一、真菌毒素及真菌毒素检测试剂盒产业化开发（论文文献综述）
温晓燕[1]（2021）在《仓储小麦和稻谷中主要真菌毒素污染水平及快速识别技术研究》文中指出真菌毒素是产毒真菌产生的次级代谢产物,对人类和动物有毒害作用。主要包括致癌、致畸、致突变、免疫抑制、胚胎毒性、生殖紊乱、肝毒性、肾毒性和神经毒性等。真菌毒素可能在谷物收获前或收获后污染谷物,影响谷物产量和质量造成经济损失,还可能通过食物链进入动物和人体,危及人体健康。如何减少和控制真菌毒素对粮食的危害已成为全球关注的问题。然而,很少有关于储存谷物中霉菌毒素污染的报告。因此,有效监测小麦和稻谷等仓储谷物中真菌毒素的污染情况,探究小麦和稻谷仓储过程中真菌毒素的发生规律,对小麦和稻谷的安全储藏及保障粮食质量安全具有重要的现实意义。本论文主要开展以下几个方面的研究工作:（1）上海浦江仓储有限公司仓储小麦和稻谷产毒菌株的初步鉴定。基于形态学和分子生物学鉴定产毒菌株,小麦中共分离获得真菌17株,分属于12个种,即包括赤曲霉菌、谢瓦散囊菌、麦类核腔菌、细链格孢菌、芥链格孢、极细链格孢菌、阿姆斯特丹曲霉、假灰绿曲霉、辐毛类鬼伞、蠕孢菌、烟草赤星病菌和烟曲霉,其中数量最多的为烟草赤星病菌,占菌株总数的23%;稻谷中共分离获得86株真菌,分属于12个种,包括草茎点霉、担子菌、高粱表球菌、横梗霉、黄曲霉菌、假灰绿曲霉、金黄色青霉、菌核曲霉、篮状菌、球毛壳菌、烟曲霉菌和长柄木霉,其中黄曲霉数量最多,占菌株总数的47.7%。（2）仓储小麦和稻谷中真菌毒素的污染情况分析。采用超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）同时检测谷物中40种真菌毒素的分析方法,结果显示,上海地区仓储的119份小麦检出27种真菌毒素,60份稻谷检出22种真菌毒素。小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）和腾毒素的检出率分别为33.61%和80.67%,平均污染浓度分别为96.95μg/kg和24.09μg/kg;稻谷检出的22种毒素中镰刀菌烯酮和伏马毒素B1的污染水平较高,检出率分别为33.33%和46.67%,平均污染浓度分别为3.96μg/kg和19.91μg/kg;检测近几年收获谷物的真菌毒素污染情况,2019年产小麦的毒素污染情况相对更为严重,2018年产稻谷真菌毒素的污染情况相对更严重;不同产地谷物真菌毒素的污染水平也有差别,与山东相比,江苏产地的小麦污染情况更严重;与黑龙江相比,上海产地的稻谷污染水平普遍更高。另外,小麦和稻谷在储藏过程中,黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素M2、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B、DON、T-2毒素和HT-2毒素的检出率随着仓储时间的延长而增加。（3）基于氮掺杂Cu-MOFs（N-Cu-MOF）纳米材料的电化学传感器快速识别小麦中DON。建立N-Cu-MOF纳米材料驱动的快速检测DON的电化学适配体传感器,以N-Cu-MOF作为电极基底材料,建立了一个灵敏度高、选择性好的检测DON的传感平台。N-Cu-MOF作为电极基底材料,使得传感器具有大的比表面积且能与适配体结合的优良特性,同时用作电信号探针。DON浓度为0.02-20 ng/m L,N-Cu-MOF适配体传感器对DON的线性关系良好（R2>0.99）,检测限低至0.008 ng/m L。另外,N-Cu-MOF传感平台还具有良好的选择性和重复性,在实际小麦样品检测中得到了满意的回收率（95.6～105.9%）。通过改变特定的适配体,该策略可以很容易地扩展到其他霉菌毒素或其它有害物质中,具有广阔的应用前景。
马鹏飞[2]（2021）在《氯霉素和真菌毒素适配体—靶标结合机制及检测应用研究》文中认为适配体是通过SELEX（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment）技术筛选得到的能特异性识别靶标的寡核苷酸,具有稳定性好、易于化学修饰、亲和力和特异性好以及免疫原性低等特点,在疾病诊断与治疗、生物成像和分析检测等领域得到了越来越广泛的应用。食品安全危害物指的是食品中所含有的对人体健康有潜在不良影响的生物、化学或物理因子,其中,食品中抗生素的残留和真菌毒素的污染是食品安全监测的重要组成部分。本论文以氯霉素和真菌毒素为研究对象,对适配体序列进行了截短优化和虚拟突变,提高了适配体的亲和力,并结合等温滴定量热法、圆二色谱法、荧光标记法、酶切法、分子对接和分子动力学研究了适配体与靶标的结合机制,同时基于适配体的识别机制,结合聚合酶链式反应、核酸酶的信号扩增技术和杂交链式反应等建立了灵敏、准确和快速的新型检测方法,为适配体在食品安全危害物检测中的应用提供了新的思路和理论基础。首先,利用经SELEX技术筛选得到的原长80碱基的氯霉素适配体,构建了荧光偏振法检测氯霉素。适配体与氯霉素在结合缓冲液中孵育,通过氧化石墨烯的吸附去除未与氯霉素结合的游离适配体,以分离得到的适配体-氯霉素复合物为模板,荧光基团FAM标记的引物为初始荧光偏振信号,进行聚合酶链式反应（PCR）扩增,再向PCR产物中加入链霉亲和素,利用链霉亲和素-生物素作用进一步扩增PCR产物的分子量,实现了对荧光偏振信号的双重放大。在最优的检测条件下,荧光偏振值与氯霉素浓度的对数值呈良好的线性关系,检测的线性范围为0.001 nmol/L-200 nmol/L,检测限为0.5 pmol/L,在蜂蜜样品中的加标回收率为95%-107%。其次,基于分子对接得到的适配体和氯霉素的关键结合域,利用无两端引物区碱基数量为40的氯霉素适配体,构建了核酸外切酶I（Exo-I）和杂交链式反应（HCR）双重扩增的荧光适配体传感器。首先利用等温滴定量热法、圆二色谱法和分子对接研究了适配体与氯霉素的识别机制,确定适配体结合氯霉素的关键结合域。HCR的引发链与适配体结合域通过碱基互补配对连接,适配体识别氯霉素时发生构象变化与引发链解离,Exo-I剪切适配体-氯霉素复合物循环释放氯霉素,暴露出更多HCR引发链,加入HCR的两种茎-环链后,引发HCR,荧光信号实现扩增。在优化的实验条件下,该方法可实现对氯霉素在0.001 nmol/L-100 nmol/L浓度范围内的线性检测,检测限为0.3 pmol/L,在牛奶样品中的加标回收率为91%-109%。第三,通过在序列两端逐步去除碱基的方式,对氯霉素适配体进行了系统性的截短优化,并利用优化后碱基数量为30的适配体LLR10的变构象结合模式构建了简便的荧光偏振适配体传感器。利用圆二色谱法、紫外可见光分光光度法和分子对接研究了LLR10识别氯霉素的机制,发现缓冲液中阳离子浓度尤其是Mg2+浓度对LLR10识别氯霉素发挥着至关重要的作用,LLR10的小沟区域为氯霉素的结合域。基于LLR10与氯霉素的识别机制,利用SYBR Green I提供荧光偏振信号、LLR10为识别探针构建了无标记的荧光偏振法检测氯霉素,在最优的实验条件下,对氯霉素检测的线性范围为0.1nmol/L-10 nmol/L,检测限为0.06 nmol/L,在牛奶和蜂蜜样品中检测的加标回收率分别为95%-98%和94%-108%,该方法操作简便,检测用时短,灵敏准确且无需分离。