一、p53mRNA、bcl-2、bax蛋白在肺癌中的表达（论文文献综述）
李雪[1]（2021）在《PHLDB3、P53、Bax、Bcl-2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义》文中进行了进一步梳理目的:非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌最常见的类型,其发病率高,预后不良,且发生发展机制错综复杂。本研究主要通过检测非小细胞肺癌组织中pleckstrin同源样结构域家族B成员3（PHLDB3）、抑癌基因P53、凋亡促进因子Bax、凋亡抑制因子Bcl-2蛋白的表达,分析其相互关系及表达意义,以探究PHLDB3在非小细胞肺癌中的作用及可能的作用机制,拟为进一步探究PHLDB3在非小细胞肺癌中的具体调控机制奠定组织学基础、为非小细胞肺癌患者治疗的靶点选择提供参考依据。方法:选取108例非小细胞肺癌病例,收集其手术切除的非小细胞肺癌组织蜡块108例,并收集部分癌组织5cm以外的正常肺组织蜡块45例作为对照。用免疫组织化学技术检测PHLDB3、P53、Bax、Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌组织及邻近正常肺组织（对照组）中的表达情况,分析各蛋白表达与患者临床病理特征之间的关系,分析各蛋白表达之间的相互关系及各蛋白表达对非小细胞肺癌患者预后的影响。结果:1.PHLDB3、P53、Bax、Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况:PHLDB3在非小细胞肺癌组织中的阳性率为69.4%,在对照组中的阳性率为26.7%;P53在非小细胞肺癌组织中的阳性率为36.1%,在对照组中的阳性率为0.0%;Bax在非小细胞肺癌组织中的阳性率为38.9%,在对照组中的阳性率为80.0%;Bcl-2在非小细胞肺癌组织中的阳性率为82.4%,在对照组中的阳性率为26.7%。与对照组相比,在非小细胞肺癌组织中,PHLDB3表达更高,P53表达更高,Bax表达更低,Bcl-2表达更高（P<0.05）。2.非小细胞肺癌组织中,PHLDB3、P53、Bax、Bcl-2蛋白表达与患者临床病理特征之间的关系:PHLDB3表达与非小细胞肺癌患者的年龄、性别、肿瘤最大径、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关:年龄>60岁、男性、肿瘤最大径>3cm、分化程度为中/低分化、TNM分期为Ⅲ和Ⅳ期或伴淋巴结转移者,PHLDB3阳性率更高;P53表达与非小细胞肺癌患者的肿瘤最大径、吸烟史、分化程度及TNM分期有关:肿瘤最大径>3cm、有吸烟史、分化程度为中/低分化或TNM分期为Ⅲ和Ⅳ期者,P53阳性率更高;Bax表达与非小细胞肺癌患者的分化程度及淋巴结转移有关:分化程度为高分化或未见淋巴结转移者,Bax阳性率更高;Bcl-2表达与非小细胞肺癌患者的TNM分期及淋巴结转移有关:TNM分期为Ⅲ和Ⅳ期或伴淋巴结转移者,Bcl-2阳性率更高（P<0.05）。3.在非小细胞肺癌组织中,PHLDB3、P53、Bax、Bcl-2蛋白表达之间的相互关系:PHLDB3的表达与P53的表达呈正相关关系（r=0.258,P=0.007）、与Bax的表达呈负相关关系（r=-0.477,P<0.001）、与Bcl-2的表达呈正相关关系（r=0.650,P<0.001）;P53的表达与Bcl-2的表达呈正相关关系（r=0.339,P<0.001）;Bax的表达与Bcl-2的表达呈负相关关系（r=-0.509,P<0.001）。Bax在P53（+）PHLDB3（+）组及P53（-）PHLDB3（+）组的表达均显着低于其在P53（-）PHLDB3（-）组的表达（P<0.05）,而其在P53（+）PHLDB3（+）组的表达与其在P53（-）PHLDB3（+）组的表达差异无统计学意义（P>0.05）。Bcl-2在P53（+）PHLDB3（+）组及P53（-）PHLDB3（+）组的表达均显着高于其在P53（-）PHLDB3（-）组的表达（P<0.05）,而其在P53（+）PHLDB3（+）组的表达与其在P53（-）PHLDB3（+）组的表达差异无统计学意义（P>0.05）。4.PHLDB3、P53、Bax、Bcl-2蛋白表达与非小细胞肺癌患者预后的关系:在非小细胞肺癌中,PHLDB3阳性患者的总生存时间较PHLDB3阴性患者的生存时间短;P53阳性患者的总生存时间较P53阴性患者的生存时间短;Bcl-2阳性患者的总生存时间较Bcl-2阴性患者的生存时间短（P<0.05）。PHLDB3、P53、Bcl-2均是影响患者预后的因素。P53（+）PHLDB3（+）组及P53（-）PHLDB3（+）组患者的总生存时间均显着低于P53（-）PHLDB3（-）组患者的总生存时间（P<0.05）,而P53（+）PHLDB3（+）组患者的总生存时间与P53（-）PHLDB3（+）组患者的总生存时间相比差异无统计学意义（P>0.05）。5.单因素及多因素分析:PHLDB3和TNM分期是影响非小细胞肺癌患者预后的独立因素（P<0.05）。结论:1.PHLDB3、P53、Bax、Bcl-2可能参与非小细胞肺癌的发生发展;PHLDB3阳性提示非小细胞肺癌患者预后不良,PHLDB3可能是影响非小细胞肺癌患者预后的独立因素。2.在非小细胞肺癌组织中,PHLDB3表达与Bax表达成负相关、而与Bcl-2表达成正相关;P53表达与Bcl-2表达成正相关;PHLDB3、P53可能参与细胞的凋亡过程,从而影响非小细胞肺癌的发生发展。3.PHLDB3在非小细胞肺癌组织中的表达与P53有关,P53的突变可能导致PHLDB3的表达增加,P53可能是PHLDB3的上游调节因子之一。
高海霞[2]（2021）在《弥漫大B细胞淋巴瘤信号通路相关microRNA和蛋白质的筛选及功能研究》文中进行了进一步梳理目的:弥漫大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL）是成人最常见的B细胞淋巴瘤,经R-CHOP标准化疗后仍有30-40%的患者治疗欠佳短期内复发耐药甚至死亡,因此寻找新的药物靶点是提高DLBCL患者生存的迫切需要。本研究拟在微小RNA（microRNA,miRNA）、mRNA、蛋白质水平筛选和验证与DLBCL发生发展相关的可能关键因子及信号通路,并对重要信号通路相关的关键因子在细胞水平进一步进行功能研究,初步阐明人类种属（Homo sapiens,hsa）-miR-193a-3p靶向TCL1调控PI3K/AKT信号通路影响DLBCL细胞增殖、凋亡和周期的作用机制,为深入理解DLBCL的发生发展和提供新的治疗靶点奠定理论基础。方法:1)本研究选择新鲜冰冻人DLBCL组织为实验组、人淋巴结反应性增生（lymph node reactive hyperplasia,LRH）为对照组,应用miRNA表达谱芯片筛选差异mi RNA;对差异miRNA进行生物信息学分析,阐明差异mi RNA的靶基因及其生物学功能和富集的信号通路;对重要信号通路相关差异miRNA应用q RT-PCR验证其表达;2)本研究同样选择新鲜冰冻人DLBCL组织为实验组、人LRH为对照组,应用蛋白质组学筛选差异蛋白质;对差异蛋白质进行生物信息学分析,阐明其生物学功能和富集的信号通路;对重要信号通路相关差异蛋白质应用平行反应监测（Parallel reaction monitoring,PRM）和免疫组化验证其蛋白表达,并分析其蛋白表达与DLBCL患者临床病理特征和预后的相关性;将mi RNA芯片和蛋白质组学研究结果进行交叉分析,确定在细胞水平进行hsa-miR-193a-3p靶向TCL1调控PI3K/AKT信号通路影响DLBCL细胞增殖、凋亡和周期的机制研究;3)应用双荧光素酶报告基因检测hsa-mi R-193a-3p与TCL1的互作关系;选择人DLBCL细胞为实验组、正常人外周血B淋巴细胞为对照组,应用qRT-PCR检测hsa-mi R-193a-3p和TCL1的基因表达,并筛选后续实验DLBCL细胞株;将hsa-miR-193a-3p类似物（mimic）和抑制剂（inhibitor）、si RNA-TCL1、siRNA-TCL1+hsa-miR-193a-3p inhibitor分别转染DLBCL细胞,设立相应的阴性和空白对照,应用CCK8和流式观察DLBCL细胞增殖、凋亡和周期;并应用q RT-PCR和Western-blot检测DLBCL细胞中TCL1、PI3K/AKT信号通路重要调控因子AKT和磷酸化的AKT,细胞凋亡因子BCL-2和BAX的基因和蛋白表达。结果:1)本研究筛选出204个差异miRNA,54个上调,150个下调;差异miRNA预测到7522个靶基因;差异miRNA的靶基因主要富集在Pathway in cancers、MAPK、Focal adhesion、PI3K/AKT等信号通路;qRT-PCR验证PI3K/AKT信号通路相关差异miRNA发现在DLBCL中hsa-miR-193a-3p、hsa-miR-19b-3p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-490-5p的表达降低,hsa-miR-630的表达升高;2)本研究筛选出335个差异蛋白质,131个上调,204个下调;差异蛋白质主要富集在Pathway in cancers、PI3K/AKT、Alcoholism、Necroptosis等信号通路;PRM和免疫组化验证PI3K/AKT信号通路相关差异蛋白质发现在DLBCL中TCL1、HSP90、AKT、IKKβ的蛋白表达水平升高;生存分析发现TCL1蛋白高阳性表达是DLBCL患者短的总生存期和无进展生存期的独立影响因素;3)细胞水平证实TCL1是hsa-miR-193a-3p的靶基因;在DLBCL细胞中hsa-mi R-193a-3p的表达降低,而TCL1 mRNA的表达升高;hsa-miR-193a-3p在DLBCL中是一个肿瘤抑制因子,hsa-miR-193a-3p mimic使DLBCL中hsa-miR-193a-3p表达升高,其高表达使DLBCL细胞增殖降低,凋亡增加,细胞周期被阻滞在S期,DNA合成受阻,细胞在S期与后续G2/M、G0/G1期之间的转换被调控;hsa-miR-193a-3p inhibitor使DLBCL中hsa-miR-193a-3p表达降低,其低表达使DLBCL细胞增殖升高,凋亡降低,并可逆转mimic对细胞周期的调控作用;TCL1在DLBCL中是一个癌基因,TCL1-siRNA在DLBCL中可沉默TCL1的表达,沉默TCL1表达可抑制DLBCL细胞增殖、促进凋亡、细胞周期被阻滞在S期、并可抑制PI3K/AKT信号通路激活,但加入hsa-miR-193a-3p inhibitor能逆转siRNA-TCL1对PI3K/AKT信号通路的抑制效应。结论:应用miRNA表达谱芯片筛选出204个差异miRNA,54个上调,150个下调;应用蛋白质组学筛选出335个差异蛋白质,131个上调,204个下调;对已筛选重要信号通路即PI3K/AKT信号通路相关因子验证发现在DLBCL中hsa-miR-193a-3p的表达降低,TCL1的蛋白表达升高并且生存分析发现TCL1蛋白高阳性表达是DLBCL患者短的总生存期和无进展生存期的独立影响因素;hsa-miR-193a-3p通过靶基因TCL1实现对DLBCL细胞增殖、凋亡、周期等生物学行为的调控,hsa-miR-193a-3p inhibitor能逆转siRNA-TCL1对PI3K/AKT信号通路的抑制效应,进而影响DLBCL发生和进展。
