一、流式细胞仪检测胃癌中CD44s及CD44v6表达（论文文献综述）
赵丽[1]（2020）在《细小病毒H-1非结构蛋白1抑制消化道肿瘤细胞的机制研究》文中研究表明背景:消化道肿瘤作为全球最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率在世界上均位居前列。细小病毒H-1非结构蛋白1（Non-structural protein 1,NS1）可抑制一些肿瘤的增殖。CD44是肿瘤干细胞的表面标志物之一,包括CD44标准体（Standard form CD44,CD44s）和CD44变异体（CD44 transcript,CD44v）,与肿瘤的形成、进展有关。活性氧（Reactive oxygen species,ROS）升高是临床放、化疗治疗肿瘤的重要机制之一。目的:探讨NS1是否通过调控CD44-xCT-ROS信号通路影响CD44表达进而调节消化道肿瘤细胞内ROS水平达到抑瘤作用及其分子机制。方法:1.构建带蛋白标签的重组质粒pFlag-NS1;2.利用X-tremeGENE HP脂质体转染技术使NS1在消化道肿瘤细胞MKN28、SGC7901、MKN45和HT29中表达;3.Western blot技术检测NS1在消化道肿瘤细胞中表达情况;4.通过CCK-8细胞增殖实验观察NS1对消化道肿瘤细胞增殖能力的影响;5.细胞划痕实验检测NS1对消化道肿瘤细胞迁移能力的影响;6.流式细胞术分析NS1对消化道肿瘤细胞株CD44表达的影响及ROS水平;7.qRT-PCR技术检测NS1对结肠癌HT29细胞株CD44s及CD44v表达的影响。结果:1.CCK-8细胞增殖实验结果显示,与空质粒组和空白组相比,CD44-高分化胃癌细胞MKN28重组质粒pFlag-NS1组细胞增殖能力无明显差异（P>0.05）;CD44+中分化胃癌细胞SC7901、CD44+低分化胃癌细胞MKN45以及CD44+的HT29结肠癌细胞重组质粒pFlag-NS1组的增殖能力均降低（P<0.05）。2.划痕实验结果显示,与空质粒组和空白组相比,MKN28细胞pFlag-NS1组细胞迁移能力无明显差异（P>0.05）;SC7901、MKN45和HT29细胞pFlag-NS1组的迁移能力均出现不同程度的减弱（P<0.05）。3.流式细胞术检测CD44表达量结果显示,与空质粒组相比,MKN28细胞pFlag-NS1组CD44表达量无明显差异（P>0.05）,且CD44为阴性,无表达;SGC7901、MKN45和HT29细胞pFlag-NS1组的CD44表达量均出现不同程度的降低（P<0.05）。4.流式细胞术检测ROS水平结果显示,与空质粒组相比,MKN28细胞pFlag-NS1组ROS水平无明显差异（P>0.05）,且ROS水平均较低;SGC7901、MKN45和HT29细胞pFlag-NS1组的ROS水平均显着升高（P<0.05）,且ROS在6-24h升高显着,24h后开始出现不同程度的降低。5.qRT-PCR检测HT29细胞CD44s及CD44v表达的结果显示,与空质粒组相比,pFlag-NS1组的CD44s升高（P<0.05）,CD44v均出现不同程度的降低,其中以CD44v3-CD44v6、CD44v9-CD44v10降低显着（P<0.05）,CD44v6降低最明显。结论:1.NS1能够抑制CD44+消化道肿瘤细胞的增殖和迁移,对中、低分化的胃癌细胞抑制作用较好。2.NS1通过下调CD44使消化道肿瘤细胞内ROS升高,即通过调控CD44-xCT-ROS信号通路达到抑瘤效应。3.NS1主要通过上调CD44s、下调CD44v发挥对结肠癌细胞的抑瘤作用,以CD44v6下降最显着。
陈聪[2]（2020）在《c-Met CAR-T及PD1/CD28融合受体CAR-T在胃癌中的研究》文中进行了进一步梳理目的:设计靶向c-Met的嵌合抗原受体T细胞（Chimeric antigen receptor T cell,CAR-T）,验证其在胃癌中的有效性及安全性,并对c-Met CAR进行PD1/CD28融合受体优化以改善免疫抑制,提高抗肿瘤效果。方法:使用生物信息学的方法分析TCGA中胃癌数据的c-Met表达情况及其与生存预后的关系。收集手术患者的胃癌肿瘤及癌旁组织标本,用免疫组化的方法检测c-Met的表达。并用PCR、WB、流式细胞计数等方法检测6种不同胃癌细胞系c-Met、PD-L1的基因和蛋白表达情况。构建c-Met CAR和cMet-PD1/CD28 CAR质粒,包装慢病毒、感染T细胞,制备对应的CAR-T。在体外细胞实验中,检测CAR-T细胞不同亚群和表型的变化,及靶细胞刺激对CAR-T激活和PD-1表达的影响。检测CAR-T的细胞因子分泌水平,并通过乳酸脱氢酶释放实验、7-AAD染色、CD107a脱颗粒反应等方法反映c-Met CAR-T、cMet-PD1/CD28 CAR-T对靶细胞的杀伤能力。在体内动物模型中,通过活体小动物成像等方法观测两种CAR-T对小鼠胃癌皮下移植肿瘤的作用,并通过HE染色的方法检测两种靶向c-Met的CAR-T对小鼠正常器官的脱靶毒性。结果:TCGA数据库和胃癌标本免疫组化结果均显示胃癌组织高表达c-Met,c-Met表达较高的胃癌患者的预后较差。通过PCR、WB、FCM等方法筛选出c-Met表达最高的胃癌细胞系MKN-45和最低的细胞系HGC-27,作为实验细胞,并使HGC-27过表达c-Met构建HGC27-OE作为阳性对照。相对于转染空载体质粒的Mock T,c-Met CAR-T细胞的CD3+CD8+亚群和CD62L+CCR7+中央记忆表型增多,PD1/CD28融合受体结构能够进一步增加CAR-T的CD62L+CCR7+中央记忆细胞的比例,但却未明显改变CD4+、CD8+T细胞亚群。靶细胞的刺激可以使c-Met CAR-T的PD-1表达升高,CD69+、CD71+激活表型增多。相对于Mock T,c-Met CAR-T与靶细胞共培养后能够分泌更多的IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10等细胞因子,CD107a脱颗粒反应和对靶细胞的杀伤能力均明显提高,且其杀伤活性依赖于靶细胞c-Met的表达。PD1/CD28融合受体结构能够进一步增强c-Met CAR-T对c-Met阳性胃癌细胞的杀伤能力,此外,还可以降低炎性因子IL-6的释放水平。c-Met CAR-T对小鼠皮下移植胃癌模型肿瘤的生长具有明显的抑制作用,并且对小鼠正常的胃、小肠、心、肝、脾、肺、肾等重要器官没有明显的脱靶毒性。PD1/CD28融合受体结构还能进一步增强c-Met CAR-T的远期抗肿瘤效果。结论:c-Met CAR-T对高表达c-Met的胃癌细胞具有良好的杀伤活性,能够明显抑制c-Met阳性胃癌肿瘤的生长,且对正常器官没有严重的脱靶毒性。PD1/CD28融合受体结构能够通过逆转PD-1免疫抑制信号,进一步增强c-Met CAR-T的抗肿瘤能力,并且可以减少c-Met CAR-T炎性因子IL-6的分泌,降低细胞因子释放综合征的发生率,具有更高的安全性。