第四,利用分子对接指导定向截短优化了T-2毒素和黄曲霉毒素B1（AFB1）的适配体,系统性地研究了优化适配体与靶标的结合机制,利用优化的适配体和SYBR Green I实现了对T-2毒素的快速检测。根据分子对接预测的适配体和靶标的结合域,通过2次截短和1次截短分别得到了T-2毒素的含有40个碱基的适配体T40和AFB1的含有32个碱基的适配体B32。利用圆二色谱、荧光标记、酶切和分子对接系统性地研究了T-2毒素与T40和AFB1与B32的结合机制,发现T40与T-2毒素的结合域位于T40的茎部区域,B32与AFB1的结合域位于B32的环部区域。以T40作为识别探针,SG扩增荧光信号,实现了对T-2毒素的灵敏和快速检测,在0.03 nmol/L-30 nmol/L的浓度范围内,荧光强度与T-2毒素的浓度呈良好的线性关系,检测限为0.01 nmol/L,在啤酒样品中的加标回收率在94%-107%。该方法检测灵敏度高,操作简便且检测用时短。第五,利用圆二色谱和分子动力学系统性地研究了适配体B32与AFB1、AFB2、AFM1和AFG1的识别机制。B32对4种靶标亲和力大小顺序为AFB2、AFB1、AFM1和AFG1,即B32对AFB2的亲和力最好而对AFG1的亲和力最差。圆二色谱数据表明,B32与4种靶标结合后,B32的环部结构均发生变化且茎部的碱基堆积效应增强,推测B32与4种靶标的结合模式相同。通过分子动力学研究发现,B32与4种靶标的结合域相同,范德华能量和静电能量为B32与4种靶标的结合提供了主要贡献,非极性相互作用有利于B32与4种靶标的结合。B32与4种靶标亲和力差别来源于4种靶标分子结构的微小不同,使得4种靶标在结合域中的位阻不同,导致结合域中的C14、G20、G22和T23这4个关键碱基对B32与4种靶标结合的能量贡献不同。第六,基于适配体B32与AFB1的结合域,虚拟突变适配体B32,得到对AFB1亲和力提高2倍的突变适配体M1。B32“三明治”状结合域中的上层C14、G20碱基和下层G12、T23碱基在随机突变中保持标准的碱基互补配对,中间的T13、T21和G22碱基随机突变,共得到400条突变序列。根据突变体-AFB1复合物结合自由能的大小筛选得到8条序列,经实验验证亲和力,最终获得了一条突变体M1的亲和力与B32相比提高了2倍。与B32相比,圆二色谱数据表明,M1与AFB1结合后的负峰位置向左平移5 nm,推测M1与AFB1的结合模式或结合过程中的构象变化与B32不同。分子动力学结果表明,M1对AFB1亲和力提升的原因是,突变后M1中G22碱基与AFB1的静电作用更强,使得G22碱基对M1与AFB1结合能量的贡献更多。本论文截短优化了氯霉素、T-2毒素和AFB1的适配体序列,研究了适配体对氯霉素、T-2毒素和AFB1的识别机理,并通过虚拟突变筛选得到了对AFB1亲和力更好的适配体序列。同时,结合适配体对靶标的识别机理以及荧光分析技术,实现了对氯霉素和T-2毒素的灵敏准确检测,为适配体应用于氯霉素、T-2毒素和AFB1等食品危害物的检测提供了理论基础和实践依据。
张蕊[3]（2021）在《臭氧对甜瓜白霉病病原菌Fusarium sulphureum的生长抑制及机理研究》文中指出由Fusarium sulphureum侵染引起的白霉病是甜瓜果实采后的主要病害,该病害不仅显着降低甜瓜品质,而且在甜瓜果实组织中积累大量真菌毒素,其中以单端孢霉烯族毒素——NEO的积累最为显着。前人研究结果表明,臭氧处理可通过抑制病原菌生长来抑制果蔬病害。然而,目前有关于臭氧处理对F.sulphureum的抑制及具体作用机理未知。本研究以F.sulphureum及“玛瑙”甜瓜为试材,通过臭氧对F.sulphureum处理,研究臭氧处理对F.sulphureum损伤接种的甜瓜果实白霉病病斑直径扩展及毒素积累的影响,分析了臭氧处理对F.sulphureum孢子生长及细胞膜完整性的影响,最后通过转录组学和RT-q PCR验证臭氧处理对病害控制和病原菌抑制的作用机理。结果表明:1.臭氧处理显着抑制了F.sulphureum损伤接种的甜瓜果实白霉病病害的发展,病斑直径显着低于对照,且病部组织中NEO的积累量也显着低于对照。2.浓度为2 mg/L的臭氧处理可显着抑制F.sulphureum的菌落生长,孢子萌发,产孢量及菌丝生物量;臭氧处理可破坏F.sulphureum孢子细胞膜完整性,相对电导率、MDA含量及蛋白质和核酸泄露显着高于对照;SEM和TEM观察表明,臭氧处理后的孢子发生明显皱缩或破裂,表面粗糙,孢子细胞器遭到严重损坏,内容物流失;3.臭氧处理后F.sulphureum孢内ROS（O2-、H2O2）积累量明显增加,ROS代谢的相关酶,如:NOX、CAT、POD活性增加,但SOD、APX、GR活性被抑制。4.臭氧处理后F.sulphureum孢子的差异表达的基因主要参与糖代谢、氨基酸代谢、能量代谢、脂质代谢及ROS代谢,通过RT-q PCR验证发现,与ROS代谢相关基因显着上调表达,而糖代谢、氨基酸代谢及氧化磷酸化过程的相关基因则显着下调表达。综上,臭氧处理可通过抑制F.sulphureum的孢子萌发、产孢量及菌丝生长,及降低细胞膜的完整性,促使ROS的积累,增强ROS代谢合成酶的活性及相关基因表达,抑制了ROS代谢相关清除酶的活性,从而抑制F.sulphureum损伤接种后甜瓜果实白霉病的扩展和NEO毒素的积累。
李春玲[4]（2021）在《淡豆豉炮制中黄曲霉毒素B1的产毒菌和拮抗菌》文中研究表明目的通过检测淡豆豉自然炮制中不同时间点黄曲霉毒素（Aflatoxin,AFT）含量、筛选鉴定和定量产AFT菌（简称产毒菌）并测定其产毒能力,考察黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）拮抗菌的拮抗能力,初步分析产毒菌和拮抗菌在AFB1消长中的作用,为探讨淡豆豉炮制中黄曲霉毒素消长机制奠定基础,并为淡豆豉或其它发酵中药和食品中黄曲霉毒素的防控措施提供科学依据。方法一、淡豆豉自然炮制中AFT含量测定1、淡豆豉自然发酵炮制:本实验室前期按2020年版《中华人民共和国药典》简称《中国药典》已建立规范的淡豆豉炮制工艺,本研究按此工艺制备淡豆豉,获取淡豆豉不同炮制时间点的样本和成品淡豆豉。2、建立超高效液相色谱串联质谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry,UPLC–MS/MS）,测定淡豆豉不同炮制时间点样本中AFT的含量。二、淡豆豉自然炮制中产毒菌的筛选、鉴定、定量和产毒能力1、淡豆豉自然炮制中产毒菌的筛选和鉴定（1）产毒菌的筛选和菌落计数:根据AFT在紫外光照射下可发生蓝紫色或绿色荧光的原理,筛选分离出产生蓝紫色或绿色荧光的微生物并进行菌落计数。将产荧光菌初步定义为产毒菌。（2）产毒菌的初步鉴定:通过肉眼观察菌落形态和显微镜观察镜下形态结构初步鉴定产毒菌。