郭强[3]（2020）在《孕激素和脂联素分子受体3抑制非小细胞肺癌生长作用及机制研究》文中认为目的:本研究通过检测孕激素和脂联素分子受体3（Progestin and adipoQ receptor 3,PAQR3）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达水平,分析其潜在的临床价值。构建上调和下调PAQR3表达的NSCLC稳转细胞模型以探究其在NSCLC进展中的功能和可能调节机制,旨在寻找新型的治疗靶点,以提高NSCLC患者的生存质量和远期预后。方法:1.临床意义分析:在UALCAN数据库中分析NSCLC中PAQR3 mRNA表达水平,探究其表达水平与NSCLC患者临床病理学特征之间的相关性。收取遵义医科大学附属医院胸外科60例NSCLC患者的癌组织及其癌旁5cm处正常肺组织,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western-Blot,WB）检测NSCLC患者的癌组织和配对癌旁正常肺组织中PAQR3 mRNA和蛋白表达水平。对60例NSCLC患者的临床资料进行整理,分析PAQR3 mRNA与NSCLC患者临床病理学特征之间的关系。结合PrognoScan和Kaplan-Meier Plotter数据库分析PAQR3 mRNA表达水平与NSCLC患者预后之间的相关性。2.体外功能研究:选取NSCLC A549和H1299细胞,采用慢病毒构建上调和干扰PAQR3基因表达的NSCLC稳转细胞株。分组:慢病毒过表达对照组（Vector）vs上调PAQR3基因表达组（PAQR3-OV）;干扰对照组（Si-NC）vs干扰PAQR3基因表达组（Si-PAQR3）。慢病毒转染NSCLC细胞24h时在荧光显微镜下观察转染效率,达到预期转染效率后更换不含慢病毒和嘌呤霉素的RPMI-1640完全培养液继续培养。在细胞传代时加入含嘌呤霉素（A549:2μmol/L和H1299:4μmol/L）的RPMI-1640完全培养液培养A549和H1299细胞筛选稳定细胞株。通过qRT-PCR和Western-Blot技术检测稳转细胞株中PAQR3表达水平明确模型是否构建成功。采用CCK-8、克隆形成实验和流式细胞术探究PAQR3对A549和H1299细胞增殖、克隆形成、周期和凋亡的影响。3.机制研究:在癌细胞系百科全书（Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE）中下载肺癌细胞基因表达数据,通过基因富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）PAQR3可能参与调节肺癌进展的机制。在已构建好的NSCLC A549和H1299稳转细胞株中,采取Western-Blot检测NF-κB（p65）、p53、p-p53和Bax蛋白的表达。结果:1.在UALCAN数据库NSCLC组织中PAQR3 mRNA表达水平明显升高,PAQR3 mRNA表达水平与NSCLC患者的组织学亚型和淋巴结转移相关（P<0.05）。然而,在60例临床NSCLC组织中PAQR3 mRNA和蛋白表达水平明显下降。PAQR3mRNA表达水平与NSCLC患者的肿瘤大小相关（P<0.05）。在PrognoScan和Kaplan-Meier Plotter数据库中发现上调PAQR3表达的肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）患者有更好的预后。2.体外功能研究发现,与慢病毒过表达对照组（Vector）相比,上调PAQR3基因表达水平明显可抑制NSCLC细胞增殖和克隆形成,阻碍细胞周期转变,并诱导细胞凋亡;相反,干扰PAQR3基因表达水平明显促进了NSCLC细胞增殖和克隆形成,促使细胞周期G1向S期转变,减少NSCLC细胞凋亡,差异均具有统计学意义（P<0.05）。3.GSEA发现PAQR3可能参与调节肺癌细胞周期、DNA复制、p53信号通路等信号通路。上调A549细胞中PAQR3表达可抑制NF-κB（p65）蛋白表达,促进p53蛋白、p53磷酸化及Bax蛋白表达水平升高。上调H1299细胞中PAQR3表达可抑制NF-κB蛋白表达,促进Bax蛋白表达,但对p53蛋白和p53磷酸化表达水平无影响。相反,干扰A549细胞中PAQR3表达可促进NF-κB蛋白表达,同时抑制p53蛋白、p53磷酸化及Bax蛋白表达水平。干扰H1299细胞中PAQR3表达可增强NF-κB蛋白表达,抑制Bax蛋白表达。结论:1.PAQR3 mRNA和蛋白在NSCLC组织中表达下降。PAQR3表达水平与NSCLC患者肿瘤大小相关,升高PAQR3 mRNA表达的LUAD患者倾向于更好的预后。2.PAQR3可能通过NF-κB/p53/Bax信号通路抑制NSCLC细胞生长。
宁贻崇[4]（2020）在《p53相互作用蛋白CCDC106和ZCCHC10在癌症中的作用及分子机制》文中进行了进一步梳理研究背景:p53功能障碍是导致肿瘤发生的重要原因。p53基因突变是p53功能失活的主要方式,在所有癌症病例中约有一半发生p53基因突变。在没有发生p53基因突变的肿瘤细胞中,p53正调控因子的表达下调或/和负调控因子的过度激活也可以导致野生型p53功能失活。本研究室前期发现CCDC106可以促进p53蛋白的降解,而ZCCHC10可以抑制p53蛋白的降解。本论文进一步对CCDC106和ZCCHC10在癌症组织中的表达及其对癌症发生发展的作用进行研究。研究方法:利用荧光定量PCR方法和Western blot实验分别检测基因的mRNA和蛋白质表达量。采用慢病毒系统构建基因过表达和干扰的稳定细胞株。采用免疫共沉淀法和GST-pull down检测蛋白相互作用。核质分离和免疫荧光染色检测蛋白亚细胞定位。磷酸化抗体检测蛋白质的磷酸化。MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,平板集落形成实验检测细胞增殖能力,伤口愈合实验检测细胞迁移能力,TransWell侵袭实验检测细胞侵袭能力。采用皮下移植瘤小鼠模型研究CCDC106或ZCCHC10对体内肿瘤生长的影响。采用尾静脉注射小鼠模型研究ZCCHC10对肿瘤转移的影响。研究结果:一、CCDC106在乳腺癌和宫颈癌中的作用及分子机制1、在含有野生型p53（wtp53）宫颈癌HeLa细胞和乳腺癌MCF7细胞中干扰CCDC106可以增强p53蛋白的稳定,促进细胞凋亡,抑制细胞存活、集落形成、迁移和侵袭。2、在含有wtp53的正常乳腺上皮HBL100和宫颈癌SiHa细胞中过表达CCDC106则促进p53蛋白的降解,抑制细胞凋亡,促进细胞存活、集落形成、迁移和侵袭。3、CCDC106对p53突变的宫颈癌和乳腺癌细胞（C33A和MDA-MB-231）的细胞存活、集落形成、迁移和侵袭没有显着影响。4、本研究室以前通过体外磷酸化实验发现CCDC106的Ser-130和Ser-147位点是蛋白激酶CK2的磷酸化位点。本文进一步证实在细胞中CK2确实可以在Ser-130和Ser-147这两个位点磷酸化CCDC106。将CCDC106的Ser-130突变为Ala,则CCDC106不能与p53蛋白相互作用;而Ser-147突变为Ala,则CCDC106不能定位于细胞核中,说明Ser-130和Ser-147位点磷酸化分别是CCDC106与p53相互作用和核定位磷酸化所必需的。5、将CCDC106的Ser-130和Ser-147都突变为Ala,或用CK2抑制剂CX-4945处理细胞,可以抑制CCDC106的磷酸化和促癌能力。6、在异种移植小鼠模型中,野生型CCDC106可以促进p53的降解和肿瘤生长,而突变型CCDC106则没有作用。7、在含有wtp53的癌细胞系中干扰CCDC106基因的表达,可以增加细胞对CX-4945的敏感性。二、ZCCHC10在肺癌中的作用及其分子机制1、通过对54对肺癌组织和癌旁组织中的ZCCHC10的表达分析,发现在肺腺癌组织中的ZCCHC10的表达水平低于相应的癌旁非癌组织。对癌症公共数据库的分析发现,癌组织中ZCCHC10的mRNA表达水平与患者生存率正相关。2、在含有wtp53的肺癌细胞中过表达ZCCHC10,显着抑制细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭和顺铂耐药,而在含有wtp53的正常肺细胞系Beas-2b中干扰ZCCCHC10则促进细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭和顺铂耐药。3、ZCCHC10对p53缺失的细胞（H358）或p53突变的细胞（H1437）的集落形成、增殖、迁移和侵袭没有影响。4、裸鼠皮下成瘤实验结果表明ZCCHC10过表达抑制肿瘤的生长,而裸鼠肿瘤转移模型实验结果表明ZCCHC10过表达抑制肿瘤的转移。5、免疫共沉淀证明野生型ZCCHC10蛋白能和p53蛋白相互作用,而突变其CCHC结构域,则不能与p53相互作用,说明ZCCHC10通过其CCHC结构域与p53发生作用。6、ZCCHC10抑制p53和MDM2之间的相互作用和MDM2介导的p53蛋白泛素化,从而增强p53蛋白的稳定性。7、p53抑制剂pifithrin-α减轻ZCCHC10过表达时对p53通路、细胞周期、细胞凋亡和上皮间质转换的影响,而p53激活剂Nutlin3可以反转ZCCHC10干扰引起的影响,说明ZCCHC10通过p53发挥作用。结论:1、在乳腺癌和宫颈癌中,CCDC106通过促进p53蛋白的泛素化和降解,发挥促癌作用。2、蛋白激酶CK2可以在Ser-130和Ser-147这两个位点磷酸化CCDC106,Ser-130和Ser-147位点的磷酸化分别是CCDC106与p53相互作用和核定位所必需的。3、在肺癌中,ZCCHC10通过抑制MDM2对p53蛋白的泛素化,增强p53蛋白的稳定性,从而抑制肺癌的进展和顺铂耐药性。