熊尚婉[3]（2020）在《CD44v16调控乳腺癌细胞迁移及侵袭能力及其机制研究》文中研究说明目的本实验室前期研究发现乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR细胞株中存在一种新的CD44变异体（CD44v16）,可以明显增强乳腺癌的干性,并促进乳腺癌细胞对阿霉素的耐药。本研究旨在进一步探索CD44v16对乳腺癌细胞的增殖、侵袭及转移的影响及其机制研究,为乳腺癌的复发和转移的诊断和治疗提供理论依据。方法1.根据CD44v16的基因序列设计并合成质粒,通过慢病毒将其转染至乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231中以获得稳定过表达细胞系,细胞可分为以下几组:CD44v16过表达组,阴性对照（NC）组及空白对照（N）组。并通过荧光定量PCR技术以进一步验证过表达CD44v16及阴性对照组慢病毒颗粒转染成功后CD44v16的mRNA相对表达量。2.通过CCK8法及流式细胞仪技术检测过表达CD44v16后MCF-7细胞及MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的改变。3.通过细胞划痕法及Transwell侵袭试验检测CD44v16过表达后对MCF-7细胞及MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力的影响并进行相关机制研究。4.利用qRT-PCR及Western blot法检测各组细胞内侵袭相关基质金属蛋白酶的mRNA及蛋白质表达水平。并进一步了解CD44v16所诱导的通路激活情况,检测MAPK通路相关蛋白总蛋白及磷酸化蛋白表达。5.通过Western blot法验证各组细胞在JNK及ERK1/2通路抑制剂处理后相关通路蛋白表达情况,以及对基质金属蛋白酶7表达影响。并进一步通过细胞划痕法及Transwell侵袭试验通路验证抑制剂处理后对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果1.成功将慢病毒颗粒转染至MCF-7细胞及MDA-MB-231细胞内并用嘌呤霉素进行筛选,于荧光显微镜内观察GFP表达率至90%以上。MCF-7/CD44v16过表达组细胞中CD44v16的mRNA相对表达量明显高于NC组及N组细胞（P<0.001）;在MDA-MB-231/CD44v16过表达组细胞中CD44v16的mRNA相对表达量明显高于较NC组及N组细胞（P<0.01）。2.在细胞培养24h后MCF-7/CD44v16及MDA-MB-231/CD44v16过表达组细胞的增殖率,较NC组及N组细胞均明显增强（P<0.01）;流式细胞仪技术检测MCF-7/CD44v16及MDA-MB-231/CD44v16组细胞的凋亡率,较NC组及N组细胞明显降低（P<0.001）。3.细胞划痕处理后予无血清培养基培养48h后MCF-7/CD44v16及MDA-MB-231/CD44v16过表达组细胞,细胞迁移能力较NC组及N组细胞明显增高（P<0.001）;Transwell试验结果表明,过表达CD44v16后细胞的侵袭能力均明显增高（P<0.001）。4.利用qRT-PCR技术及Western blot法结果表明MCF-7/CD44v16过表达细胞中细胞MMP7的mRNA及蛋白表达量较NC组及N组细胞明显增高（P<0.001）,MMP2及MMP9在各组间表达无统计学差异;而且通过Western blot法结果表明在MCF-7/CD44v16过表达细胞的磷酸化JNK蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白表达量明显增高（P<0.001）,JNK及ERK1/2双重信号转导通路被明显激活,而P38的表达量显示CD44v16的表达对改信号转导通路无影响。5.将各组细胞在JNK抑制剂（SP600125）及ERK1/2抑制剂（U0126）预处理24h后,发现MCF-7/CD44v16中抑制剂处理细胞组较未处理细胞组成功抑制CD44v16诱导基质金属蛋白酶7过表达（P<0.001）,并抑制其所有的细胞迁移及侵袭能力。结论1.在乳腺癌MDA-MB-231细胞及MCF-7细胞中过表达CD44v16,结果表明CD44v16过表达可以促进细胞增殖及抑制细胞凋亡的同时,明显增强细胞的迁移及侵袭能力。2.CD44v16在MCF-7细胞中可以通过JNK及ERK1/2双重信号转导通路的作用促进MMP7的过表达,利用通路抑制剂处理后将明显抑制CD44v16诱导的MMP7的过表达并降低其所诱导的迁移及侵袭能力。
冯凡,曹卫平,陈琦,朱小兰,许文林[4]（2017）在《CD44剪接变异体（CD44v）在肿瘤中的研究进展》文中提出CD44是一种黏附性的跨膜受体糖蛋白,根据外显子表达方式可分为CD44标准体（CD44s）和CD44剪接变异体（CD44v）两种。大量研究证实CD44v的异常表达与多种癌症的发生和发展密切相关,尤其是CD44v在转移性肿瘤中的选择性表达及其与细胞骨架的相互作用。由于CD44v存在着多种复杂的剪接变异体形式,拟从结构上对NCBI中的CD44v进行差异序列的全面比较,综合阐述CD44v在不同肿瘤中的研究及其靶标治疗,为进一步研究CD44v的功能提供理论依据。