（3）产毒菌的分子生物学鉴定:提取各产毒菌的DNA,应用18Sr DNA序列进行PCR扩增、对扩增产物进行基因测序分析,查找模板基因序列,构建系统发育树,对产毒菌进行鉴定。2、产毒菌的产毒能力考察应用UPLC–MS/MS法测定产毒菌发酵液中AFT含量,比较它们产AFT的能力。三、考察淡豆豉炮制中AFB1拮抗菌的拮抗能力（本实验室前期从淡豆豉炮制中分离鉴定出已报道能抑制AFT产生的5株有益菌（简称拮抗菌）如枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis,JX2）、鲑色锁掷酵母菌（Sporidiobolus salmonicolor,EJ1）、黑曲霉菌（Aspergillus niger,FC2）、屎肠球菌（Enterococcus faecium,BR5）、鸟肠球菌（Enterococcus avium,9R2）,分别考察这5株菌抑制产毒菌生长和降解AFB1的的拮抗能力）1、5株待测菌对产AFT黄曲霉标准菌生长繁殖的影响平板对峙法检测待测菌对产AFT黄曲霉生长的影响:取待测菌的种子液分别接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）等距的四端,在平皿中央接种黄曲霉标准株孢子悬浮液,以只接种黄曲霉标准株孢子悬浮液的平皿作对照,常规真菌培养条件下培养一定时间后,测定各平皿中黄曲霉标准株的菌落直径,计算抑菌率。抑菌率=（对照组黄曲霉菌落直径-实验组黄曲霉菌落直径）/对照组黄曲霉菌落直径×100%。2、5株待测菌发酵上清液对产AFT黄曲霉标准株生长的影响取各待测菌的发酵上清液分别PDA培养基混匀倒入平皿中,以未加发酵上清液的PDA培养皿作为对照组,待凝固后于平皿中央接种等量的产AFT黄曲霉标准株孢子悬浮液,常规真菌培养条件下培养一定时间后,测定各平皿中黄曲霉标准株的菌落直径,计算抑菌率。抑菌率=（对照组黄曲霉菌落直径-实验组黄曲霉菌落直径）/对照组黄曲霉菌落直径×100%。3、5株待测菌对AFB1的降解能力在培养液中分别接种5株待测菌与相同浓度AFB1标准品进行摇床培养（以只加相同浓度AFB1标准品、未接种待测菌的培养液作对照）,摇床培养一定时间后,离心,取上清液,用UPLC–MS/MS检测上清液中的AFB1含量。AFB1降解率（%）=（对照组AFB1含量-试验组AFB1含量）/对照组AFB1含量×100%。结果一、淡豆豉炮制和取样淡豆豉炮制过程中每3天取样一次,“黄衣上遍”阶段分别为记为发酵0天、发酵3天、发酵6天,“再闷”阶段分别记为再闷3天、再闷6天、再闷9天、再闷12天、再闷15天和蒸后成品,编号分别为F0、F3、F6、Z3、Z6、Z9、Z12、Z15和Z蒸。二、淡豆豉自然炮制中不同时间点4种AFT（黄曲霉毒素B1,AFB1;黄曲霉毒素B2,AFB2;黄曲霉毒素G1,AFG1;黄曲霉毒素G2,AFG2）含量测定结果使用UPLC–MS/MS法测定4种AFT含量,方法学考察良好,表明此方法适合于淡豆豉中的AFT含量测定;测定结果表明AFT的含量在淡豆豉自然炮制过程中呈动态变化。1、建立了淡豆豉中4种AFT含量测定的UPLC–MS/MS方法样品处理和免疫吸附前处理请加上去使用超声提取法提取样品中的黄曲霉毒素以及使用免疫亲和柱对样品进行净化。（1）线性关系考察:以各浓度（ng/m L）标准品为横坐标x,对应的峰面积为纵坐标y,计算得出AFB1的标准曲线方程为y=402087x+7996.2,r=0.9998;AFB2的标准曲线方程为y=58257x+1241.8,r=0.9997;AFG1的标准曲线方程为y=331396x-6075.6,r=0.9999;AFG2的标准曲线方程为y=29342x+92.996,r=0.9998。表明标准品浓度在0.05–20 ng/m L之间线性关系良好。（2）重复性考察:AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的相对标准偏差（Relative standard deviation,RSD）（n=6）分别为0.40%,0.43%,0.93%,0.49%,表明重复性良好（3）精密度考察:AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的相对标准偏差（Relative standard deviation,RSD）（n=6）分别为0.67%,2.01%,0.77%,2.59%,说明精密度良好。（4）加样回收率考察:AFB1、AFG1加入量为5 ng/g,AFB2、AFG2加入量为1.25 ng/g时,AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为97.5%,99.5%,98.2%,99.2%,RSD分别为2.32%,2.70%,0.5%,2.64%（n=6）;AFB1、AFG1加入量为1.16 ng/g,AFB2、AFG2加入量为0.29 ng/g时,AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为102%,94%,92%,90.6%,RSD分别为2.24%,1.33%,1.83%,1.56%（n=6）,表明回收率良好。2、4种AFT含量测定:淡豆豉自然炮制过程中各样本AFT含量呈先上升后下降的趋势:从发酵第3天开始逐渐上升,到再闷第6天达到最高值,为6.95μg/kg,之后开始下降,在再闷第9天下降至1.2μg/kg,再闷第12天后各样本的AFT含量均为0。三、淡豆豉自然炮制中产毒菌的筛选、鉴定、定量和产AFT能力筛选出15株产毒菌,经形态学和分子生物学鉴定分别为黄曲霉和溜曲霉;对产毒菌进行菌落计数,结果显示淡豆豉炮制过程中产AFT菌数量呈动态变化,在发酵第6天达到最大值;淡豆豉炮制过程中各产毒菌的产毒能力较弱（小于5ng/m L）,远低于黄曲霉标准株的产毒能力（654.90 ng/m L）,并且15株产毒菌的产AFT能力各不相同。1、产毒菌的筛选与菌落计数:根据AFT在紫外光照射下可发生蓝紫色或绿色荧光的原理,筛选分离出产生蓝紫色的微生物共15株,分别为黄曲霉和溜曲霉。产毒菌菌落数呈先上升后下降的趋势,从发酵第3天开始逐渐上升,到发酵第6天菌落数最多,为1x106.30CFU/g,之后开始减少,从再闷第9天开始没有检测到产荧光反应微生物。2、产毒菌的鉴定（1）传统微生物学方法鉴定:对筛选到产毒菌进行平板培养,肉眼和显微镜观察其形态结构,初步鉴定为黄曲霉与溜曲霉。（2）分子生物学方法鉴定:对产毒菌进行鉴定,鉴定结果:F6–1d、F6–2d、F6–3d、F6–4d、F6–5d、F6–6d（为发酵第6天样本中筛选到的产生荧光反应的菌株）、F3d（发酵第3天筛选到的产生荧光反应菌株）、Z6d（为再闷第6天筛选到的产荧光反应菌株）、Z3–5d、Z3–2d为黄曲霉（Aspergillus flavus）,Z3–1d、Z3–3d、Z3–4d、Z3–6d、Z3–7d（为再闷第3天筛选到的产荧光反应菌株）为溜曲霉（Aspergillus tamarii）。