瞿静[5]（2020）在《肺癌靶向性丝素/ING4-IL-24双基因共表达腺病毒复合物》文中研究指明肺癌是威胁人类健康的重大疾病之一。恶性肿瘤的基因疗法因具有针对性强、毒副作用小、疗效好等优势而备受关注。生长抑制因子4（ING4）和白细胞介素-24（IL-24）基因能分别从细胞内、外两条途径抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。腺病毒作为基因传递载体能够高效地传递和表达目的基因,但因存在免疫原性风险、高滴度时的细胞毒性、对固有受体细胞的趋向性等不足,限制了其在临床的广泛应用。柞蚕丝素蛋白具有优异的生物相容性和低免疫原性,并且包含的大量极性氨基酸残基赋予其丰富的化学反应活性和修饰位点。为了进一步提高腺病毒作为ING4-IL-24双基因传递载体的感染效率,以减少其有效使用滴度,降低其毒副作用,同时为了保护腺病毒免受腺病毒血清抗体的中和,本课题研制一种新型的肺癌靶向性的阳离子化柞蚕丝素/ING4-IL-24双基因共表达腺病毒复合物。通过体外实验和动物实验,研究该复合物对肺癌细胞的靶向感染作用、抑制生长作用、促进凋亡作用,以及对正常组织细胞的毒性。以期使用较低滴度的腺病毒,达到有效的抑制肺癌效果,避免使用高滴度腺病毒的潜在毒副作用。为实现这一目标,本文采用低分子量聚乙烯亚胺对柞蚕丝素蛋白进行阳离子化改性,并在丝素蛋白的侧链接枝肺癌细胞特异性寡肽C9（CSNIDARAC）,用此肺癌细胞靶向的阳离子化柞蚕丝素包被ING4-IL-24双基因共表达腺病毒,获得肺癌靶向性丝素/ING4-IL-24双基因共表达复合物。体外研究复合物对肺癌细胞H460的靶向作用、感染效率、抑制增殖和诱导凋亡作用,体内研究复合物对小鼠H460肺癌移植瘤的生长抑制作用及抑癌机制,同时通过体外、体内实验,分析和评价复合物对正常细胞脐静脉内皮细胞HUVEC和正常组织的毒副作用。首先,构建ING4-IL-24双基因共表达腺病毒载体。将ING4-IL-24双基因共表达转移质粒与腺病毒骨架质粒同源重组后感染人胚肾细胞QBI-293A,多次扩增后获得ING4-IL-24双基因共表达腺病毒（Ad）。Western blotting和ELISA测试结果表明,腺病毒能介导外源性的ING4和IL-24基因在人胚肾细胞QBI-293A细胞中表达。其次,在碳二亚胺的介导下,使低分子量聚乙烯亚胺（PEI）的氨基与柞蚕丝素蛋白（ASF）的羧基偶联后生成酰胺键,获得阳离子化柞蚕丝素蛋白（CASF）。当参加反应的PEI占柞蚕丝素的质量百分比为4%时,改性后柞蚕丝素蛋白的表面Zeta电位达到+12.03 mV,接枝效率约为86.34%。接着,以3-（2-吡啶二硫）丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯作为交联剂,将肺癌细胞特异性寡肽C9以二硫键的形式接枝到阳离子化柞蚕丝素蛋白的侧链,制得肺癌细胞靶向性柞蚕丝素蛋白（CASF-C9）,实验结果表明,CASF-C9的表面Zeta电位较CASF有所下降。为了初步评价CASF-C9装载基因的能力及其生物学效应,先用CASF-C9包装质粒DNA（pDNA）,制备不同质量比的CASF-C9/pDNA复合物。实验结果显示,CASF-C9与pDNA质量比为64/2、128/2、256/2时,能够完全包裹住质粒DNA。CASF-C9/pDNA复合物转染肺癌细胞H460后表达绿色荧光的细胞数量和转染效率显着高于对照组CASF/pDNA复合物,并且接枝寡肽C9的量越高,表达荧光的细胞数量和基因转染效率越高,CASF-C9/pDNA复合物对H460细胞增殖的抑制作用也更显着。在此基础上,用CASF-C9依靠静电吸附作用包被腺病毒载体,制备肺癌靶向性丝素/ING4-IL-24双基因共表达腺病毒复合物CASF-C9/Ad。从形貌、表面Zeta电位和粒径分布的检测结果可知,复合物呈球形或类球形颗粒,其表面Zeta电位和粒径均随着包覆于腺病毒表面的CASF-C9浓度的增加而增大。对CASF-C9进行异硫氰酸荧光素标记,研究短肽C9对肺癌细胞H460的靶向识别作用。激光共聚焦显微镜观察和分析结果表明,接枝短肽C9的CASF-C9及复合物CASF-C9/Ad均能特异性识别并粘附至肺癌细胞H460的表面,提示复合物CASF-C9/Ad具有肺癌细胞靶向性,具有以较低滴度的复合物达到有效感染肺癌细胞的潜力。进一步,用CASF-C9/Ad复合物体外分别感染肺癌细胞H460和脐静脉内皮细胞HUVEC,检测荧光表达和感染效率。研究结果表明,H460细胞和HUVEC细胞感染复合物CASF-C9/Ad后的荧光表达强度和感染效率均显着高于对照组裸Ad。H460细胞感染复合物CASF-C9/Ad后的生长受到了明显的抑制,细胞存活率显着低于对照组裸Ad和CASF/Ad复合物。复合物CASF-C9/Ad中的目的基因ING4和IL-24均能在肺癌细胞H460中有效表达并诱导细胞凋亡。感染复合物CASF-C9/Ad的H460细胞凋亡率显着高于对照组裸Ad和CASF/Ad复合物。而与H460细胞完全不同,HUVEC细胞感染CASF-C9/Ad复合物后,其细胞形态和细胞增殖活力均未受到明显的影响。证明CASF-C9/Ad复合物对肺癌细胞具有明显的靶向性和抑制增殖、促进凋亡效应,而对正常细胞无明显毒性。最后,用ING4-IL-24双基因共表达CASF-C9/Ad复合物体内治疗小鼠H460肺癌移植瘤。肺癌移植瘤的体积变化、肿瘤重量、抑瘤率的检测结果证明,CASF-C9/Ad能显着抑制肺癌移植瘤的生长,抑瘤率显着高于对照组裸Ad和CASF/Ad复合物。经复合物CASF-C9/Ad治疗后的肿瘤组织出现大片坏死灶,肿瘤细胞崩解、胞核染色消失,肿瘤细胞发生肿胀,呈空泡化结构,细胞膜出现连续性破坏。经复合物CASF-C9/Ad治疗后的肿瘤组织坏死程度较对照组裸Ad和CASF/Ad复合物更显着。双基因共表达复合物CASF-C9/Ad能够将目的基因ING4和IL-24高效递送至肺癌细胞,通过下调Ki 67、Bcl-2的表达抑制肺癌细胞增殖;通过上调C Caspase-3、Bax的表达促进肺癌细胞凋亡;通过下调VEGF、CD31的表达阻断肿瘤血管新生,多途径实现对小鼠H460肺癌移植瘤的抑瘤效应。本文将肺癌细胞特异性的寡肽CSNIDARAC接枝到柞蚕丝素蛋白侧链,构建能靶向识别和感染肺癌细胞的阳离子化柞蚕丝素蛋白/ING4-IL-24双基因共表达腺病毒复合物CASF-C9/Ad。该复合物不仅能靶向、高效地将目的基因递送至肺癌细胞,减少腺病毒的有效使用滴度;也能屏蔽腺病毒与宿主的直接作用,保护腺病毒免受血清抗体的中和,降低腺病毒的免疫原性风险;同时对正常细胞无明显毒性。动物实验证明,复合物CASF-C9/Ad通过抑制肺癌细胞增殖、促进肺癌细胞凋亡、阻断肿瘤血管新生等多种途径实现抑瘤效应。
刘香佚[6]（2020）在《S4TdR/UVA对乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用及机制研究》文中提出乳腺癌是一种受雌性激素影响的高异质性恶性肿瘤疾病,发病率位居我国乃至全球女性癌症发病率第一位,且发病率呈逐年上升趋势,已成为危害全球女性身心健康的最大威胁之一。目前常见的乳腺癌治疗方法存在着创面大、靶向差、副作用明显、受适面窄、预后差和易复发等缺陷,常达不到最佳治疗效果。有研究表明四硫胸苷（4-thiothymidine,S4TdR）具有低毒性和弱诱变性等特点,当与长波长紫外光（UVA）联合作用时,可有选择性地破坏某些表皮类癌细胞的DNA,诱导细胞凋亡。这种具有前景的新兴光动力疗法是否可以应用与乳腺癌的治疗,目前尚未见相关研究报道。为探讨S4TdR/UVA联合作用对乳腺癌治疗的可行性,本论文选用人乳腺癌细胞系MCF-7为实验材料,通过体外暴露实验,检测S4TdR/UVA对MCF-7细胞活性及周期的影响,并对P53诱导的P53-Mdm2-P21和P53-Bax/B cl-2-Caspase 3两条通路进行定量分析,探究S4TdR/UVA联合作用对MCF-7活性影响的分子机制。细胞活性检测发现,10-5及10-6M浓度S4TdR与15KJ/m2 UVA协同作用,均可对由雌二醇（Estradiol,E2）引起的MCF-7细胞增殖产生极显着性的抑制作用,且10-6M的抑制效果更为明显。细胞周期的检测进一步证明,10-6M S4TdR/UVA对MCF-7的抑制作用可能是通过引起G1期细胞数增加和S期细胞数减少,进而影响细胞的复制过程所致。对凋亡相关分子的定量分析表明,10-6MS4TdR/UVA能够促进P53的表达,同时抑制P53的负反馈调节因子Mdm2的表达,并激活下游的P21,使其与P53构成细胞周期检查点,引起细胞周期阻滞;另外,P53还能激活下游的促凋亡蛋白Bax,并抑制其拮抗分子Bcl-2,通过上调Bax/Bcl-2的表达比例,激活下游凋亡执行蛋白Caspase-3,诱导细胞凋亡。本课题的研究首次通过体外实验证明了 S4TdR/UVA联合作用对乳腺癌细胞MCF-7具有显着性增殖抑制效果,为新型高靶向抗肿瘤光敏剂的开发提供了基础研究数据,为阐明S4TdR/UVA对乳腺癌细胞靶向治疗的分子机制提供了依据。