徐嵩[5]（2015）在《一群新的CD44highCD58high大肠癌细胞的干细胞特性鉴定及其分子机制研究》文中进行了进一步梳理背景：大肠癌是常见消化道恶性肿瘤之一,发病率和死亡率居常见肿瘤第3位,转移和复发是大肠癌致死主要原因,深入研究大肠癌发生发展的分子机制有助于改善大肠癌临床预后。大肠癌肿瘤干细胞是大肠癌组织中一小部分增殖缓慢、具有自我更新和多向分化能力的干细胞样肿瘤细胞,在大肠癌发生、转移复发和治疗抵抗中起重要作用。自我更新是大肠癌干细胞的主要特征,也是其上述恶性生物学行为的根源。Wnt、Notch、Hedgehog、TGF-β、PI3K/Akt等通路参与了大肠癌干细胞自我更新的调控,其中Wnt通路对大肠癌干细胞自我更新的维持起支配性作用。肿瘤干细胞具有多个干性相关细胞表面分子标志物,用于肿瘤干细胞鉴定和分选。目前已发现大肠癌干细胞具有多个表面分子标志包括CD133、CD44、CD24等,标记具有不同生物学功能的干细胞亚群,新的大肠癌干细胞分子标志有待进一步发现。这些分子标志与自我更新的调控关系是目前研究热点,如CD44对大肠癌干细胞自我更新具有促进作用,然而其他分子标志是否或如何参与调控自我更新尚不明确。另外,表面分子标志也可通过与大肠癌局部微环境中免疫细胞表面配体或受体相互作用而影响自我更新,其具体机制尚待研究。因此,大肠癌干细胞表面分子标志与自我更新调控关系的研究不仅可进一步阐明肿瘤干细胞恶性生物学行为的发生发展机制,也可为靶向清除大肠癌干细胞提供新的治疗靶点和研究思路。目的：本研究主要以大肠癌HT29、SW620细胞系和原代大肠癌P1细胞系为研究对象,筛选和鉴定大肠癌干细胞新的表面分子标志;检测和鉴定新发现的CD44highCD58high大肠癌干细胞表达水平及其肿瘤干细胞特征；研究新的表面标志分子CD58在大肠癌干细胞中分子生物学功能及其作用机制；初步探究Snail/CXCL-8轴对CD44highCD58high大肠癌干细胞干性特征影响及其调控机制,从而阐明CD44highCD58high大肠癌干细胞的恶性生物学功能。方法：通过体外无血清低粘附培养富集大肠癌干细胞,采用全基因cDNA表达谱芯片筛选其中差异表达CD分子作为候选干细胞标志物,以免疫荧光检测验证。流式细胞术检测大肠癌细胞系和原代大肠癌组织中CD44highCD58high大肠癌细胞表达水平。采用克隆球形成试验、动物连续致瘤实验和化疗药物富集试验等鉴定CD44highCD58high大肠癌细胞的肿瘤干细胞特征,并评价其与已知大肠癌干细胞亚群之间的关系。为研究CD58对自我更新的调控作用,采用荧光素酶双报告基因法检测过表达或激活CD58对Wnt通路活性影响,同时利用慢病毒转染观察沉默CD58对体外克隆球形成和体内移植瘤形成的影响。结合cDNA表达谱芯片分析、免疫共沉淀、western blot及克隆球形成实验等鉴定CD58上调Wnt通路活性的作用靶蛋白。采用荧光素酶报告基因和western blot检测Snail对CD44和CD58转录和表达的影响,并观察CXCL-8对体外克隆形成的影响,初步研究Snail/CXCL-8轴对这群细胞干性特征的调控作用。结果：1、大肠癌干细胞CD44和CD58表达升高,CD44highCD58high大肠癌细胞具有显着肿瘤干细胞特征。基因芯片筛选结果示CD44和CD58在大肠癌干细胞中表达显着升高,对大肠癌细胞系和19例原代大肠癌组织流式细胞检测结果示CD44highCD58high大肠癌细胞普遍存在,其表达水平为0.5～10.0%。体内外实验结果示CD44highCD58high大肠癌细胞具有更强的体外克隆球形成、动物体内致瘤和上皮间充质转化能力,且体内外均可被化疗药物5-FU和奥沙利铂短期作用显着富集,提示CD44highCD58high大肠癌细胞具有肿瘤干细胞特性。2、CD44highcD58high大肠癌细胞是CD133+细胞的一个亚群.对大肠癌细胞系、原代大肠癌组织和大肠癌肿瘤克隆球行流式细胞检测结果示CD133+大肠癌细胞中CD44highCD58high细胞比例显着高于CD133-大肠癌细胞（P<0.05）,提示CD44highCD58high大肠癌细胞是CD133+细胞的一个亚群。而CD44highCD58high细胞与CD44+CD24+细胞分布重合率很低,无重叠分布。3、CD58能上调Wnt通路活性而促进大肠癌肿瘤干细胞特征和自我更新。荧光素酶双报告基因方法检测结果示瞬时过表达CD58后大肠癌细胞Wnt通路活性上调,使用CD58交联抗体TS2/9或CD58受体重组人CD2分子作用大肠癌细胞激活CD58也能上调Wnt通路活性,体外实验示克隆球形成能力增加。使用慢病毒感染成功构建CD58稳定抑制细胞,体内外实验结果示沉默CD58导致克隆球形成减少并显着抑制体内移植瘤成瘤率和生长速度。4、大肠癌中CD58通过结合并降解Dickkopf3上调Wnt通路活性。免疫共沉淀结果示CD58能与Dickkopf3（Dkk-3）结合,瞬时过表达CD58后Dkk-3出现降解现象。荧光素酶双报告基因检测结果示大肠癌细胞过表达Dkk-3抑制Wnt通路活性,构建Dkk-3稳定抑制大肠癌细胞后再过表达CD58,Wnt通路活性不能上调,提示CD58与Wnt通路负性调控因子Dkk-3结合并导致其降解,从而上调Wnt通路活性而促进自我更新。5、Snail/CXCL-8轴与CD44、CD58和大肠癌干细胞自我更新存在调控关系。Western blot结果示转录因子Snail在CD44+大肠癌细胞表达增加,瞬时过表达Snail后CD58表达增加同时荧光素酶活性检测结果示Snail调控CD58的转录。ELISA结果示CD58与T淋巴细胞表面CD2相互作用促进CXCL-8分泌,体外实验示CXCL-8可促进大肠癌体外克隆球形成能力。结论：CD44highCD58high大肠癌细胞是一群新的大肠癌干细胞,CD58是一个新的参与调控大肠癌干细胞自我更新的分子标志。激活CD58通过结合和降解Dkk-3上调Wnt/β-catenin通路活性进而促进大肠癌干细胞自我更新。Snail/CXCL-8轴对CD44highCD58high大肠癌干细胞自我更新也有促进作用。
谢江涛[6]（2013）在《大豆黄酮、Mung、Gin和L08对人肝癌细胞的抑制作用》文中进行了进一步梳理目的肝癌（Liver cancer）是指发生在肝脏的恶性肿瘤,包括原发性肝癌与转移性肝癌,其发病率与死亡率较高,严重威胁着人类的生命健康。治疗肝癌的传统方法也是主要的治疗方法就是手术切除、放射治疗、化学抗肿瘤药物治疗。然而传统的治疗方法效果并不理想,肝癌的复发和转移难以控制。近年来,人们对天然植物的抗肿瘤作用的研究越来越多。本实验从大豆、绿豆、灵芝和生姜中分别提取分离出大豆黄酮、Mung、Gin和L08,用这四种药物处理体外培养的肝癌细胞SMMC-7721,来研究它们对肝癌细胞SMMC-7721的增殖及对肝癌干细胞CD44表达水平的影响,从而希望为肝癌的防治提供新的实验依据。方法1.培养人肝癌细胞SMMC-7721,获得对数生长期细胞。2.配制100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml和500μg/ml浓度的大豆黄酮、Mung、Gin和L08,分别处理对数生长期的人肝癌细胞SMMC-7721,处理24小时、48小时和72小时,然后用MTT法测定细胞的增殖率并绘制细胞生长曲线。3.配制100μg/ml、300μg/ml、和500μg/ml的大豆黄酮、Mung、Gin和L08分别处理人肝癌细胞SMMC-7721,处理时间为24h。将荧光素FITC标记的抗体与处理过的细胞混合通过流式细胞仪检测细胞表面抗原CD44。4.