3、各产毒菌株的产毒能力（1）建立了发酵液中AFT含量测定的UPLC–MS/MS检测方法线性关系考察:以各浓度（ng/m L）标准品为横坐标x,对应的峰面积为纵坐标y,AFB1的标准曲线方程为y=402087x+7996.2,r=0.9998;AFB2的标准曲线方程为y=58257x+1241.8,r=0.9997;AFG1的标准曲线方程为y=331396x-6075.6,r=0.9999;AFG2的标准曲线方程为y=29342x+92.996,r=0.9998。重复性考察:AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的相对标准偏差（Relative standard deviation,RSD）分别为2.08%、3.50%、1.18%、1.66%（n=6）,表明重复性良好。加样回收率考察:AFB1、AFG1加入量为5 ng/m L,AFB2、AFG2加入量为1.5 ng/m L时,AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为94.53%、92.53%、94.87%,91.47%,RSD分别为1.01%,1.80%,1.60%,2.20%（n=3）;AFB1、AFG1加入量为2 ng/m L,AFB2、AFG2加入量为0.6 ng/m L时,AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为92.83%、93.33%、92.83%、92.0%,RSD分别为1.12%、2.47%、1.89%、2.17%（n=3）,表明回收率良好。（2）产毒菌发酵液中AFT含量测定采用UPLC–MS/MS法检测产荧光现象微生物在发酵液中AFT的含量,结果显示,15株产荧光反应的微生物中有5株不产生AFT,10株产生AFT,AFT含量在2.0–4.10 ng/m L之间。四、淡豆豉炮制中AFB1拮抗菌的拮抗能力本实验室前期从淡豆豉炮制中分离鉴定出文献已报道能抑制AFT产生的5株菌（简称拮抗菌）如枯草芽孢杆菌（JX2）、鲑色锁掷酵母菌（EJ1）、黑曲霉菌（JC2）、屎肠球菌（BR5）、鸟肠球菌（9R2）,考察这5株AFB1拮抗菌的拮抗能力。结果显示这5株菌对产AFT黄曲霉标准株生长均有一定的抑制作用,其中鲑色锁掷酵母菌的抑制作用最强;鲑色锁掷酵母菌对AFB1的降解作用最强。1、5株待测菌种子液对产毒黄曲霉标准株生长的影响:结果显示5株菌种子培养液对产毒黄曲霉生长均有一定的抑制作用,其中鲑色锁掷酵母菌对黄曲霉生长的抑制作用最强,抑制率达64.29%,屎肠球菌、鸟肠球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉对黄曲霉生长的抑制率均在30%左右。2、5株待测菌发酵上清液对产毒黄曲霉菌生长的影响:结果显示,5株待测菌发酵上清液对产毒黄曲霉生长均有一定的抑制作用,其中屎肠球菌的抑制作用最强,抑制率为29.63%。3、5株待测菌对AFB1的降解作用:结果显示5株菌发酵菌液均对AFB1有一定的降解作用,其中鲑色锁掷酵母菌对AFB1的降解作用最强,达43.65%,黑曲霉菌的降解作用最弱。结论1、建立了UPLC–MS/MS法测定淡豆豉中AFT含量,该方法简单,快速,灵敏度高。淡豆豉炮制过程中AFT含量呈动态变化,进一步证实了淡豆豉“再闷”的重要性和“再闷”时间的合理性,2、淡豆豉炮制过程中存在产AFT的曲霉菌,为黄曲霉和溜曲霉,黄曲霉占大多数。产AFT菌呈动态变化,呈现先升高后下降的趋势。3、淡豆豉炮制过程中存在抑制产AFT的产毒菌生长和降解AFB1的拮抗菌。4、淡豆豉炮制过程中产AFT菌和拮抗菌相互作用,交替更迭,导致淡豆豉炮制过程中AFT呈动态变化,炮制至再闷后期和淡豆豉成品不含AFT,为揭示淡豆豉炮制中黄曲霉毒素消长机制奠定基础,并为淡豆豉黄曲霉毒素的防控措施提供科学依据。
顾双[5]（2021）在《基于电子鼻和HS-GC-IMS技术在几种农产品受真菌污染检测中的研究》文中研究指明稻米、花生和小麦等是中国及世界各国消费的重要农产品作物,但它们极易在收获和贮藏中遭受真菌侵染。现有的传统检测农产品真菌污染的方法通常是耗时的,并且对样品产生了破坏,使样品不可能进行大规模的无损检测和实时分析。已有大量研究表明,农产品在遭受微生物污染时释放的挥发物会发生明显变化,因此,可检测农产品释放的挥发物对农产品的真菌侵染情况进行诊断和预测,而电子鼻和顶空气相色谱-离子迁移谱（headspace-gas chromatography ion-mobility spectrometry,HS-GC-IMS）两种检测技术均是可以通过检测样品的挥发物成分来表征样品的状态。因此,本研究主要基于电子鼻与HS-GC-IMS技术对受不同真菌侵染的稻米、花生和小麦的挥发物信息进行检测,并结合化学计量学方法实现不同种类真菌的鉴定区分和真菌生长曲线及数量的预测,分析相应挥发物的变化,初步阐明电子鼻和HS-GC-IMS技术实现不同真菌种类区分和菌落总数预测的机理,并进行了实际应用的验证。主要研究内容和结论如下:1)采用电子鼻和气质联用（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术检测了受不同曲霉属真菌侵染的稻米样品,分析了受不同曲霉属真菌侵染的稻米释放的挥发物差异性,对各试验组的电子鼻响应差异性进行了分析,并利用Logistic模型拟合了真菌生长状况,采用主成分分析（PCA）、偏最小二乘回归（PLSR）、反向传播神经网络（BPNN）、支持向量机（SVM）和学习向量量化（LVQ）进行定性分类和定量回归。研究发现,受真菌侵染稻米释放的挥发物（如1-辛醇和十四烷等）在贮藏期间的含量变化与真菌种类、数量以及电子鼻的传感器响应信号密切相关。受亮曲霉、烟曲霉和棒曲霉侵染稻米的电子鼻信号进行主成分分析后的得分图中重心x轴值（PC1）与菌落总数具有较高的相关性,并根据PC1能成功预测三种真菌的生长状况。基于电子鼻信号结合BPNN建立的分类模型对贮藏2天的受真菌侵染稻米具有较高的分类准确率。2)采用HS-GC-IMS和电子鼻技术检测了受真菌侵染不同水平（健康和霉变）的稻米样品,并采用PCA、K-最近邻法（K-nearestneighbor,KNN）和偏最小二乘法（partialleast-squares regression,PLSR）方法比较了两种技术的优劣。同时,对HS-GC-IMS技术检测出的不同样品挥发物差异进行了比较。研究发现,在构建的KNN分类模型中,HS-GC-IMS和电子鼻方法均得到了良好的分类准确率,这两种方法均适合于稻米样品中真菌污染的快速筛选。在构建的PLSR预测模型中,HS-GC-IMS和电子鼻技术均展示了良好的性能,但是HS-GC-IMS方法结合PLSR建立的回归模型具有最好的预测结果。稻米样品贮藏第1天时,受不同真菌侵染稻米样品释放的挥发物组分种类和含量差异较大,其中受烟曲霉侵染的稻米中2-戊酮单体和二聚体的峰强度最高,而在受棒曲霉侵染的稻米样品中2-丁酮单体、2-丁酮二聚物和戊醇单体等峰强度最高。