李亚[7]（2020）在《新加良附方调控miR-34a/SIRT1/p53及Caspase凋亡通路抑制胃癌的机制研究》文中研究表明我国是胃癌大国,中西医结合治疗是我国胃癌综合治疗的独特模式。临床实践证实采用新加良附方（高良姜、香附、穿山龙）联合化疗针对进展期胃癌较单纯化疗具有更高的临床缓解率和更优的生活质量。机制研究发现新加良附方抗胃癌作用与调控凋亡相关基因表达有关,但其上游调控机制尚未明确。基于前期基础,本研究拟从microRNA角度,深入探讨新加良附方及穿山龙主要成分薯蓣皂苷元对miR-34a/SIRT1/p53通路及miR-34a凋亡相关靶基因的调控作用和对凋亡信号通路的激活作用,明确新加良附方及薯蓣皂苷元的作用机制,为新加良附方治疗胃癌提供基础研究依据。目的通过体内外实验明确新加良附方及成分薯蓣皂苷元对人胃癌细胞功能的抑制作用,基于miR-34a/SIRT1/p53及Caspase凋亡通路,明确新加良附方及薯蓣皂苷元抗胃癌作用机制。方法1.新加良附方及薯蓣皂苷元抑制胃癌细胞功能作用及机制研究①新加良附方及薯蓣皂苷元抑制人胃癌细胞功能实验:CCK-8实验检测新加良附方及薯蓣皂苷元抑制胃癌细胞增殖的作用,流式细胞术检测新加良附方及薯蓣皂苷元对胃癌细胞周期及凋亡的调控作用,划痕实验检测新加良附方抑制胃癌细胞迁移作用;②新加良附方、薯蓣皂苷元调控miR-34a作用:qPCR检测正常胃黏膜上皮细胞及胃癌细胞miR-34a表达,慢病毒感染构建过表达mi R-34a的胃癌HGC-27细胞,CCK-8方法检测过表达miR-34a胃癌HGC-27细胞增殖功能,划痕实验检测过表达mi R-34a胃癌细胞迁移能力,并通过qPCR方法检测新加良附方、薯蓣皂苷元对miR-34a基因水平影响;③新加良附方、薯蓣皂苷元调控miR-34a抗胃癌作用机制研究:qPCR方法检测过表达miR-34a后HGC-27细胞miR-34a/SIRTl/p53通路及miR-34a靶基因表达水平,qPCR方法检测新加良附方、薯蓣皂苷元对miR-34a/SIRT1/p53通路、miR-34a靶基因及Caspase凋亡通路的作用,Western blot检测新加良附方、薯蓣皂苷元对Caspase凋亡通路作用。2.新加良附方及薯蓣皂苷元对裸鼠胃癌移植瘤抑制作用及机制研究BSP方法检测胃癌细胞miR-34a甲基化水平,并构建HGC-27胃癌细胞荷瘤小鼠模型,设正常对照组、模型组、新加良附方中剂量组、新加良附方高剂量组、薯蓣皂苷元组、5-Aza-CdR组、中剂量联合组及高剂量联合组,药物干预18天,观察裸鼠一般状态;测量移植瘤长短径,计算瘤体积和抑瘤率,观察裸鼠生存期;qPCR方法检测miR-34a表达情况;Western blot方法检测miR-34a/SIRT1/p53相关蛋白表达及Caspase凋亡通路情况。结果1.新加良附方及薯蓣皂苷元抑制胃癌细胞功能作用及机制研究新加良附方抑制人胃癌细胞功能实验:新加良附方呈浓度及时间依赖性地抑制HGC-27、MGC80-3及AGS细胞增殖;新加良附方提高G1期HGC-27细胞,降低G2期细胞;新加良附方可诱导HGC-27及MGC80-3细胞凋亡,其中诱导HGC-27细胞凋亡作用显着;与对照组比较,新加良附方组除24h 4mg/mL浓度外,其余各组均可抑制胃癌HGC-27细胞迁移功能,作用呈时间及浓度依赖性;新加良附方可显着抑制MGC80-3细胞迁移功能,作用呈时间依赖性,差异有统计学意义;各浓度新加良附方24h及48h均可抑制AGS细胞迁移;薯蓣皂苷元抑制人胃癌细胞功能实验:薯蓣皂苷元呈时间及浓度依赖性地抑制胃癌HGC-27、MGC80-3及AGS细胞增殖作用,差异有统计学意义;薯蓣皂苷元干预后胃癌细胞周期无明显改变;薯蓣皂苷元可诱导HGC-27及MGC80-3细胞凋亡,其中诱导HGC-27细胞凋亡作用显着;新加良附方及薯蓣皂苷元调控miR-34a作用:HGC-27、MGC80-3及AGS细胞中miR-34a相对表达量显着低于正常细胞GES-1,p<0.05;与阴性对照组相比较,过表达miR-34a后,HGC-27细胞增殖能力受到显着抑制,并可显着抑制其迁移能力;新加良附方及薯蓣皂苷元干预后,HGC-27及AGS细胞miR-34a表达水平升高,p<0.01;新加良附方及薯蓣皂苷元调控miR-34a抗胃癌作用机制研究:过表达miR-34a显着上调p53并下调SIRT1表达水平,可提高Bax及Caspase-3 mRNA表达水平,降低Bcl-2及Survivin的mRNA表达水平;新加良附方及薯蓣皂苷元干预可提高p53表达,降低SIRT1表达水平,并可上调Bax及Caspase-3的mRNA表达水平,降低Bcl-2及Survivin的mRNA表达水平,p<0.01,差异有统计学意义;Z-VAD-FMK可降低新加良附方及薯蓣皂苷元诱导的HGC-27细胞凋亡;新加良附方作用后可降低Caspase-9、Caspase-3前体水平,升高活化Caspase-3的表达水平;2.新加良附方及薯蓣皂苷元对裸鼠胃癌移植瘤抑制作用及机制研究胃癌细胞HGC-27在miR-34a各位点甲基化水平均较高,选取HGC-27细胞构建胃癌荷瘤小鼠模型,药物干预后观察到新加良附方中剂量组、新加良附方高剂量组、薯蓣皂苷元组及中剂量联合组、高剂量联合组裸鼠状态较好,反应灵敏,活动及饮食、饮水量正常,5-Aza-CdR组裸鼠一般状态较差。5-Aza-CdR组裸鼠体重于实验给药第8天后逐渐下降,第11天其体重低于新加良附方高剂量组,差异有统计学意义,第15天,其体重低于模型组、新加良附方高剂量组、薯蓣皂苷元组及高剂量联合组,p<0.05,第18天,其体重低于其余各组,p<0.05,差异有统计学意义。5-Aza-CdR组抑瘤率为32.08%,与模型组比较,p>0.05,差异无统计学意义,中剂量联合组抑瘤率为35.00%,高剂量联合组抑瘤率为37.18%,与模型组相比较,p<0.05,差异有统计学意义。模型组平均生存时间为46.33±10.50天,新加良附方中剂量组、新加良附方高剂量组、薯蓣皂苷元组、中剂量联合组及高剂量联合组裸鼠均未出现死亡现象,平均生存时间为57.00±0.00天,具有延长荷瘤裸鼠生存时间的趋势,5-Aza-CdR组裸鼠平均生存时间为40.33±7.37天,生存时间较模型组短。除新加良附方中剂量组外,其余各治疗组均可提高胃癌miR-34a表达,以联合组作用最为显着;新加良附方中剂量、高剂量、薯蓣皂苷元及高剂量联合组均可显着增加p53蛋白的表达,且药物干预各组均可显着抑制SIRT1 蛋白的表达,可降低 Bcl-2、Survivin 表达,并提高 Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 及 Caspase-3 底物 Cleaved PARP 蛋白的表达。结论1.miR-34a表达水平异常与胃癌发生密切相关;2.新加良附方可抑制胃癌细胞增殖及迁移、调节细胞周期、诱导凋亡,其成分薯蓣皂苷元可抑制胃癌细胞增殖,并诱导胃癌细胞凋亡,机制可能与调控miR-34a/SIRT1/p53通路、miR-34a凋亡相关靶基因及激活Caspase凋亡通路相关;3.新加良附方联合5-Aza-CdR可抑制胃癌裸鼠移植瘤生长,并可改善裸鼠一般状态,有维持体重、延长其生存时间的趋势,机制可能与调控miR-34a/SIRT1/p53通路、miR-34a凋亡相关靶蛋白及Caspase凋亡信号通路相关。
童琴[8]（2020）在《MYCN调控HES1通过凋亡途径参与小细胞肺癌化疗耐药的研究》文中提出研究背景肺癌是当今世界严重危害人类健康的恶性肿瘤,已成为我国癌症相关死亡的首要原因。小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）约占所有肺癌的13%-15%,具有高度侵袭性,生存期短,预后极差。尽管小细胞肺癌最初对化疗敏感,但大多数患者会迅速产生耐药性,从而导致化疗失败。因此,充分阐明小细胞肺癌耐药性的分子机制对于提高一线化疗疗效和延长患者的生存有至关重要的意义。研究目的课题组前期利用基因表达谱芯片比较分析小细胞肺癌耐药细胞（H69AR）和敏感细胞（H69）间基因表达差异,发现耐药细胞株中MYCN的表达显着高于敏感细胞株（2.3倍）,提示MYCN可能参与了 SCLC化疗耐药。本课题通过体外细胞和体内动物实验进一步明确MYCN在SCLC化疗耐药中的作用;通过转录组测序和生物信息分析寻找MYCN的下游信号分子,探讨MYCN参与SCLC化疗耐药的分子机制,为下一步开展逆转SCLC化疗耐药的研究提供实验依据。研究方法及结果1.MYCN与小细胞肺癌多药耐药相关（1）siRNA下调细胞中的MYCN,CCK8结果显示在MYCN下调的细胞中,化疗药物的IC50值明显降低,药物的敏感性显着增加。（2）转染过表达质粒上调细胞中的MYCN,CCK8结果显示在MYCN上调的细胞中,化疗药物的IC50值明显增加,药物的敏感性显着降低。（3）构建慢病毒稳转细胞株后,进行裸鼠皮下成瘤实验:下调MYCN可以减缓瘤体的增长速度,抑制瘤体的体积,增加化疗敏感性;上调MYCN可以促进瘤体的增长速度,增加瘤体的体积,减弱化疗敏感性。2.MYCN通过影响细胞凋亡参与小细胞肺癌化疗耐药（1）在MYCN下调的细胞株中加入化疗药物,流式检测提示小细胞肺癌细胞早期凋亡率明显增加;Western Blot显示BAX表达增加,Bcl-2表达减少。（2）在MYCN上调的细胞株中加入化疗药物,流式检测提示小细胞肺癌细胞早期凋亡率明显下降;Western Blot显示BAX表达减少,Bcl-2表达增加。3.MYCN直接结合于HES1启动子区,激活Notch通路（1）经转录组测序和生物信息分析,发现Notch通路可能受MYCN的调控。经Western Blot验证,该通路上的NOTCH1,JAG2,HES1与MYCN的表达呈正相关。（2）CHIP-qPCR实验和荧光素酶实验证实MYCN可结合在HES1的启动子区域,并促进其转录。4.HES1参与MYCN介导的小细胞肺癌多药耐药（1）用siRNA干扰HES1的表达,CCK8结果显示化疗药物的IC50值明显下降,药物敏感性显着增高。（2）在MYCN上调的细胞株中用Notch通路抑制剂FLI-06抑制HES1活性,可以挽救MYCN上调导致的耐药性升高。（3）裸鼠皮下成瘤实验:FLI-06联合化疗组皮下成瘤的体积较化疗组及FLI-06组小,增长速率较化疗组及FLI-06组慢。5.MYCN与小细胞肺癌患者的耐药和生存相关（1）免疫组化技术分析小细胞肺癌患者肿瘤组织标本,化疗耐药组中MYCN的阳性表达率明显高于化疗敏感组,且MYCN和HES1表达呈正相关。（2）生存分析提示MYCN高表达患者的生存时间较低表达患者短。结论1.MYCN与小细胞肺癌化疗耐药呈正相关。2.MYCN通过影响凋亡参与小细胞肺癌化疗耐药。3.MYCN调控Notch通路,并可直接结合在HES1启动子区域,促进其转录。4.HES1与MYCN介导的小细胞肺癌化疗耐药相关。5.化疗耐药组中MYCN的阳性表达率明显高于化疗敏感组,MYCN高表达患者的生存时间短,临床预后差。