配制100μg/ml、300μg/ml、和500μg/ml的大豆黄酮、Mung、Gin和L08分别处理人肝癌细胞SMMC-7721,并用Western Blot方法测定肝癌干细胞中CD44蛋白的表达水平。结果1.MTT结果显示：大豆黄酮、Mung、Gin和L08在不同的药物浓度和给药时间内对人肝癌细胞SMMC-7721的增值均有抑制作用,且浓度和抑制作用密切相关。2.流式细胞术结果显示：大豆黄酮、Mung、Gin和L08处理人肝癌细胞SMMC-772124h后,CD44阳性细胞数目均少于未给药对照组。3. Western Blot结果显示：大豆黄酮、Mung和L08处理人肝癌细胞SMMC-7721后CD44蛋白表达水平均有降低,且剂量与表达水平相关。但Gin不能降低人肝癌干细胞SMMC-7721中CD44的表达。结论1.大豆黄酮、Mung、Gin和L08均能抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并且抑制作用与浓度密切相关。2.大豆黄酮、Mung、Gin和L08均能抑制人肝癌细胞SMMC-7721中CD44阳性细胞的生长。3.大豆黄酮、Mung和L08均能降低人肝癌细胞SMMC-7721中CD44蛋白的表达,但Gin则不能降低人肝癌细胞SMMC-7721中CD44蛋白的表达。
张岩松[7]（2013）在《从腹腔灌洗液中分离胃癌干细胞的可行性及其意义》文中认为背景：肿瘤干细胞研究的前提和基础是能够分离并培养相应肿瘤类型的干细胞或干细胞样细胞。由于肿瘤干细胞的分子标志物还不精确以及人为因素的干扰都为肿瘤干细胞的分离鉴定提出了更高的要求。目前胃癌干细胞（cancer stem cell, CSC）的分离和鉴定仍十分困难,因为这一小部分的胃癌CSC和占大多数的非致瘤性肿瘤细胞在形态上难以区别。常规的实验流程由于对实体瘤采用了蛋白酶消化、机械分离等复杂的步骤,破坏了癌细胞生长的原始微环境。因此,努力找到一种自然病理状态下的胃癌干细胞将有重大意义。目的：先从人胃腺癌细胞系AGS中分离CD44+细胞并体外培养。探讨CD44+细胞是否具有肿瘤干细胞特性。再探讨从腹腔灌洗液中分离胃癌干细胞的可行性及其意义。方法：第一部分首先用磁激活细胞分选法（MACS）从人胃癌细胞系AGS中分选CD44+细胞,再采用无血清培养液（SFM）悬浮细胞聚球法体外培养,通过传代更新、交替在含血清/无血清培养液中培养等方法鉴定悬浮成球细胞具有强增殖性、自我更新和分化潜能等肿瘤干细胞特性。第二部分随机选择45例胃癌患者,术中发现有腹膜转移8例,无腹膜转移37例。用流式细胞仪及免疫组化检测胃癌组织、腹膜转移灶中CD44及CD44V6的表达。同时流式细胞仪检测胃癌术中腹腔灌洗液中CD44和CK20的表达,并比较有、无腹膜转移两组之间差别是否有显着性。结果：（1）MACS分选CD44+细胞纯度达99.2%。（2）CD44+细胞在SFM中悬浮成球率为31%,而CD44-细胞不能成球。CD44+成球细胞还可以继续传代,在完全培养液中培养可分化成CD44-细胞。（3）流式细胞结果：CD44在胃癌组织中的阳性表达率为36.9%,胃癌组织中CD44阳性表达率与浆膜浸润、淋巴结转移等病理因素有关；该两因素分组间差异有显着性（P=0.00）。免疫组化结果：CD44V6在胃癌组织中的阳性表达率为40%,胃癌组织中CD44V6阳性表达率与浆膜浸润、淋巴结转移等病理因素有关；该两因素分组间差异有显着性（P<0.05）。（4）CD44在胃癌和腹膜转移灶中的表达无差异,（P>0.05）。（5）有、无腹膜转移组之间腹腔灌洗液中CD44+CK20+差异有统计学意义（P=0.000）结论：（1） MACS可以快捷、方便地分选肿瘤细胞,而且分选后的细胞纯度高,可以立即用于细胞培养。（2）从人胃腺癌细胞系AGS中分离的CD44+细胞具有肿瘤干细胞特性,CD44可以作为胃癌干细胞标志物之一。（3）人胃癌组织可能包含胃癌干细胞,并导致腹膜转移,（4）从胃癌腹腔灌洗液游离癌细胞中分离胃癌干细胞是可行的,这种可行性为人胃癌干细胞的分离提供了新的思路,为制定胃癌腹膜转移的靶向治疗提供了一定的实验基础。
关云艳,刘凯军,欧希龙,郭庆明[8]（2009）在《P-gp和CD44v6在胃癌组织中表达及与预后的关系》文中进行了进一步梳理目的探讨P-gp和CD44v6在胃癌组织中表达的相关性及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法,检测97例胃癌组织中P-gp及CD44v6的表达,并分析P-gp和CD44v6与胃癌病理特征的关系、两者表达的相互关系及对预后的影响。结果97例胃癌组织中P-gp和CD44v6的阳性率分别为40.21%（39/97）和58.76%（57/97）,P-gp阳性表达情况与胃癌的临床分期、有无淋巴结转移及有无血管侵犯有关（P<0.05）。CD44v6阳性表达与病变大小、临床分期、有无淋巴结转移及有无血管侵犯有关（P<0.05）。P-gp阳性表达与CD44v6阳性表达具有正相关性（P<0.05）,两者表达均阳性者3年生存率低于两者表达均阴性组。结论P-gp和CD44v6的表达不仅与胃癌的生物学行为有关,同时两者的表达具有明显的正相关性,而且两者表达均阳性者预后差,提示联合检测两者有助于判断胃癌的预后。
张可,李中福,王子卫[9]（2008）在《模拟CO2气腹在体外对胃癌细胞生长、凋亡和nm23H1、CD44v6表达的影响》文中指出目的通过体外对胃癌细胞系的培养,探讨体外建立的CO2气腹模拟环境对胃癌细胞系SGC-7901的生长、凋亡和nm23H1、CD44v6表达的影响。为腹腔镜用于治疗消化道恶性肿瘤的安全性作初步评价,并提供相关的实验室证据。方法收集对数生长期SGC-7901细胞,胰酶消化制成细胞悬液,根据不同实验的需要以不同的细胞浓度接种于不同的培养板,培养24h细胞贴壁后,随机分为4组:对照组、CO2气腹作用1h组、CO2气腹作用2h组、CO2气腹作用3h组,其中作为对照组的细胞始终置于细胞培养孵箱中培养,而实验组在纯CO214mmHg压力下培养1、2、3h,然后再置于37℃细胞孵箱内培养。48h后收获细胞用MTT法检测各组细胞的增殖情况;用流式细胞技术检测各组细胞周期分布情况和凋亡比例;RT-PCR检测各组细胞nm23H1、CD44v6mRNA转录水平;免疫细胞化学检测各组细胞中nm23H1、CD44v6的表达情况。