3)采用HS-GC-IMS和荧光光谱技术对受潜在产黄曲霉毒素真菌污染的花生籽粒进行快速检测,并对两种不同来源的信号进行了数据集和特征集融合,比较了采用不同的数据融合方法构建的分类和回归模型的性能。研究发现,在三种数据融合方法中,使用前10个主成分的特征级融合数据构建的正交偏最小二乘判别（orthogonal partial least squares discrimination analysis,OPLS-DA）模型对受产黄曲霉毒素真菌和不产黄曲霉毒素真菌污染的花生籽粒分类率最好,且基于HS-GC-IMS技术在样品贮藏3天后就可以区分出产黄曲霉毒素和不产黄曲霉毒素的两类真菌污染。使用前10个主成分的特征级融合数据构建的PLSR模型预测性能也达到最佳,融合数据的建模效果较单独数据的建模效果有一定的提高。对HS-GC-IMS检测结果进行特征挥发物分析,发现受产黄曲霉毒素真菌和不产黄曲霉毒素真菌污染的花生籽粒释放的8种特征挥发物含量具有显着差异,可以作为区分产黄曲霉毒素真菌和不产黄曲霉毒素真菌的生物标记物。4)采用HS-GC-IMS技术结合非靶向光谱指纹或靶向特征标记法的特征提取方法对小麦样品中的不同属真菌种类进行定性区分,并定量预测小麦样品中黄曲霉、黑曲霉、溜曲霉和岛青霉的菌落总数。采用遗传算法优化的支持向量机（genetic algorithm optimized supportvectormachine,GA-SVM）、随机森林（Random Forest,RF）和 PLSR 算法建立了小麦样品的分类和回归模型,并比较了它们构建的模型性能。此外,还进行了检测模拟实际小麦样品中黄曲霉侵染比例的验证实验。研究发现,基于非靶向光谱指纹法和特异性标记法的GA-SVM分类模型均获得了令人满意的分类结果,但是基于非靶向光谱指纹法的GA-SVM分类模型获得了最优的分类准确率。类似地,基于非靶向光谱指纹法的GA-SVR模型对受真菌侵染小麦样品中的菌落总数预测效果最好。对模拟样品的分析结果表明,基于非靶向光谱指纹策略的GA-SVM/GA-SVR模型对贮藏第4天的模拟受多种真菌侵染小麦样品仍能提供满意的区分和预测性能。这些结果表明,基于非靶向光谱指纹策略的HS-GC-IMS技术能够有效地快速检测小麦籽粒中可能存在的病原真菌,从而防止被真菌污染的原料进入食物链。
熊颖[6]（2020）在《基于四种信号传导体系的快速检测新方法学研究》文中指出为应对食品安全、饮用水污染及病原体感染等全球公共卫生事件,开发具有高灵敏、高准确性的快速检测方法,对于有效控制全球公共卫生风险具有重要的现实意义。基于辣根过氧化物酶（HRP）催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）显色的ELISA方法因具有特异性好,检测通量高,价格便宜等优势,已成为食品安全相关污染物快速、高通量筛选的首选方案。然而,传统以HRP催化TMB显色的快检方法,存在酶催化产物颜色单一、产物信号强度不高(TMB摩尔消光系数3.9×104 M-1 cm-1)、检测灵敏度偏低、无法实现裸眼检测等缺陷;此外,传统ELISA的免疫学反应大多基于半固相界面,存在反应效率不高、需要反复加样及洗板等操作过程,检测步骤相对繁琐。因此,如何提高快检方法的检测灵敏度,构建适合现场使用的新策略,成为当前亟需解决的问题。本研究拟以有机小分子化合物黄曲霉毒素（AFB1）、三磷酸腺苷（ATP）及无机钠离子（Na+）等为模式分析物,从提升样本前处理效率,优化信号输出灵敏度及构建均相快检体系的角度,建立了基于四种信号传导体系的快检新方法。在食品安全快检体系中,高效的前处理方法是保障后续检测方法成功及灵敏度的重要前提。磁性免疫亲和提取方法因具有操作简单、免疫动力学反应效率高、可用于复杂样本的直接提取等优点,被广泛用于各类样本中目标物的高效富集与净化。然而,传统的磁免疫亲和分离方法存在磁性微球（MB）上抗体载量低,抗体不可重复使用造成的制造成本过高等缺陷。针对以上问题,本研究通过在MB表面修饰聚丙烯羧酸分子刷（MB@PAA）,并进一步装载抗AFB1纳米抗体（anti-AFB1 Nb）,以此建立了一种新型的磁免疫亲和提取玉米样品中AFB1的新方法。在该方法中,首先通过可逆断裂链加成聚合方法在羟基化磁性微球（HMB）上连接大量聚丙烯羧酸分子刷,以此提高抗体的载量,达到提高免疫磁珠对AFB1的饱和吸附量;其次,以耐变性能力更强的Nb代替传统易变性的单克隆或多克隆抗体（m Ab/p Ab）,以提高免疫磁珠的重复使用次数,降低亲和纯化的使用成本。结果表明,在最佳条件下,MB@PAA对anti-AFB1 Nb的最大饱和偶联量为623±23μg mg-1,是传统羧基化磁性微球（CMB）的19倍;MB@PAA@Nb对AFB1的最大饱和吸附量为0.23 mg g-1,是传统MB@Nb的35倍。MB@PAA@Nb在重复富集提取AFB110次后,其对AFB1的识别活性未见显着降低（p>0.05）,表明MB@PAA@Nb的重复使用性能较好。此外,该免疫磁珠使用的可靠性和实用性进一步通过提取AFB1加标的玉米样品得到了验证。其次,为克服以TMB为代表的传统酶催化产物显色信号颜色单一、不适宜于裸眼检测的缺陷。本研究通过引入对p H敏感的有机染料溴钾酚紫（BCP）作为信号输出元件,以AFB1标记的葡萄糖氧化酶偶联物（GOx-AFB1）作为竞争抗原,通过GOx催化底物葡萄糖产酸介导溶液p H变化,建立了高灵敏直接竞争ELISA定量及定性检测玉米样品中的AFB1。在最优条件下,该方法裸眼定性检测AFB1的阻断值（检测限）为100 pg m L-1,在对70份AFB1加标的实际玉米样本裸眼检测中,无假阳性和假阴性结果,证明了该方法裸眼定性检测的可靠性。该方法定量检测AFB1线性范围为25-200 pg m L-1,半数抑制浓度(IC50)为66.72 pg m L-1,较常规ELISA提高10倍。加标实验结果表明,该方法具有较好的准确度、精密度以及重现性;特异性实验结果显示该方法与赭曲霉毒素（OTA）、玉米赤霉烯酮（ZEN）等常见真菌毒素无交叉反应,具有较好的特异性;将该方法检测结果进一步与传统高效液相色谱（HPLC）方法结果进行对比,结果显示两种方法无显着性差异（p>0.05）,具有良好的相关性。随后,本研究还制备了高摩尔消光系数的金纳米棒（Au NR）,以GOx催化产生双氧水（H2O2）介导Au NR刻蚀为等离子共振信号输出,建立了高灵敏直接竞争等离子共振ELISA定性及定量检测玉米样品中的AFB1。在该方法中,通过抗原抗体反应引入GOx介导产生的H2O2经HRP辅助催化分解为羟自由基（·OH）,随后·OH将Au NR刻蚀成球状金纳米粒子（Au NS）,金纳米粒子溶液的颜色及等离子共振吸收峰均发生变化,从而实现对目标物的裸眼定性及仪器定量检测。在最优条件下,该方法的裸眼定性检测AFB1的阻断值（检测限）为12.5 pg m L-1,定量检测AFB1的线性范围为3.1-150 pg m L-1,IC50为22.3 pg m L-1,较传统ELISA提高了35倍。样品加标实验结果表明,该方法检测AFB1的回收率介于82%-115%,变异系数（CV）为2%-13%。