吴宇[9]（2020）在《BRMS1在甲状腺癌中的机制研究》文中提出目的:甲状腺癌（thyroid carcinoma,TC）是目前内分泌系统中发病率最高的恶性肿瘤。绝大多数分化型甲状腺癌（differentiated thyroid cancer,DTC）患者预后良好,但仍有少数患者出现复发或疾病进展,这部分患者的预后仍然不理想。而甲状腺未分化癌（anaplastic thyroid cancer,ATC）是甲状腺癌中较罕见的类型,仅占1-2%;然而ATC的死亡率约为100%,是最具侵袭性的肿瘤之一。此种病理分型非常罕见,因此尚未出现公认的最佳治疗策略。为了能制定有效的治疗措施,我们急需了解甲状腺癌的分子机制以及预测影响患者预后的指标。乳腺癌转移抑制因子1（Breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1）位于染色体11q13,是一种转移抑制基因。多项研究表明BRMS1蛋白的表达是预测多种癌症患者预后的一个生物标志,其表达缺失在肿瘤的进展中起着重要的作用。尽管如此,BRMS1蛋白在甲状腺癌中调控的信号通路和其预后价值尚不明确。本研究的目的是探究BRMS1蛋白表达对甲状腺癌预后的影响以及受其影响的下游信号通路。方法:免疫组化染色和免疫印记分析分化型甲状腺癌组织标本以及甲状腺未分化癌组织标本取自天津医科大学肿瘤医院的手术患者。以185例分化型甲状腺癌以及24例ATC组织标本为对象进行免疫组化实验。实验结果使用卡方检验、多因素回归分析、Kaplan-Meier分析等分析方法分析BRMS1蛋白表达与患者预后及临床病理特点之间的关系。以免疫印迹分析各细胞系中蛋白的表达水平。细胞培养和细胞学实验人正常甲状腺细胞系N9、分化型甲状腺癌细胞系TPC-1、BCPAP、K1、IHH4以及甲状腺未分化癌细胞系8305C、8505C在含有10%FBS的RPMI1640培养基中培养,甲状腺未分化癌细胞系CAL-62细胞在含有10%FBS的DMEM中培养。为了研究BRMS1蛋白在ATC进展中的作用,以及缝隙连接蛋白43（connexin43,CX43）是否是下游机制的关键,本课题使用si RNA敲低BRMS1蛋白和CX43蛋白的表达,转染过表达BRMS1质粒构建BRMS1过表达细胞系。以细胞单克隆形成实验、迁移实验、侵袭实验以及增殖实验检测细胞生物学行为的变化。以流式细胞术检测细胞凋亡。动物实验4-6周龄雌性BALB/C裸鼠（Charles River Laboratories,中国北京）皮下注射2×106对照细胞或BRMS1过表达CAL-62细胞悬液。每天测量肿瘤直径,在肿瘤摘除后称重,以福尔马林固定,放置过夜后制备蜡块,切片后进行免疫组化分析。数据分析使用SPSSv22.0（IBM,NY,USA）或Graph Pad Prism v6.02（Graph Pad软件,La Jolla,CA）进行统计分析。实验结果至少重复三次,取平均值±标准差。用独立样本t检验计算不同治疗组之间的P值。只有P<0.05认为差异存在统计学意义。结果:BRMS1与甲状腺癌患者预后相关对DTC以及ATC组织样本进行免疫组织化学染色,发现BRMS1蛋白在ATC中的表达明显低于DTC。免疫印迹显示BRMS1蛋白在各细胞系中的表达符合上述结果。在ATC样本中,BRMS1蛋白高表达者预后显着优于低表达者。在DTC中,BRMS1蛋白低表达与侵袭性临床病理特点相关。体外实验证实BRMS1表达水平影响ATC细胞进展本研究在ATC细胞系中敲低BRMS1蛋白表达,并检测CX43蛋白及P53蛋白的表达水平,发现CX43蛋白和P53蛋白的表达明显下调。检测凋亡相关蛋白后发现,凋亡抑制蛋白Bcl2的表达水平明显升高,而促细胞凋亡蛋白Bax的表达水平则是显着减少。以si RNA敲低BRMS1蛋白后,8505C细胞系的克隆形成、迁移以及增殖能力显着增强。而在CAL-62中过表达BRMS1蛋白后可显着上调CX43蛋白及P53蛋白表达,促进细胞凋亡,并抑制CAL-62细胞的增殖和迁移能力。接下来我们进行了功能回复验证,在过表达BRMS1蛋白的CAL-62的细胞中用si RNA敲低CX43蛋白的表达。随着P53蛋白、Bax蛋白表达的回复,细胞克隆形成、迁移和增殖能力增加,细胞的凋亡率下降。生物信息学分析分析及体内实验证实BRMS1蛋白抑制ATC细胞进展本研究应用线上分析工具GCBI（https://www.gcbi.com.cn/gcanalyze/html/gen eradar/index）,绘制了BRMS1基因报道次数最多的前20种疾病的柱状图,并对BRMS1基因在不同癌种中的表达概况以及BRMS1、CX43（GJA1）、P53之间的互作网络进行分析。本研究应用线上分析工具TIMER（https://cistrome.shinya pps.io/timer/）进行分析,发现BRMS1蛋白表达水平明显与甲状腺癌预后相关。体内实验证明过表达BRMS1蛋白可显着降低小鼠肿瘤生长。与对照组相比,B RMS1蛋白过表达组肿瘤组织CX43蛋白表达增加,细胞凋亡信号显着增强。结论:BRMS1蛋白表达水平与甲状腺癌患者预后显着相关,低表达者预后不良,有望成为预测甲状腺癌预后的有效指标。BRMS1蛋白通过CX43蛋白调控P53蛋白表达,促进细胞凋亡和抑制细胞增殖,从而抑制肿瘤进展。BRMS1蛋白表达减少是甲状腺癌进展的重要病理机制之一。
刘淑娟[10]（2020）在《miR-486靶向SRSF3对奶山羊卵巢颗粒细胞增殖及凋亡调控作用的研究》文中提出Micro RNAs是一类非编码RNA,在生物体内广泛表达,并且参与调控机体内细胞增殖,凋亡,周期等过程。课题组前期对产单羔和多羔的关中奶山羊卵巢进行高通量测序研究,筛选出产单羔山羊卵巢中差异高表达的mi R-486。生物信息分析表明,mi R-486可能参与调控奶山羊卵泡的生长与发育,影响卵泡闭锁的进程。奶山羊卵巢内卵泡的闭锁常伴随着卵泡壁层颗粒细胞的凋亡。然而,mi R-486调控奶山羊的卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的分子机制尚不清楚。本研究以关中奶山羊卵巢颗粒细胞为研究对象,筛选出mi R-486的靶基因丝氨酸精氨酸富集的剪接因子3（SRSF3）,通过构建SRSF3的过表达载体（pc-SRSF3）及合成SRSF3的干扰RNA（si-SRSF3）。利用CCK-8,Ed U,细胞流式,RT-q PCR,Western blot的方法,探究mi R-486及其靶基因SRSF3对奶山羊卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的调控作用。主要获得的研究结果如下:1.mi R-486抑制奶山羊卵巢颗粒细胞的增殖,促进其凋亡通过RT-q PCR检测mi R-486在山羊卵巢,乳腺,子宫,垂体,肾,心,肺,肝,肠9个组织中的表达水平,结果显示,mi R-486在各组织中均有表达,其中肺的表达量最高,卵巢中也有较高表达。合成mimic NC,mi R-486 mimic,Inhibitor NC,mi R-486inhibitor,并将其转染至颗粒细胞。通过CCK8,Ed U,流式细胞法检测mi R-486对颗粒细胞的调控作用,结果表明,mi R-486显着抑制颗粒细胞的增殖,促进细胞凋亡。进一步通过RT-q PCR,Western blot检测发现mi R-486显着抑制细胞增殖相关通路蛋白PI3K、AKT和m TOR蛋白的磷酸化水平;此外,mi R-486显着促进凋亡相关基因BAX,P53,Caspase-3的表达,下调BCL-2的表达。以上结果表明,mi R-486通过PI3K/AKT/m TOR通路调控卵巢颗粒细胞的增殖,激活BAX,P53,Caspase-3及BCL-2的表达促进细胞凋亡。2.mi R-486靶向调控SRSF3的表达通过Targetscan预测发现SRSF3的3’UTR区包含mi R-486种子序列的靶位点,构建包含Xho I和Not I酶切位点的野生型和突变型双荧光素酶报告载体,在HEK293T细胞中验证mi R-486与SRSF3的靶向关系。结果显示,mi R-486显着抑制野生型载体的荧光素酶活性,而突变型载体的荧光素酶活性无显着变化。RT-q PCR,Western blot进一步检测发现mi R-486显着抑制颗粒细胞内SRSF3的表达。以上研究结果表明,mi R-486与SRSF3的3’UTR区的靶位点特异性结合,并且负调控SRSF3的表达。3.SRSF3促进奶山羊卵巢颗粒细胞的增殖,抑制其凋亡SRSF3在山羊卵巢,乳腺,子宫,垂体,肾,心,肺,肝,肠共9个组织中均有表达。其中子宫中的表达量最高,卵巢中的表达量次之,而在心、肺、肝、肠中的表达较低。通过NCBI预测山羊中SRSF3基因的CDS全长为495bp。构建包含Bam HI和Eco RI酶切位点的SRSF3 CDS全长序列的过表达载体pc-SRSF3以及合成SRSF3基因的干扰RNA,即si-SRSF3。RT-q PCR,Western blot检测结果显示pc-SRSF3显着促进颗粒细胞内SRSF3的表达,而si-SRSF3显着抑制颗粒细胞内SRSF3的表达。通过CCK8,Ed U,流式细胞法检测结果显示,pc-SRSF3显着促进颗粒细胞的增殖,抑制其凋亡;而下调SRSF3的表达则促进细胞凋亡,抑制其增殖。此外,上调SRSF3的表达显着抑制BAX,P53,Caspase-3的表达,促进BCL-2的表达。而下调SRSF3的表达则结果相反。4.mi R-486靶向SRSF3调控奶山羊卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡通过CCK8,Ed U,流式细胞法检测结果发现,与mi R-486 mimic相比,共mi R-486mimic和pc-SRSF3共转染组显着恢复了mi R-486 mimic对颗粒细胞活力的抑制作用,并且增加了Ed U阳性细胞的数目;此外,mi R-486 mimic与pc-SRSF3共转染抑制了mi R-486 mimic促进颗粒细胞凋亡的作用,降低了mi R-486诱导BAX,Caspase-3表达的上调作用,显着提高了BCL-2的表达和BCL-2/BAX的蛋白表达比率,但P53的表达几乎保持不变。尽管mi R-486 inhibitor和si-SRSF3共转染组结果与mi R-486 mimic和pc-SRSF3共转染组一致。但是,与mi R-486 inhibitor相比,mi R-486 inhibitor和si-SRSF3共转染组显着上调P53的表达。综上所述,mi R-486通过负调控靶基因SRSF3的表达促进颗粒细胞的凋亡,抑制颗粒细胞的活力与增殖,该结果为进一步探究mi R-486调控卵泡发育和闭锁的机制提供一定的试验依据。
二、p53mRNA、bcl-2、bax蛋白在肺癌中的表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、p53mRNA、bcl-2、bax蛋白在肺癌中的表达（论文提纲范文）
