 |
3.骨质疏松症的药物治疗 |
4.中医对骨质疏松症的认识 |
5.中药治疗骨质疏松症研究概述 |
6.天畅胶囊的前期研究概述 |
实验研究:天畅胶囊对卵巢切除骨质疏松症大鼠的实验研究 |
1.材料与方法 |
1.1 实验动物 |
1.2 药物、仪器、试剂 |
1.3 实验方法 |
1.4 统计学处理 |
1.5 技术路线图 |
2.实验结果 |
2.1 一般情况 |
2.2 骨密度 |
2.3 骨形成指标 |
2.4 骨吸收指标 |
2.5 病理学检测 |
讨论 |
1.中医学中对骨质疏松症病因和病机的认识 |
1.1 肾精不足 |
1.2 脾气亏虚 |
1.3 肝郁气滞 |
1.4 瘀血阻络 |
2.天畅胶囊的组方原理及组成药物的现代药理学研究 |
3.骨质疏松症与氧化应激 |
4.骨质疏松症与雌激素 |
5.骨质疏松症中医动物模型 |
6.实验结果分析 |
6.1 天畅胶囊对大鼠一般情况的影响 |
6.2 天畅胶囊对大鼠骨密度的影响 |
6.3 天畅胶囊对大鼠骨形成指标的影响 |
6.4 天畅胶囊对大鼠骨吸收指标的影响 |
6.5 天畅胶囊对大鼠骨组织病理改变的影响 |
7.天畅胶囊治疗原发性骨质疏松症的作用机制探讨 |
8.结论 |
问题与展望 |
致谢 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果(示例) |
(9)基于Wnt3a/β-catenin信号通路探究补肾益气活血方对绝经后骨质疏松症疗效机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
英文缩略词 |
前言 |
第一部分:理论研究 |
中医学对骨质疏松症的认识 |
1 中医学对骨质疏松症病名的认识 |
2 中医学对骨质疏松症病因病机的认识 |
3 中医学对骨质疏松症辨证论治的认识 |
第二部分:体内实验 |
实验一:补肾益气活血中药方对绝经后骨质疏松症大鼠骨组织Wnt3a、CyclinD1 mRNA及蛋白表达的影响 |
材料与方法 |
实验结果 |
实验二:补肾益气活血中药方对绝经后骨质疏松症大鼠肾组织Wnt3a、CyclinD1 mRNA及蛋白表达的影响 |
材料与方法 |
实验结果 |
体内实验小结 |
体内实验分析讨论 |
第三部分:体外实验 |
实验三:补肾益气活血中药方对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响 |
材料与方法 |
实验结果 |
实验小结 |
实验四:补肾益气活血方对加入抑制剂DKK1 细胞ALP、BGP水平及骨钙结节形成的影响 |
材料与方法 |
实验结果 |
实验小结 |
实验五:补肾益气活血方对加入抑制剂DKK1 细胞Wnt3a、CyclinD1 mRNA及蛋白表达的影响 |
材料与方法 |
实验结果 |
实验小结 |
体外实验分析与讨论 |
结论 |
参考文献 |
附录 |
自我创新性评价 |
科技查新报告 |
综述 |
中药治疗骨质疏松症研究进展 |
从中医“肾藏精主骨”探讨骨髓间充质干细胞成骨分化研究进展 |
参考文献 |
个人简介 |
在学期间科研成绩 |
致谢 |
(10)补肾益气活血方对绝经后骨质疏松症大鼠Wnt7b/β-catenin信号通路作用机制的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
英文缩略词表 |
前言 |
第一部分 :理论研究 肾虚血瘀与绝经后骨质疏松症相关性研究 |
1 肾虚与血瘀的相关性 |
2 肾虚血瘀是 PMOP 的根本病机 |
3 肾精与 BMSCs 的相关性 |
4 补肾益气活血是治疗 PMOP 的重要治法 |
第二部分 :体内实验研究 |
实验一 :补肾益气活血方对绝经后骨质疏松症大鼠股骨骨密度及血清ALP/TRACP表达的影响 |
材料与方法 |
实验结果 |
小结 |
实验二 :补肾益气活血方对绝经后骨质疏松症大鼠骨组织的Wnt7b/β-catenin信号通路的影响 |
材料与方法 |
实验结果 |
小结 |
实验三 :补肾益气活血方对绝经后骨质疏松症大鼠肾组织的Wnt7b/β-catenin信号通路的影响 |
材料与方法 |
实验结果 |
小结 |
体内实验分析讨论 |
第三部分 :体外实验研究 |
实验四 :补肾益气活血有效组分功能配伍诱导骨髓间充质干细胞成骨分化过程中对Wnt7b/β-catenin信号通路的影响 |
材料与方法 |
实验结果 |
小结 |
体外实验分析讨论 |
结论 |
参考文献 |
本研究创新性的自我评价 |
科技查新报告 |
综述 |
参考文献 |
个人简介 |
在学期间科研成绩 |
致谢 |
四、中药复方对去卵巢大鼠骨转换生化指标的影响(论文参考文献)
- [1]骨宝丸靶向调节BMP-2治疗Ⅰ型骨质疏松的机制探讨[D]. 张念军. 广州中医药大学, 2020(05)
- [2]基于数据挖掘的骨质疏松症用药规律分析及天畅胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松症的机制研究[D]. 胡臣玲. 成都中医药大学, 2020(02)
- [3]牦牛骨胶原蛋白肽抗骨质疏松作用机制研究[D]. 叶孟亮. 中国农业科学院, 2019
- [4]补正密骨方对去势骨质疏松症大鼠骨密度和骨代谢影响的实验研究[D]. 楼家晖. 辽宁中医药大学, 2019(02)
- [5]雌雄去势大鼠骨微观结构和生物力学性能的比较及右归丸干预作用的研究[D]. 柴勇. 中国中医科学院, 2019(01)
- [6]去卵巢大鼠骨组织mRNA和lncRNA表达特征及中药的干预作用[D]. 柴爽. 广州中医药大学, 2019
- [7]中药对骨质疏松症骨代谢影响研究进展[J]. 李杨,关雪峰. 辽宁中医药大学学报, 2019(05)
- [8]天畅胶囊对卵巢切除骨质疏松大鼠的疗效及作用机制研究[D]. 朱宇溪. 成都中医药大学, 2019(04)
- [9]基于Wnt3a/β-catenin信号通路探究补肾益气活血方对绝经后骨质疏松症疗效机制研究[D]. 王大伟. 辽宁中医药大学, 2019
- [10]补肾益气活血方对绝经后骨质疏松症大鼠Wnt7b/β-catenin信号通路作用机制的研究[D]. 王庆谚. 辽宁中医药大学, 2019