与液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法检测结果对比,两种方法检测结果无显着性差异（p>0.05）,表明所建立方法具有较好的准确度和精密度。此外,交叉实验结果显示该方法与粮食中其他常见真菌毒素OTA、ZEN等无交叉反应,表明该方法具有较好的特异性。本研究进一步以GOx介导铜纳米粒子（Cu NP）合成为荧光信号输出,建立了超灵敏直接竞争荧光ELISA定量检测玉米样品中的AFB1。样品中AFB1与竞争抗原GOx-AFB1竞争结合固定在酶标板上的anti-AFB1 m Ab,从而引入GOx产生的H2O2,经Fe2+辅助催化分解H2O2为·OH,·OH随后氧化ss DNA,导致合成的Cu NP数量减少。样品中AFB1浓度越高,引入的GOx越少,溶液中完整的模板ss DNA越多,Cu NP的合成产物越多,荧光强度越高;反之荧光强度越低。在最优条件下,该方法定量检测AFB1的线性范围为0.46-400 pg m L-1,IC50为6.13 pg m L-1,最低检测限（LOD）为0.15 pg m L-1,较传统ELISA低96倍和220倍。样品加标实验结果表明,该方法检测AFB1的回收率在96.67%-114.92%,CV在1.64%-17.97%。与LC-MS/MS方法检测结果对比,两种方法无显着性差异,表明所建立方法具有较好的准确度和精密度。此外,交叉实验结果显示该方法与其他常见真菌毒素OTA、ZEN等无交叉反应,表明该方法具有较好的特异性。为克服非均相的传统ELISA方法免疫反应效率不高及检测步骤冗长的缺陷,本研究进一步以功能核酸（适配体、脱氧核酸酶）调控规律成簇间隔重复短回文序列及其相关系统12a（CRISPR/Cas12a）的DNase活性,介导切割非特异性报告DNA（ss DNA-FQ）作为信号输出,建立了高灵敏检测ATP及Na+的均相荧光分析方法。首先将ATP适配体通过与Cas12a的激活DNA（activator）互补配对,以此阻止Cas12a向导RNA（cr RNA）对activator的识别,此时Cas12a的DNase活性被抑制;当ATP适配体识别ATP后,适配体结构发生转换,释放的activator能被Cas12a的cr RNA识别,从而激活Cas12a的DNase活性,Cas12a循环切割溶液中ss DNA-FQ,溶液产生荧光信号。在最优条件下,该方法能在室温条件下,50 min内完成对ATP的均相、快速、高灵敏检测,定量检测ATP的线性范围为0.78-25μM,LOD为0.21μM,检测灵敏度显着高于同样基于荧光信号输出的商业化ATP检测试剂盒（LOD≈1μM）。实际加标样品检测结果显示,该方法与生物发光试剂盒结果无显着性差异（P>0.05）,表明该方法可靠性较好。结合便携式荧光仪平台,通过采集酶催化反应速率代替采集终点荧光值,可将该反应的整体检测时间进一步缩短至15 min,使该方法可满足临床快速诊断的需求。此外,通过巧妙设计Na A43DNAzyme的底物链和酶链,CRISPR/Cas12a系统亦可用于血液样品中Na+检测,该方法定量检测Na+的线性范围为0.049-50 m M,LOD为0.10 m M,实际加标样品结果与商业化Na+选择电极的检测结果具有较好的一致性,表明CRISPR/Cas12a在分析检测领域具有普适性。
丰越[7]（2020）在《安徽省沿淮淮北小麦赤霉病发生规律及综合防治技术研究》文中研究说明小麦是我省种植面积最大的粮食作物,沿淮淮北是我省小麦的主产区。近年来我省小麦赤霉病总体偏重至大发生,严重制约了我省小麦的产量和品质,受到省委、省政府高度重视。基于课题组对我省小麦赤霉病发生情况的多年监测数据,本文选取霍邱县、寿县、阜南县、利辛县、怀远县、泗县等6个县为代表,分析小麦赤霉病发生及为害情况,研究我省沿淮淮北小麦赤霉病发生规律,开展不同杀菌剂及施药器械防治小麦赤霉病的田间药效试验,并提出我省沿淮淮北小麦赤霉病综合防治技术方案。研究结果对于提升我省科学防治小麦赤霉病的能力、保障我省小麦生产安全、促进农业提质增效具有指导意义和应用价值。主要研究结果如下:1.安徽省沿淮淮北小麦赤霉病的发生规律2015-2019年,小麦赤霉病在沿淮淮北的霍邱县等6个县均有发生,且小麦赤霉病在不同县的为害情况存在一定差异。其中,寿县小麦赤霉病的为害情况较为严重,发生面积分别为120、155、143、204、110万亩次,平均发生程度在4级以上,造成的实际损失分别为3.6、11.1、0.3、6.8、0.7万吨。在小麦抽穗扬花期,上述6个县气温≥15℃和雨日的天数总体呈现下降趋势,但是,气温≥15℃的天数均在20天以上,能够满足小麦赤霉病发生的田间气候要求;此外,小麦赤霉病菌对多菌灵的抗性不断加剧,以及易感小麦赤霉病品种的种植,上述因素均会导致小麦赤霉病的为害加重。2.不同杀菌剂和施药器械对小麦赤霉病防治效果的影响不同杀菌剂防治小麦赤霉病的田间药效试验结果表明,30%氰烯菌酯·丙硫菌唑悬浮剂、30%丙硫菌唑可分散油悬浮剂和48%氰烯·戊唑醇悬浮剂对小麦赤霉病的防治效果分别为91.43%、87.83%和83.39%;80%多菌灵可湿性粉剂和70%甲基硫菌灵可湿性粉剂对小麦赤霉病的防治效果分别为72.91%和74.29%;丙硫菌唑（甾醇脱甲基化抑制剂）和氰烯菌酯（2-氰基丙烯酸酯类杀菌剂）对小麦赤霉病均表现出良好的防治效果。此外,供试药剂对于DON等真菌毒素污染具有很好的控制作用。清水对照处理小区的小麦籽粒中DON和3A-DON的含量分别为0.199 mg/kg和0.027 mg/kg;多菌灵和甲基硫菌灵处理小区的小麦籽粒中DON的含量分别为0.091 mg/kg和0.089 mg/kg,3A-DON含量均低于0.02 mg/kg;丙硫菌唑和氰烯菌酯处理小区的小麦籽粒中真菌毒素含量均在0.02 mg/kg以下。各处理小麦籽粒中真菌毒素含量均低于我国国家标准GB 2761-2017中规定的限量标准（1 mg/kg）。不同施药器械防治小麦赤霉病的田间药效试验结果表明,与常规电动喷雾器施药相比,植保无人机施药对小麦赤霉病防治效果有一定的增益作用。利用P20和T16两种植保无人机喷施30%丙硫菌唑可分散油悬浮剂,防治效果分别为94.81%和90.16%;对于48%氰烯·戊唑醇悬浮剂而言,使用P20和T16植保无人机施药,48%氰烯·戊唑醇悬浮剂的防治效果分别为93.02%、89.89%,与电动喷雾器施药的防治效果相比,分别增加了 9.63%和6.50%。3.安徽省沿淮淮北小麦赤霉病综合防治技术方案针对我省沿淮淮北小麦赤霉病发生规律的新变化,根据“预防为主、综合防治”植保方针,提出我省沿淮淮北小麦赤霉病综合防治技术方案:（1）强化监测预警。利用“安徽省农作物病虫监测预警系统V4.0”、“小麦赤霉病菌毒素污染预警系统”等监测预警平台,精准预报小麦赤霉病发生趋势及化学防治适期。（2）坚持农业防治。选用“淮麦30”、“徐农029”等耐赤霉病小麦品种,压缩“百农207”、“矮抗58”等感病品种的种植面积;适度扩大“小麦-大豆”、“小麦-甘薯”等连作模式规模;及时清理前茬作物残体和杂草,减少田间菌源基数,降低初侵染风险;及时清沟排渍,防止田间积水;以基肥为主,合理增施磷、钾肥;适期早播,使花期避开阴雨期;收获小麦后,合理收储小麦籽粒。（3）开展科学化学防治。紧抓小麦齐穗至扬花初期进行第1次化学防治（见花打药）,5-7天后进行第2次化学防治,施药时避开雨日;按照药剂说明书推荐用药上限用足药量,配足水量,均匀喷雾;合理选择甾醇脱甲基化抑制剂或2-氰基丙烯酸酯类杀菌剂,注意交替轮换使用药剂;优先选用植保无人机等高效施药器械进行科学施药,配合使用专用助剂,推广专业化统防统治服务形式。