结果各CO2作用组经过模拟CO2气腹环境培养后,除1h作用组较对照组吸光度差异无统计学意义外,2h和3h作用组吸光度较对照组均显着上升（P<0.05）;流式细胞仪检测各组细胞周期,对照组和各CO2作用组在培养48h后随CO2作用时间增加,增殖指数上升幅度变大,但1h作用时间组和对照组增殖指数差异无统计学意义（P>0.05）,2h和3h作用组增殖指数和对照组比较显着上升（P<0.05）;凋亡细胞比例随CO2作用时间的延长而下降,CO2作用1h时,凋亡细胞比例与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）,1h后,凋亡细胞比例差异更显着（P<0.01）;PCR电泳结果经凝胶成像自动分析系统分析发现实验组nm23H1-mRNA表达与对照组比较差异不具有统计学意义（P>0.05）,而CD44v6-mRNA表达2h和3h组与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）;免疫细胞化学结果显示CO2气腹可使CD44v6的表达上调,其中2～3h组差异有统计学意义（P<0.01）,但CO2气腹对nm23H1表达的影响无统计学意义（P>0.05）。结论在体外实验中模拟CO2气腹环境促进了恶性肿瘤细胞的增殖、抑制了其凋亡,使CD44v6的表达上调,而对nm23H1的表达无影响;尽管CO2气腹促进肿瘤细胞生长、增加肿瘤细胞播散转移的机制未明,但其可使CD44v6的表达上调,有可能通过CD44v6基因的功能机制增加恶性肿瘤细胞侵袭和转移的潜在风险。
甘家兵[10]（2008）在《乳腺癌患者外周血淋巴细胞和肿瘤组织CD44v6的表达及其临床意义》文中认为目的:检测乳腺癌术前外周血淋巴细胞（PBL）和肿瘤组织中CD44v6的表达,研究它们与乳腺癌的发生发展侵袭转移等因素之间的相关性,比较二者相关关系。找到准确、简单、迅捷的指标,术前评估乳腺癌的生物学特性,指导乳腺癌治疗方案的选择。方法:以我院住院手术的乳腺癌患者为研究对象,根据纳入病例标准选择女性患者40例,分别取其新鲜乳腺癌组织2-5g和术前外周血2ml;另取10例正常乳腺组织（良性肿瘤旁1-2cm处）各2-3g,采集20例正常女性外周血2ml,为对照组;分别制成癌细胞、正常乳腺组织细胞及外周血细胞悬液（106细胞悬液）,在流式细胞仪（FCM）上检测其CD44v6的表达。根据方差齐性,使用t检验或者近似t检验,比较实验组与对照组间以及实验组组内CD44v6表达的差异,并使用直线相关分析研究乳腺癌患者PBL和肿瘤组织中CD44v6表达的相关性。结果以x±s表示,用SPSS13.0软件包对结果进行统计分析,P<0.05认为差异有显着性。结果:乳腺癌患者PBL及其肿瘤组织中CD44v6的含量均与乳腺癌的发生（乳腺癌组>正常对照组）、原发肿瘤大小（大于3cm者>小于3者）、临床病理分期（Ⅲ-Ⅳ期者>Ⅰ-Ⅱ期者）以及淋巴转移（有转移者>无转移者）明显相关（P<0.01）,但与患者年龄、肿瘤类型、月经情况以及雌孕激素水平无明显相关性（P>0.05）。并且两者表达具有明显的正相关性（r=0.84,P<0.01）。结论:1.乳腺癌患者PBL与肿瘤组织中CD44v6的表达均与乳腺癌的临床病理学及生物学特性相关。2.CD44v6参与了乳腺癌的发生发展及浸润转移过程。3.乳腺癌患者PBL CD44v6的含量改变能反映肿瘤组织中的含量变化。4.用FCM技术检测乳腺癌患者PBL CD44v6的含量,对乳腺癌的诊断、进展与转移评价可能有重要的临床意义。
二、流式细胞仪检测胃癌中CD44s及CD44v6表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、流式细胞仪检测胃癌中CD44s及CD44v6表达（论文提纲范文）
（1）细小病毒H-1非结构蛋白1抑制消化道肿瘤细胞的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 细小病毒H-1非结构蛋白1抑制人胃癌细胞的机制研究 |
| 引言 |
| 材料与仪器 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二章 细小病毒H-1非结构蛋白1抑制人结肠癌细胞的机制研究 |
| 引言 |
| 材料与仪器 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 A 英文缩略词表 |
| 附录 B 主要试剂配制方法 |
| 附录 C 个人简历 |
| 附录 D 攻读学位期间发表文章情况 |
| 附录 E 综述 |
| 参考文献 |
（2）c-Met CAR-T及PD1/CD28融合受体CAR-T在胃癌中的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 胃癌CAR-T及c-Met CAR-T的研究现状 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 CAR-T在胃癌中的研究现状 |
| 1.2.1 胃癌CAR-T的基础研究 |
| 1.2.2 胃癌CAR-T的临床实验注册 |
| 1.3 c-Met CAR-T的研究现状 |
| 1.3.1 c-Met CAR-T的基础研究现状 |
| 1.3.2 c-Met CAR-T临床实验注册 |
| 1.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 MET基因在胃癌中表达及功能的生物信息学分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 数据获取及分析方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 c-Met在胃癌组织及细胞系中表达的检测 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 胃癌组织c-Met免疫组化表达分析 |
| 3.1.2 胃癌细胞培养 |
| 3.1.3 提取细胞RNA |
| 3.1.4 PCR反应 |
| 3.1.5 提取细胞总蛋白 |
| 3.1.6 聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳 |
| 3.1.7 流式细胞计数检测胃癌细胞系c-Met、PD-L1 表达 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 c-Met在胃癌中的表达水平高于癌旁组织 |
| 3.2.2 qRT-PCR分析不同胃癌细胞系中MET、PD-L1 基因转录水平 |
| 3.2.3 WB分析不同胃癌细胞系中c-Met表达水平 |
| 3.2.4 FCM分析不同胃癌细胞系c-Met、PD-L1 的细胞膜表面表达水平 |
| 3.2.5 CCLE数据库中MET、PD-L1 表达验证 |
| 3.3 结论 |