（1）PHLDB3、P53、Bax、Bcl-2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| PHLD与肿瘤 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（2）弥漫大B细胞淋巴瘤信号通路相关microRNA和蛋白质的筛选及功能研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分: 弥漫大B细胞淋巴瘤差异microRNA的筛选及验证 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分: 弥漫大B细胞淋巴瘤差异蛋白质的筛选及验证 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分: hsa-miR-193a-3p靶向TCL1 调控PI3K/AKT信号通路影响弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和周期的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 TCL1 的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术成果 |
| 个人简历 |
| 新疆医科大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
（3）孕激素和脂联素分子受体3抑制非小细胞肺癌生长作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 PAQR3 在NSCLC中的表达及其临床意义分析 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 PAQR3 通过NF-κB/p53/Bax信号通路抑制NSCLCA549和H1299细胞体外生长 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）p53相互作用蛋白CCDC106和ZCCHC10在癌症中的作用及分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 p53作为转录因子发挥抑癌功能 |
| 1.1.1 p53蛋白的结构 |
| 1.1.2 p53调控细胞周期和凋亡 |
| 1.1.3 p53抑制肿瘤细胞侵袭和转移 |
| 1.2 p53基因突变是癌症中最常见的突变 |
| 1.2.1 p53突变的热点和频率 |
| 1.2.2 突变对p53功能的影响 |
| 1.3 MDM2介导p53泛素化是野生型p53失活的主要因素 |
| 1.3.1 p53蛋白质的泛素化主要被MDM2调控 |
| 1.3.2 调控p53泛素化降解的其它E3连接酶 |
| 1.3.3 调控p53去泛素化的相关途径 |
| 1.3.4 和p53泛素化降解有关的蛋白 |
| 1.4 本论文的研究思路和研究意义 |
| 第二章 CCDC106在乳腺癌和宫颈癌中的作用及分子机制 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.1.1 细胞株和菌株 |
| 2.2.1.2 载体和工具酶 |
| 2.2.1.3 主要试剂与试剂盒 |
| 2.2.1.4 抗体 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.2.1 细胞培养和转染 |
| 2.2.2.2 质粒构建 |
| 2.2.2.3 免疫共沉淀实验 |
| 2.2.2.4 蛋白质印迹(Western blotting) |
| 2.2.2.5 慢病毒感染及稳定细胞株筛选 |
| 2.2.2.6 细胞计数法 |
| 2.2.2.7 细胞增殖测定(MTT实验) |
| 2.2.2.8 克隆形成实验 |
| 2.2.2.9 细胞划痕实验 |
| 2.2.2.10 Trans Well法检测细胞侵袭能力 |
| 2.2.2.11 裸鼠皮下成瘤实验 |
| 2.2.2.12 RNA抽提、反转录及荧光定量PCR实验 |
| 2.2.2.13 药物敏感性实验 |
| 2.2.2.14 免疫荧光染色 |
| 2.2.2.15 原核融合蛋GST-p53的获得 |
| 2.2.2.16 细胞凋亡分析 |
| 2.2.2.17 核质分离 |
| 2.2.2.18 统计学分析应用 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 干扰CCDC106 可稳定p53,并抑制具有wtp53 的癌细胞的生长、迁移和侵袭 |
| 2.3.2 蛋白激酶CK2 磷酸化CCDC106 |
| 2.3.3 CCDC106在S130和S147 位点的磷酸化是与p53 相互作用和CCDC106定位所必需的 |
| 2.3.4 抑制CCDC106的磷酸化可减弱其对p53蛋白的降解 |
| 2.3.5 抑制CCDC106 磷酸化可以抑制CCDC106 的促癌功能 |
| 2.3.6 CCDC106 增加具有wtp53 的癌细胞对CX-4945 的耐药性 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 ZCCHC10在肺癌中的作用及分子机制 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.1.1 细胞株和菌株 |
| 3.2.1.2 肺癌临床样本 |
| 3.2.1.3 化学试剂和抗体 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.2.1 生物信息学分析 |
| 3.2.2.2 质粒构建 |
| 3.2.2.3 慢病毒感染和稳定细胞株构建 |
| 3.2.2.4 细胞培养和转染 |
| 3.2.2.5 免疫共沉淀实验 |
| 3.2.2.6 蛋白质印迹(Western blotting) |
| 3.2.2.7 细胞计数法 |
| 3.2.2.8 细胞增殖测定(MTT实验) |
| 3.2.2.9 克隆形成实验 |
| 3.2.2.10 细胞划痕实验 |
| 3.2.2.11 Trans Well法检测细胞侵袭能力 |
| 3.2.2.12 裸鼠皮下成瘤实验 |
| 3.2.2.13 RNA抽提、反转录及荧光定量PCR实验 |
| 3.2.2.14 药物敏感性实验 |
| 3.2.2.15 免疫荧光染色 |
| 3.2.2.16 细胞凋亡分析 |
| 3.2.2.17 细胞周期分析 |
| 3.2.2.18 裸鼠肿瘤转移实验 |
| 3.2.2.20 组织切片制作以及苏木精、伊红染色 |
| 3.2.2.21 免疫组化实验 |
| 3.2.2.22 荧光素酶报告基因实验 |
| 3.2.2.23 泛素化分析 |
| 3.2.2.24 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 ZCCHC10在LUAD中表达下调 |
| 3.3.2 ZCCHC10 抑制含有wtp53 的肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭 |
| 3.3.3 ZCCHC10在异种移植小鼠模型中抑制肿瘤生长和转移 |
| 3.3.4 ZCCHC10 通过诱导p53 增强肺癌细胞对顺铂的敏感性 |
| 3.3.5 ZCCHC10与p53 相互作用并稳定p53 |
| 3.3.6 ZCCHC10 通过阻断MDM2与p53 的相互作用来抑制MDM2介导的p53泛素化 |
| 3.3.7 ZCCHC10 通过促进p53 的抑癌功能发挥作用 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 全文结论和研究展望 |
| 4.1 全文结论 |
| 4.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 中英文缩写表 |
| 攻读学位期间科研成果 |
| 致谢 |
（5）肺癌靶向性丝素/ING4-IL-24双基因共表达腺病毒复合物（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 肺癌抑制基因 |
| 1.2 ING4及IL-24基因的抑癌作用 |
| 1.2.1 ING4基因 |
| 1.2.2 IL-24基因 |
| 1.2.3 ING4及IL-24双基因协同作用 |
| 1.3 ING4及IL-24基因的传递载体 |
| 1.4 腺病毒载体 |
| 1.4.1 腺病毒性质 |
| 1.4.2 腺病毒载体的修饰 |
| 1.5 柞蚕丝素蛋白 |
| 1.5.1 柞蚕丝素蛋白的性质 |
| 1.5.2 柞蚕丝素蛋白应用于基因传递载体 |
| 1.5.3 柞蚕丝素蛋白的阳离子化修饰 |
| 1.6 肺癌细胞的靶向配体 |
| 1.6.1 靶向分子 |
| 1.6.2 靶向肽 |
| 1.7 本文的研究目的及内容 |
| 第二章 ING4-IL-24双基因共表达腺病毒的构建及鉴定 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 溶液、卡那板及凝胶的配制 |
| 2.2.2 双基因重组转移质粒的扩增 |
| 2.2.3 双基因重组转移质粒的PCR鉴定 |
| 2.2.4 同源重组腺病毒质粒的构建 |
| 2.2.5 双基因共表达同源重组腺病毒的包装和扩增 |
| 2.2.6 双基因共表达腺病毒的效价 |
| 2.2.7 双基因共表达腺病毒中ING4基因的表达 |
| 2.2.8 双基因共表达腺病毒中IL-24基因的表达 |
| 2.2.9 数据统计分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 双基因共表达质粒的鉴定 |
| 2.3.2 同源重组腺病毒的构建和鉴定 |
| 2.3.3 腺病毒的包装和扩增 |
| 2.3.4 鉴定同源重组腺病毒中双基因的表达 |
| 2.4 本章结论 |
| 第三章 柞蚕丝素蛋白的阳离子化改性 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 溶液的配制 |
| 3.2.2 柞蚕生丝脱胶 |
| 3.2.3 柞蚕丝素溶解 |
| 3.2.4 柞蚕溶液浓度测定 |
| 3.2.5 PEI改性柞蚕丝素蛋白 |
| 3.2.6 CASF的表面Zeta电位 |