叶林[8]（2020）在《基于肠道菌群解析季也蒙毕赤酵母对红鱼干中AFB1与T-2毒素毒作用的干预效应》文中进行了进一步梳理鱼干是沿海区域的风味腌制水产品,在加工贮藏过程中其极易受到环境中的真菌及其真菌毒素污染。据不完全统计鱼干普遍受到镰孢菌（Fusarium spp.）和曲霉（Aspergilus spp.）的严重污染,同时带有高污染量的AFB1毒素（AFB1）与T-2毒素（T-2）。AB1与T-2均属于强毒性真菌次生代谢产物,会导致肝脏、免疫系统严重损伤,并且还能诱发肠道菌群结构紊乱。因此,摄入AB1与T-2污染的鱼干会给公众健康带来潜在的安全风险,所以,鱼干制品中AB1与T-2毒性消减是防控其危害关键科学问题之一。研究表明,酵母（Saccharomyce）及其代谢产物可以保护动物机体免受真菌毒素的侵害,不仅能够显着缓解动物真菌毒素中毒症状,还能改善动物的胃肠道功能和消化能力,但关于酵母在动物体内消除真菌毒素毒性的作用机制仍鲜有报道。同时,宏基因组学研究结果已表明肠道菌群与宿主的免疫系统和肝脏功能有关,其数量和组成的改变可能会反向调控宿主的健康,表明肠道菌群可能是酵母消除真菌毒素毒性的潜在作用靶点。因此,本研究拟采用酵母发酵液对分别饲喂鱼干中AFB1和T-2小鼠进行干预,考察酵母发酵液对机体暴露于鱼干中AFB1与T-2后的损伤干预效应机制,为进一步通过添加酵母发酵液的途径降低鱼干中AFB1与T-2对健康损伤提供理论依据。本研究选择红鱼干中污染量最高的两种真菌毒素:AFB1和T-2,以及团队前期分离出的一株季也蒙毕赤酵母（Pichia guilliermondii MH 211588.1,PG）,将红鱼干+AFB1、红鱼干+T-2、PG发酵液+红鱼干+AFB1、PG发酵液+红鱼干+T-2分别灌胃至SPF小鼠以及伪无菌小鼠（pseudo-germfree mice,PM）,7d后,使用血液分析仪测定小鼠外周血细胞变化;使用酶标仪测定小鼠肝功能酶活变化;采用高通量测序法测定小鼠肠道菌群数量与组成变化,探讨PG发酵液对饲喂鱼干中AFB1与T-2小鼠的免疫损伤、凝血障碍、肝损伤和肠道菌群紊乱的干预效应,使用pearson相关系数分析方法筛选与之相关的菌群,并应用自主建立的PM小鼠模型验证肠道菌群是否为PG发酵液发挥其干预作用的靶点。结论:（1）红鱼干中AFB1与T-2毒素对小鼠的免疫毒性和肝毒性及PG发酵液的干预作用:红鱼干中AFB1能诱导小鼠血液中白细胞（WBC）、淋巴细胞（LYM）数量显着降低（P<0.05）;血小板（PLT）数量,酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）酶活与谷草转氨酶与谷丙转氨酶比值（AST/ALT）显着升高（P<0.05）,说明红鱼干中AFB1具有明显的免疫毒性和肝毒性。同时,红鱼干中T-2毒素能引起小鼠血液指标显着降低与肝脏中中功能酶活显着增加,说明红鱼干中T-2毒素具有明显的免疫毒性、血液毒性和肝毒性。加入PG发酵液后,小鼠各指标均与空白组无差异（P>0.05）,说明PG发酵液对红鱼干中AFB1与T-2毒素诱导小鼠的免疫毒性和肝毒性具有良好的干预作用。（2）红鱼干中AFB1与T-2毒素对小鼠肠道菌群紊乱及PG发酵液的干预作用:肠道菌群测定结果表明,红鱼干中AFB1与T-2均能使小鼠肠道Alpha多样性与Beta多样性显着降低;同时红鱼干中AFB1与T-2显着改变小鼠肠道菌群组成,主要是影响 Prevotellaceae、Bacteroidales S24-7、Clostridiaceae、Alcaligenaceae 等菌群相对丰度,并且这些菌群相对丰度与血液指标和肝功能酶活具有显着相关性（P<0.05）。加入PG发酵液进行干预后,小鼠肠道菌群多样性以及组成丰度均与对照组无差异（P>0.05）,并且显着降低 Prevotellaceae、Bacteroidales S24-7、Clostridiaceae、Alcaligenaceae等菌群与血液指标和肝功能酶活的相关性,说明PG发酵液对AFB1与T-2诱导肠道菌群结构和组成变化有较好的干预作用,并可能通过调节Prevotellaceae、Bacteroidales S24-7等菌群丰度来干预AFB1与T-2毒性。（3）红鱼干中AFB1与T-2毒素对伪无菌小鼠免疫毒性和肝毒性及PG发酵液的干预作用:万古霉素、新霉素、甲硝唑混混合灌胃3天后,正常SPF小鼠肠道大部分的优势菌群杀灭,肠道菌群数量与种类均显着下降（P<0.05）,构建的PM小鼠模型符合实验要求。与SPF小鼠相比,饲喂红鱼干中AFB1与T-2的PM小鼠外周血中WBC、LYM、PLT等血液指标显着升高（P<0.05）,ACP、AKP以及AST/AKT酶活显着降低（P<0.05）,说明红鱼干中AFB1与T-2的免疫、血液、肝脏毒性与肠道菌群数量以及种类相关;同时PG发酵液对饲喂红鱼干中AFB1与T-2的PM小鼠外周血中WBC、LYM、PLT等血液指标显着下降（P<0.05）,ACP、AKP以及AST/AKT酶活显着上升（P<0.05）,说明PG发酵液对红鱼干中AFB1与T-2毒性的干预作用被减弱,证明肠道菌群数量与种类是PG发酵液发挥其对红鱼干中AFB1与T-2毒性的干预作用的靶点。
李晋杰[9]（2020）在《新型SERS传感器制备及其在真菌毒素检测中的应用研究》文中认为近年来,食品安全已成为消费者普遍关注的问题,随着人们生活水平的不断提高,人们对食品安全的要求也越来越高。真菌毒素作为一类小分子次级代谢产物,对人和动物生命健康造成巨大的危害。表面增强拉曼散射（Surface enhanced Raman scattering,SERS）是一种当前发展快速的新型光谱分析技术,具有高灵敏度、提供分子指纹图谱、抗光漂白等优势,在痕量快速检测中具有广阔的应用前景。因此,制备新型SERS传感器并将其应用于复杂样品真菌毒素的快速、灵敏、高效检测,在食品安全领域至关重要。本文从制备高活性SERS基底入手,结合DNA纳米技术的优势,开发SERS检测真菌毒素的新方法,为食品安全检测提供新思路。主要研究内容及成果如下:1.3D仿生SERS基底的制备及其用于多种真菌毒素的同时检测针对真菌毒素含量低,传统SERS基底受样品干扰严重,无法实现灵敏检测的难题,从生物仿生入手,设计并制备了一种三维（3D）仿花椰菜SERS基底传感器,用于玉米中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）、玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZON）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）三种真菌毒素的快速、灵敏检测。