| 第四章 MET过表达慢病毒及CAR慢病毒的制备 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 质粒构建 |
| 4.1.2 载体酶切 |
| 4.1.3 目的基因片段扩增 |
| 4.1.4 酶连重组 |
| 4.1.5 转化 |
| 4.1.6 质粒抽提 |
| 4.1.7 重组质粒基因测序 |
| 4.1.8 质粒转染与慢病毒收获 |
| 4.1.9 慢病毒感染293T |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 CAR序列结构 |
| 4.2.2 载体酶切、目的片段扩增、酶连重组验证 |
| 4.2.3 慢病毒的验证 |
| 4.3 结论 |
| 第五章 c-Met CAR-T及 cMet-PD1/CD28 CAR-T对胃癌效果的体外验证 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 MET-OE慢病毒感染HGC-27 细胞 |
| 5.1.2 CAR-T细胞制备 |
| 5.1.3 慢病毒CAR-T感染效率的检测 |
| 5.1.4 CAR-T细胞增殖检测 |
| 5.1.5 CAR-T细胞亚群及表型检测 |
| 5.1.6 靶细胞刺激对CAR-T激活的影响 |
| 5.1.7 靶细胞刺激对CAR-T中 PD-1 表达的影响 |
| 5.1.8 细胞因子分泌检测 |
| 5.1.9 LDH释放实验 |
| 5.1.10 7-AAD杀伤实验 |
| 5.1.11 CD107a脱颗粒反应 |
| 5.1.12 高内涵成像分析 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 MET-OE慢病毒感染可使HGC-27 细胞过表达c-Met |
| 5.2.2 c-Met CAR和 c Met-PD1/CD28 CAR慢病毒感染以成功构建对应的CAR-T |
| 5.2.3 CAR-T细胞中CD8~+T细胞、中央记忆T细胞的比例升高 |
| 5.2.4 靶细胞刺激后c-Met CAR-T中激活表型增多 |
| 5.2.5 靶细胞刺激后c-Met CAR-T中 PD-1 表达升高 |
| 5.2.6 PD1/CD28 融合受体能刺激CAR-T中 IFN-γ、TNF-α分泌,抑制IL-6分泌 |
| 5.2.7 PD1/CD28 融合受体能进一步增强c-Met CAR-T对靶细胞的杀伤 |
| 5.2.8 PD1/CD28 融合受体能进一步增强c-Met CAR-T的脱颗粒水平 |
| 5.2.9 高内涵成像显示CAR-T识别并杀伤肿瘤 |
| 5.3 结论 |
| 第六章 c-Met CAR-T及 cMet-PD1/CD28 CAR-T对胃癌效果的体内验证 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 主要试剂 |
| 6.1.2 主要仪器 |
| 6.1.3 实验动物 |
| 6.1.4 实验细胞 |
| 6.1.5 皮下成瘤及活体小动物成像 |
| 6.1.6 HE染色 |
| 6.2 试验结果 |
| 6.2.1 c-Met CAR-T及 c Met-PD1/CD28 CAR-T对 c-Met~+胃癌模型具有明显的抑制作用 |
| 6.2.2 c-Met CAR-T及 cMet-PD1/CD28 CAR-T对正常器官没有明显的脱靶毒性 |
| 6.3 结论 |
| 第七章 讨论、结论与展望 |
| 7.1 讨论 |
| 7.2 结论 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 嵌合抗原受体T细胞的新型设计方案 |
| 参考文献 |
| HGF/c-Met信号通路及其在胃和胃食管交界癌治疗中的应用 |
| 参考文献 |
| 附图 技术路线图 |
| 附表 |
| 附缩略词简表 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（3）CD44v16调控乳腺癌细胞迁移及侵袭能力及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 乳腺癌的概述 |
| 1.2 CD44 的概述 |
| 1.3 侵袭相关基质金属蛋白酶的概述 |
| 1.4 侵袭相关MAPK信号通路的概述 |
| 1.5 本研究的意义 |
| 第二章 CD44v16 对乳腺癌增殖及迁移的影响 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.1 细胞株及慢病毒 |
| 2.1.2 实验试剂与材料 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 慢病毒转染及细胞筛选 |
| 2.2.3 荧光定量PCR检测 |
| 2.2.4 CCK8 法检测细胞增殖率 |
| 2.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 2.2.6 细胞划痕试验 |
| 2.2.7 细胞Transwell侵袭试验 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 CD44v16 过表达乳腺癌细胞的建立及鉴定 |
| 2.3.2 CD44v16 过表达促进乳腺癌细胞的增殖 |
| 2.3.3 CD44v16 过表达抑制乳腺癌细胞的凋亡 |
| 2.3.4 CD44v16 过表达调控乳腺癌细胞的迁移 |
| 2.3.5 CD44v16 过表达调控乳腺癌细胞的侵袭 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 CD44v16 调控乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的机制研究 |
| 3.1 实验材料与试剂 |
| 3.1.1 细胞株 |
| 3.1.2 实验试剂与材料 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 主要试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 荧光定量PCR检测 |
| 3.2.2 蛋白质免疫印迹法检测 |
| 3.2.3 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 CD44v16 过表达诱导乳腺癌细胞侵袭相关蛋白的表达 |
| 3.3.2 CD44v16 激活MAPK信号通路 |
| 3.3.3 CD44v16 通过MAPK通路调控MMP7 的表达 |