| 3.2.7 CASF的核磁共振氢谱 |
| 3.2.8 CASF的X-射线光电子能谱 |
| 3.2.9 CASF的红外吸收光谱 |
| 3.2.10 Cu~(2+)滴定法测定PEI接枝效率 |
| 3.2.11 CASF溶液粘度 |
| 3.2.12 CASF的圆二色光谱 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 PEI改性柞蚕丝素蛋白的反应过程 |
| 3.3.2 CASF的表面Zeta电位 |
| 3.3.3 CASF的核磁共振氢谱 |
| 3.3.4 CASF的红外吸收光谱 |
| 3.3.5 CASF的X-射线光电子能谱 |
| 3.3.6 PEI接枝柞蚕丝素蛋白的效率 |
| 3.3.7 CASF溶液粘度 |
| 3.3.8 CASF的二级结构 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 阳离子化柞蚕丝素蛋白的肺癌靶向肽修饰 |
| 4.1 实验材料与仪器 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 柞蚕丝脱胶、溶解、浓度测定、阳离子化改性 |
| 4.2.2 靶向肽C_9修饰阳离子化柞蚕丝素蛋白 |
| 4.2.3 CASF-C_9的表面Zeta电位测定 |
| 4.2.4 CASF-C_9的核磁共振氢谱测试 |
| 4.2.5 CASF-C_9的X-射线光电子能谱测试 |
| 4.2.6 CASF-C_9的红外吸收光谱测试 |
| 4.2.7 CASF-C_9的能谱测试 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 寡肽C_9修饰阳离子化柞蚕丝素蛋白 |
| 4.3.2 CASF-C_9的表面Zeta电位 |
| 4.3.3 CASF-C_9的能量色散X-射线光谱 |
| 4.3.4 CASF-C_9的核磁共振氢谱 |
| 4.3.5 CASF-C_9的红外吸收光谱 |
| 4.3.6 CASF-C_9的X-射线光电子能谱 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 CASF-C_9/pDNA复合物对肺癌细胞的靶向生物学效应 |
| 5.1 实验材料与仪器 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 琼脂糖凝胶的配制 |
| 5.2.2 质粒的摇菌、抽提及浓度测定 |
| 5.2.3 CASF-C_9/pDNA复合物的制备 |
| 5.2.4 CASF-C_9/pDNA复合物的琼脂糖凝胶电泳 |
| 5.2.5 CASF-C_9/pDNA复合物的表面Zeta电位 |
| 5.2.6 CASF-C_9/pDNA复合物的形貌及粒径 |
| 5.2.7 CASF-C_9/pDNA复合物转染细胞的绿色荧光表达 |
| 5.2.8 CASF-C_9/pDNA复合物的转染效率 |
| 5.2.9 CASF-C_9/pDNA复合物转染细胞的存活率 |
| 5.2.10 数据统计分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 CASF-C_9/pDNA复合物的琼脂糖凝胶电泳 |
| 5.3.2 CASF-C_9/pDNA复合物的表面Zeta电位 |
| 5.3.3 CASF-C_9/pDNA复合物的形貌及粒径 |
| 5.3.4 CASF-C_9/pDNA复合物转染细胞的荧光表达 |
| 5.3.5 CASF-C_9/pDNA复合物的转染效率 |
| 5.3.6 CASF-C_9/pDNA复合物对细胞增殖的影响 |
| 5.3.7 讨论 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 CASF-C_9/Ad复合物的制备及其体外生物学效应 |
| 6.1 实验材料与仪器 |
| 6.1.1 实验材料 |
| 6.1.2 实验仪器 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 柞蚕丝的脱胶、溶解、浓度测定、阳离子化改性 |
| 6.2.2 靶向肽修饰阳离子化柞蚕丝素蛋白 |
| 6.2.3 材料与腺病毒的荧光标记 |
| 6.2.4 不同感染复数的腺病毒体外感染细胞 |
| 6.2.5 CASF-C_9/Ad复合物的制备 |
| 6.2.6 CASF-C_9/Ad复合物的表面Zeta电位 |
| 6.2.7 CASF-C_9/Ad复合物的形貌及粒径 |
| 6.2.8 CASF-C_9/Ad复合物的靶向作用 |
| 6.2.9 CASF-C_9/Ad复合物感染细胞的绿色荧光表达 |
| 6.2.10 CASF-C_9/Ad复合物感染细胞的效率 |
| 6.2.11 CASF-C_9/Ad复合物中ING4基因在H460细胞中的表达 |
| 6.2.12 CASF-C_9/Ad复合物中IL-24基因在H460细胞中的表达 |
| 6.2.13 CASF-C_9/Ad复合物感染细胞后的存活率 |
| 6.2.14 CASF-C_9/Ad复合物诱导肺癌细胞凋亡 |
| 6.2.15 数据统计分析 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 不同感染复数的裸腺病毒体外感染细胞 |
| 6.3.2 CASF-C_9/Ad复合物的表面Zeta电位 |
| 6.3.3 CASF-C_9/Ad复合物的形貌及粒径 |
| 6.3.4 CASF-C_9/Ad复合物与细胞共作用 |
| 6.3.5 CASF-C_9/Ad复合物感染细胞的绿色荧光表达 |
| 6.3.6 CASF-C_9/Ad复合物感染细胞的效率 |
| 6.3.7 CASF-C_9/Ad复合物对细胞增殖的影响 |
| 6.3.8 CASF-C_9/Ad复合物中外源性双基因在H460细胞中的表达 |
| 6.3.9 CASF-C_9/Ad复合物诱导肺癌细胞H460凋亡 |
| 6.3.10 讨论 |
| 6.4 本章小结 |
| 第七章 CASF-C_9/Ad复合物抑制肺癌移植瘤生长的动物实验 |
| 7.1 实验材料与仪器 |
| 7.1.1 实验材料 |
| 7.1.2 实验仪器 |
| 7.2 实验方法 |
| 7.2.1 柞蚕丝的脱胶、溶解、浓度测定、阳离子化改性 |
| 7.2.2 靶向肽修饰阳离子化柞蚕丝素蛋白 |
| 7.2.3 CASF-C9/Ad复合物的制备 |
| 7.2.4 荷瘤小鼠致瘤所需H460细胞数量试验 |
| 7.2.5 建立小鼠H460肺癌移植瘤 |
| 7.2.6 CASF-C9/Ad复合物治疗肺癌移植瘤 |
| 7.2.7 免疫组化检测 |
| 7.2.8 数据统计分析 |
| 7.3 实验结果 |
| 7.3.1 小鼠移植瘤的致瘤细胞数量 |
| 7.3.2 CASF-C9/Ad复合物的抑瘤作用 |
| 7.3.3 HE染色观察肿瘤组织 |
| 7.3.4 免疫组化检测肿瘤相关因子的表达 |
| 7.3.5 讨论 |
| 7.4 本章小结 |
| 第八章 结语 |
| 8.1 全文结论 |
| 8.2 本论文的主要创新点 |
| 8.3 后续研究计划 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读博士学位期间本人发表的论文及着作 |
| 致谢 |
（6）S4TdR/UVA对乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 乳腺癌及其治疗手段 |
| 1.1.1 乳腺癌简介 |
| 1.1.2 乳腺癌治疗研究进展 |
| 1.2 近紫外光辅助四硫胸苷疗法 |
| 1.2.1 光动力疗法研究进展 |
| 1.2.2 近紫外光辅助四硫胸苷疗法 |
| 1.3 细胞周期与调控 |
| 1.3.1 细胞周期调控与细胞增殖 |
| 1.3.2 细胞凋亡 |
| 1.3.3 P53通路 |
| 1.4 本课题的目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验仪器和设备 |
| 2.3 实验耗材及试剂 |
| 2.3.1 实验耗材 |
| 2.3.2 实验试剂 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 细胞复苏 |
| 2.4.2 细胞传代 |
| 2.4.3 细胞冻存 |
| 2.4.4 细胞计数及铺盘 |
| 2.4.5 S4TdR/UVA暴露处理 |
| 2.4.6 细胞活性检测实验 |
| 2.4.7 细胞周期检测实验 |
| 2.4.8 蛋白质免疫印迹实验 |
| 2.4.9 目的基因实时荧光定量检测 |
| 2.5 统计学分析 |
| 2.6 技术路线 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 S~4TdR/UVA对MCF-7细胞活性与周期的影响 |
| 3.1.1 UVA及不同浓度S4TdR联合暴露对MCF-7细胞活性的影响 |
| 3.1.2 UVA及S4TdR联合暴露对MCF-7细胞周期的影响 |
| 3.2 S~4TdR/UVA对MCF-7细胞抑制作用的机制研究 |
| 3.2.1 S~4TdR/UVA联合暴露对P53-Mdm2-P21通路的影响 |
| 3.2.2 S~4TdR/UVA联合暴露对P53-Bax/Bcl-2-Caspase 3通路的影响 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录A 流式细胞仪检测原始数据 |
| 附录B 待测基因标准曲线 |
| 致谢 |
| 作者简历及攻读硕士学位期间的科研成果 |
（7）新加良附方调控miR-34a/SIRT1/p53及Caspase凋亡通路抑制胃癌的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中药抗胃癌基础研究现状与进展 |
| 1 中药有效成分基础研究 |
| 2 单味中药基础研究 |
| 3 复方基础研究 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 胃癌相关miRNA研究现状与展望 |
| 1 miRNA在胃癌发生发展中的作用研究 |
| 2 miRNA在胃癌诊断治疗中的作用研究 |
| 3 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 新加良附方及薯蓣皂苷元抑制胃癌细胞功能作用及机制研究 |
| (一) 新加良附方抑制人胃癌细胞功能实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| (二) 薯蓣皂苷元抑制人胃癌细胞功能实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| (三) 新加良附方及薯蓣皂苷元调控miR-34a作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| (四) 新加良附方及薯蓣皂苷元调控miR-34a抗胃癌作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 新加良附方及薯蓣皂苷元对裸鼠胃癌移植瘤抑制作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（8）MYCN调控HES1通过凋亡途径参与小细胞肺癌化疗耐药的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 MYCN调控凋亡途径影响小细胞肺癌的化疗耐药 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 第二章 MYCN调控Notch通路,靶向作用HES1影响小细胞肺癌的化疗耐药 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 材料和方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 第三部分 MYCN及HES1在小细胞肺癌组织中的表达及临床意义 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（9）BRMS1在甲状腺癌中的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、BRMS1蛋白在甲状腺癌的表达情况及临床意义 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.2 研究方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 BRMS1蛋白在甲状腺未分化癌以及分化型甲状腺癌中的表达差异 |
| 1.2.2 BRMS1 蛋白的表达与甲状腺未分化癌以及分化型甲状腺癌预后及临床病理特征的关系及临床意义 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、BRMS1蛋白对甲状腺未分化癌细胞生物学功能的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 研究方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 抑制 BRMS1 蛋白对未分化甲状腺癌细胞生物学功能的影响 |
| 2.2.2 过表达 BRMS1 蛋白对未分化甲状腺癌细胞生物学功能的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、生信分析及体内实验证实BRMS1蛋白抑制肿瘤细胞进展 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 研究方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 生物信息学分析BRMS1基因在疾病中的表达 |
| 3.2.2 生物信息学分析BRMS1基因在不同癌种中的表达概况 |
| 3.2.3 生物信息学分析BRMS1和CX43(GJA1)以及P53 之间的互作网络 |
| 3.2.4 生物信息学分析 BRMS1 与甲状腺癌的预后关系以及与 CX43（GJA1）、P53表达水平的相关性 |
| 3.2.5 过表达BRMS1蛋白可抑制小鼠皮下移植瘤增殖 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 乳腺癌转移抑制基因 1(BRMS1)研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）miR-486靶向SRSF3对奶山羊卵巢颗粒细胞增殖及凋亡调控作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 文献综述 |
| 第一章 奶山羊卵泡发育的研究进展 |
| 1.1 卵泡发育与颗粒细胞的研究 |
| 1.1.1 卵泡发育与闭锁 |
| 1.1.2 颗粒细胞与卵泡发育和闭锁 |
| 1.1.3 颗粒细胞凋亡途径 |
| 1.2 MicroRNAs的研究 |
| 1.2.1 MicroRNAs的产生 |
| 1.2.2 MicroRNAs与癌症的研究进展 |
| 1.2.3 MicroRNAs与调控卵巢功能的研究进展 |
| 1.2.4 MiR-486的研究进展 |
| 1.3 SRSF3的研究进展 |
| 1.3.1 SR家族的研究进展 |
| 1.3.2 SRSF3的功能 |
| 1.4 .研究的目的与意义 |
| 1.5 技术路线 |
| 第二章 miR-486对奶山羊卵巢颗粒细胞增殖及凋亡的调控作用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试验样品 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.2.3 主要试剂 |
| 2.2.4 体外合成miR-486的模拟物 |
| 2.2.5 原代奶山羊卵巢颗粒细胞的培养与转染 |
| 2.2.6 CCK-8法检测颗粒细胞活力 |
| 2.2.7 EdU法检测细胞增殖率 |
| 2.2.8 流式法检测细胞凋亡 |
| 2.2.9 RNA提取及反转录 |
| 2.2.10 Real time-qPCR |
| 2.2.11 Western blot检测 |
| 2.2.12 统计与分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 miR-486在各组织的表达水平及其在颗粒细胞中的转染效率 |
| 2.3.2 miR-486对颗粒细胞活力及增殖的影响 |
| 2.3.3 miR-486对颗粒细胞凋亡的影响 |
| 2.3.4 miR-486对PIK3/AKT/mTOR通路的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 miR-486通过SRSF3对卵巢颗粒细胞增殖及凋亡的调控作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试验样品 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.2.3 主要试剂 |
| 3.2.4 miR-486的靶基因预测 |
| 3.2.5 荧光素酶报告载体的构建 |
| 3.2.6 HEK293T细胞的培养、转染以及荧光活性检测 |
| 3.2.7 SRSF3 过表达载体的构建及干扰RNA的合成 |
| 3.2.8 原代奶山羊卵巢颗粒细胞的培养与转染 |
| 3.2.9 CCK-8法检测颗粒细胞活力 |
| 3.2.10 EdU法检测细胞增殖率 |
| 3.2.11 流式法检测细胞凋亡 |
| 3.2.12 RNA提取及反转录 |
| 3.2.13 Real time-qPCR |
| 3.2.14 Western blot检测 |
| 3.2.15 统计与分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 SRSF3在奶山羊各组织器官的表达水平 |
| 3.3.2 miR-486与SRSF3的靶向关系验证 |
| 3.3.3 构建SRSF3过表达载体 |
| 3.3.4 SRSF3过表达及干扰RNA的表达效率 |
| 3.3.5 SRSF3对颗粒细胞活力及增殖的影响 |
| 3.3.6 SRSF3对颗粒细胞凋亡作用的影响 |
| 3.3.7 miR-486通过SRSF3对颗粒细胞增殖的调控作用 |
| 3.3.8 miR-486通过SRSF3对颗粒细胞凋亡的调控作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 研究结论 |
| 创新点 |
| 进一步研究的问题 |
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四、p53mRNA、bcl-2、bax蛋白在肺癌中的表达（论文参考文献）
- [1]PHLDB3、P53、Bax、Bcl-2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[D]. 李雪. 西南医科大学, 2021(01)
- [2]弥漫大B细胞淋巴瘤信号通路相关microRNA和蛋白质的筛选及功能研究[D]. 高海霞. 新疆医科大学, 2021(08)
- [3]孕激素和脂联素分子受体3抑制非小细胞肺癌生长作用及机制研究[D]. 郭强. 遵义医科大学, 2020(01)
- [4]p53相互作用蛋白CCDC106和ZCCHC10在癌症中的作用及分子机制[D]. 宁贻崇. 湖南师范大学, 2020(01)
- [5]肺癌靶向性丝素/ING4-IL-24双基因共表达腺病毒复合物[D]. 瞿静. 苏州大学, 2020(06)
- [6]S4TdR/UVA对乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用及机制研究[D]. 刘香佚. 大连海事大学, 2020(01)
- [7]新加良附方调控miR-34a/SIRT1/p53及Caspase凋亡通路抑制胃癌的机制研究[D]. 李亚. 北京中医药大学, 2020(04)
- [8]MYCN调控HES1通过凋亡途径参与小细胞肺癌化疗耐药的研究[D]. 童琴. 南方医科大学, 2020(01)
- [9]BRMS1在甲状腺癌中的机制研究[D]. 吴宇. 天津医科大学, 2020(06)
- [10]miR-486靶向SRSF3对奶山羊卵巢颗粒细胞增殖及凋亡调控作用的研究[D]. 刘淑娟. 西北农林科技大学, 2020(02)