| 3.3.4 MAPK通路抑制后对迁移及侵袭的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 总结和展望 |
| 4.1 总结 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 第五章 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 |
（4）CD44剪接变异体（CD44v）在肿瘤中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 CD44剪接变异体(CD44v)的基本结构概述 |
| 2 CD44剪接变异体(CD44v)与肿瘤 |
| 2.1 CD44v与消化道肿瘤 |
| 2.2 CD44v与淋巴/血液系统肿瘤 |
| 2.3 CD44v与其他器官肿瘤 |
| 3 肿瘤中CD44剪接变异体(CD44v)的靶标治疗 |
| 4 总结 |
（5）一群新的CD44highCD58high大肠癌细胞的干细胞特性鉴定及其分子机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 主要仪器设备 |
| 目次 |
| 引言 |
| 1 第一章 CD44~(high)CD58~(high)大肠癌细胞的发现及干性特征鉴定 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 2 第二章 CD44~(high)CD58~(high)大肠癌细胞与已知干细胞亚群的关系研究 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 3 第三章 CD58促进大肠癌干细胞自我更新及其分子机制研究 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 4 第四章 CD58上调Wnt通路活性的作用靶蛋白鉴定 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 5 第五章 Snail/CXCL-8轴与CD44、CD58和自我更新的调控关系 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 全文结论 |
| 全文参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（6）大豆黄酮、Mung、Gin和L08对人肝癌细胞的抑制作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 癌细胞株 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 主要试剂配制 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 人肝癌细胞SMMC-7721的培养 |
| 3.1.1 细胞的复苏 |
| 3.1.2 细胞的换液 |
| 3.1.3 细胞的消化与传代 |
| 3.1.4 细胞冻存 |
| 3.1.5 细胞计数 |
| 3.2 MTT法测定肝癌细胞SMMC-7721的增值率 |
| 3.2.1 实验分组 |
| 3.2.2 实验步骤 |
| 3.3 流式细胞术检测肝癌干细胞的增值率 |
| 3.3.1 实验分组 |
| 3.3.2 实验步骤 |
| 3.4 CD44蛋白的Western blot分析 |
| 3.4.1 总蛋白的制备及浓度测定 |
| 3.4.2 SDS-PAGE垂直电泳 |
| 3.4.3 转膜 |
| 3.4.4 抗体孵育 |
| 3.4.5 辣根过氧化酶-DAB法染色分析 |
| 3.5 统计学方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 MTT法检测不同浓度的大豆黄酮、Mung、Gin和L08对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用 |
| 4.1.1 不同浓度的大豆黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用 |
| 4.1.2 不同浓度Mung对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用 |
| 4.1.3 不同浓度Gin对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用 |
| 4.1.4 不同浓度L08对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用 |
| 4.1.5 不同浓度环磷酰胺对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用 |
| 4.2 流式细胞术检测不同浓度大豆黄酮、Mung、Gin和L08对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44阳性细胞的影响 |
| 4.2.2 不同浓度Mung对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44阳性细胞的影响 |
| 4.2.3 不同浓度L08对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44阳性细胞的影响 |
| 4.2.4 不同浓度Gin对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44阳性细胞的影响 |
| 4.2.5 不同浓度环磷酰胺对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44阳性细胞的影响 |
| 4.3 Western Blot检测大豆黄酮、Mung、Gin和L08对肝癌干细胞CD44表达的影响 |
| 4.3.1 大豆黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响 |
| 4.3.2 Mung对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响 |
| 4.3.3 Gin对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响 |
| 4.3.4 L08对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响 |
| 4.3.5 环磷酰胺对人肝癌细胞SMMC-7721中CD44表达的影响 |
| 5 实验讨论 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）从腹腔灌洗液中分离胃癌干细胞的可行性及其意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 人胃癌细胞系AGS中分离CD44+细胞并体外培养、鉴定 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 胃癌组织、腹膜转移灶及腹腔灌洗液中CD44+细胞的检测及其意义 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| （一）肿瘤干细胞的研究热点及在胃癌研究中的最新进展 |
| 参考文献 |
| （二）消化道肿瘤干细胞的分离、鉴定新进展 |
| 参考文献 |
| 中英文对照 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（9）模拟CO2气腹在体外对胃癌细胞生长、凋亡和nm23H1、CD44v6表达的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞培养 |
| 1.2 噻唑盐比色法 (MTT) 测定 |
| 1.2.1 实验分组 |
| 1.2.2 实验步骤 |
| 1.3 流式细胞仪检测细胞周期分布 |
| 1.3.1 实验分组 |
| 1.3.2 实验步骤 |
| 1.4 流式细胞仪检测细胞凋亡比例 |
| 1.4.1 实验分组 |
| 1.4.2 实验步骤 |
| 1.5 RT-PCR检测nm23H1、CD44v6 |
| 1.5.1 实验分组及细胞培养 |
| 1.5.2 细胞总RNA提取 |
| 1.5.3 RNA的分析和定量 |
| 1.5.4 RT-PCR (1) 反转录反应: |
| 1.6 胃癌细胞中nm23H1、CD44v6的表达 |
| 1.7 统计学处理 |
| 2 结 果 |
| 2.1 MTT法测定CO2气体对胃癌细胞生长的影响 |
| 2.2 流式细胞仪检测细胞周期 |
| 2.3 采用FITC双标记法测定凋亡细胞比例 |
| 2.4 RT-PCR检测nm23H1、CD44v6mRNA转录水平 |
| 2.5 CO2对细胞nm23H1、CD44v6蛋白表达的影响 |
| 3 讨 论 |
（10）乳腺癌患者外周血淋巴细胞和肿瘤组织CD44v6的表达及其临床意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料和方法 |
| 2.1 研究对象和纳入标准 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 纳入标准 |
| 2.2 临床资料 |
| 2.3 手术方法 |
| 2.4 实验试剂及设备 |
| 2.4.1 主要试剂 |
| 2.4.2 主要设备 |
| 2.5 实验方法和步骤 |
| 2.5.1 标本的采集 |
| 2.5.2 标本的处理 |
| 2.5.3 检测分析 |
| 2.6 统计方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 乳腺癌患者PBL及其肿瘤组织CD44v6的含量与对照组分别进行比较 |
| 3.2 乳腺癌患者PBL及其肿瘤组织CD44v6的含量按原发肿瘤大小分组比较 |
| 3.3 乳腺癌患者PBL 及其肿瘤组织CD44v6 的含量按TNM 分期分组比较 |
| 3.4 乳腺癌患者 PBL 及其肿瘤组织 CD44v6 的含量按淋巴转移分组比较 |
| 3.5 乳腺癌患者 PBL 及其肿瘤组织 CD44v6 的含量按肿瘤类型分组比较 |
| 3.6 乳腺癌患者 PBL 及其肿瘤组织 CD44v6 的含量按患者年龄分组比较 |
| 3.7 乳腺癌患者 PBL 及其肿瘤组织 CD44v6 的含量按绝经情况分组比较 |
| 3.8 乳腺癌患者PBL 及其肿瘤组织CD44v6 的含量按ER 分组比较 |
| 3.9 乳腺癌患者术前PBL 及其肿瘤组织CD44v6 的含量按PR 分组比较 |
| 3.10 乳腺癌患者PBL 与肿瘤组织CD44v6 的含量直线相关关系 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 CD44 及CD44v6 |
| 4.2 CD44v6 在恶性肿瘤中的表达 |
| 4.3 CD44v6 在乳腺癌组织中的表达 |
| 4.4 CD44v6 在乳腺癌患者术前PBL 中的表达 |
| 4.5 CD44v6 在乳腺癌患者术前PBL 与肿瘤组织中的表达相关性 |
| 第五章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 附录 A |
| 附录 B |
| 附录 C |
| 附录 D |
| 攻读学位期间的研究成果 |
四、流式细胞仪检测胃癌中CD44s及CD44v6表达（论文参考文献）
- [1]细小病毒H-1非结构蛋白1抑制消化道肿瘤细胞的机制研究[D]. 赵丽. 蚌埠医学院, 2020
- [2]c-Met CAR-T及PD1/CD28融合受体CAR-T在胃癌中的研究[D]. 陈聪. 兰州大学, 2020(01)
- [3]CD44v16调控乳腺癌细胞迁移及侵袭能力及其机制研究[D]. 熊尚婉. 江苏大学, 2020(02)
- [4]CD44剪接变异体（CD44v）在肿瘤中的研究进展[J]. 冯凡,曹卫平,陈琦,朱小兰,许文林. 生物学杂志, 2017(01)
- [5]一群新的CD44highCD58high大肠癌细胞的干细胞特性鉴定及其分子机制研究[D]. 徐嵩. 浙江大学, 2015(10)
- [6]大豆黄酮、Mung、Gin和L08对人肝癌细胞的抑制作用[D]. 谢江涛. 郑州大学, 2013(04)
- [7]从腹腔灌洗液中分离胃癌干细胞的可行性及其意义[D]. 张岩松. 苏州大学, 2013(05)
- [8]P-gp和CD44v6在胃癌组织中表达及与预后的关系[J]. 关云艳,刘凯军,欧希龙,郭庆明. 肿瘤防治研究, 2009(11)
- [9]模拟CO2气腹在体外对胃癌细胞生长、凋亡和nm23H1、CD44v6表达的影响[J]. 张可,李中福,王子卫. 重庆医学, 2008(15)
- [10]乳腺癌患者外周血淋巴细胞和肿瘤组织CD44v6的表达及其临床意义[D]. 甘家兵. 南昌大学, 2008(01)