以多孔阳极氧化铝（Anodic aluminum oxide,AAO）为模板,将聚二甲基硅氧烷（Polydimethylsiloxane,PDMS）旋涂于AAO表面,形成PDMS@AAO复合物。在此基础上利用离子溅射手段,在PDMS@AAO复合物表面溅射金纳米粒子,通过对溅射时间优化,制备出具有大量“热点”的仿花椰菜SERS基底。该SERS基底具有优良的SERS增强效果（EF=2.2×106）和优越的信号均一性（RSD=4.57%）,可以检测出浓度低至10-12 mol/L的4-巯基苯甲酸（4-mercaptobenzoic acid,4-MBA）。采用该基底首次实现了玉米中AFB1、ZON和DON的非标记同时检测。实验结果表明,该方法对AFB1、ZON和DON三种真菌毒素的检测限分别为1.8 ng/m L、24.8ng/m L和47.7 ng/m L,均达到国标（GB 2761-2017）的要求。为进一步验证该SERS传感器的可行性和实用性,采用加标回收与真实样品为分析物进行检测,实验结果满足实际分析检测要求。2.DNA镊子驱动的SERS探针用于的高灵敏检测为提高真菌毒素检测的灵敏度和特异性,基于DNA纳米技术,以适配体为识别元件,小粒径银纳米颗粒（Ag NPs）为SERS增强基底,4-硝基苯硫酚（4-nitrothiophenol,4-NTP）为信号探针,设计了一种DNA纳米镊子驱动的AFB1生物传感器。DNA纳米镊子可以动态控制两个Ag NPs之间的距离,从而调控Ag NPs上探针分子SERS信号强度。当体系内加入AFB1后,由于适配体特异性结合,使DNA纳米镊子由“打开”状态变为“闭合”状态。此时两个Ag NPs之间的距离也由8.1±2.7 nm减小为3.2±0.8 nm,使探针分子的SERS信号得到极大增强。结果表明,该SERS传感器具有良好的特异性,通过检测探针分子SERS信号强度的变化,实现了对AFB1浓度的定量分析,在最优条件下检测范围为1 ng/m L-0.01 pg/m L,检测限低至5.07 fg/m L。3.CHA信号放大与磁性纳米线结合SERS传感器用于多组分真菌毒素的同时检测为了进一步提高真菌毒素检测的灵敏度,实现多组分真菌毒素高通量检测的目的,设计了拉曼信号分子内嵌式金核银壳纳米粒子（Au@probe@Ag NPs）和具有纳米搅拌棒功能的金包磁性纳米线（Au@MBCs）结构,结合催化发卡自组装（Catalytic hairpin assembly,CHA）作为辅助信号放大工具,构建了可实现了三种真菌毒素的同时快速痕量分析的SERS生物传感器。当目标真菌毒素存在时,由于适配体与靶标的特异性结合,触发CHA反应,使Au@probe@Ag NPs探针表面的发卡DNA H1与Au@MBCs表面的发卡DNA H2相继打开。随着反应的进行,Au@MBCs表面结合越来越多的Au@probe@Ag NPs,同时产生强烈的SERS信号。通过检测内嵌拉曼信号分子SERS信号的变化,可以实现对AFB1、赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）与ZON三种真菌毒素的同时、灵敏检测,检测限分别为0.81 fg/m L、1.07 fg/m L和11.38 fg/m L。
于心蕊[10]（2020）在《真菌毒素玉米赤霉烯酮降解酶基因资源挖掘及其催化效率分子改良研究》文中研究表明玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是镰刀菌产生的类雌激素样真菌毒素,不仅损伤动物的肝肾,降低免疫机能,而且影响动物的生殖性能,给牲畜养殖业及食品安全带来了严重的危害。内酯水解酶可以高效、环保的方式去除饲料中的霉菌毒素ZEN,有效助力畜牧行业绿色健康养殖。本研究旨在获得可高效水解ZEN的酶,研究其生化特性以及催化机理,探索高效表达方案,推进其在畜牧养殖业的应用。为了进一步挖掘可高效水解ZEN的酶基因资源,以具有ZEN水解活性的内酯水解酶ZHD101的氨基酸序列出发,在NCBI数据库进行检索分析,获得了18个一致性较低的潜在ZEN水解酶基因序列,并通过在毕赤酵母中异源表达进行活性筛选。结果表明:所有基因均实现了异源表达,5个检测到明显活性。其中,来源于Phialophora americana的假想蛋白ZHD607对ZEN的降解效率高达100%,比活达到4940 U/mg。为了进一步研究其催化机理,本研究选取了与ZHD607一致性较高（74%）的内酯水解酶RmZHD为对比材料。RmZHD具有更高的比活性（12,288 U/mg）,是ZHD607的2.5倍。通过对ZHD607进行同源建模并与RmZHD的晶体及序列比对分析,寻找与底物结合的关键氨基酸区段及位点,设计了8个突变体。结果表明:突变体ZHDM1（14,419 U/mg）和I160Y（16,652 U/mg）催化效率相较于野生型显着提高,分别为野生型的2.9倍和3.4倍。进一步通过分子动力学模拟分析其催化效率提高的机制,突变后160位点侧链的变化以及loop 136-142上Pro135和Leu138残基的侧链扭转可以显着增强与底物之间的疏水相互作用,进而提高了酶与底物的结合能力。表达量低一直是制约内酯水解酶推广应用的瓶颈问题。本研究基于融合表达策略分别将来源于Aspergillus niger的酸性木聚糖酶XYNB和Bacillus sp.的碱性木聚糖酶A11与ZHD101在毕赤酵母X33中进行高效表达。相较于单独表达的ZHD101,融合蛋白XYNB+ZHD101的ZEN水解活性活性提高了1.2倍,诱导48 h后的酶活可达983.77 U/mL。qPCR以及比活力测定结果与SDS-PAGE分析一致,说明融合表达可以显着提高ZHD101的蛋白表达量。此外,融合蛋白XYNB+ZHD101中的木聚糖酶活性与ZEN水解活性呈显着的线性化关系,可在发酵过程中通过检测木聚糖酶的活性表征ZHD101的活性,为其大规模产业化生产奠定了基础。本研究以已报道晶体结构的具有ZEN水解活性的内酯水解酶ZHD101为研究背景,基于ZHD101的序列检索了新颖的ZEN水解酶基因,并获得了多个高活力的ZEN水解酶基因,丰富了ZHD家族成员;基于结构基础对ZHD607的催化效率进行分子改良研究,获得了两个活性显着提高的突变体,并阐释了其对ZEN高效水解的催化机理;基于融合表达的方式显着提高了ZHD101在毕赤酵母中的表达量,结合建立的间接酶活测定方法为工业化大规模生产提供了强有力的支持。
二、真菌毒素及真菌毒素检测试剂盒产业化开发（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、真菌毒素及真菌毒素检测试剂盒产业化开发（论文提纲范文）
（1）仓储小麦和稻谷中主要真菌毒素污染水平及快速识别技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 谷物中主要的真菌毒素 |
| 1.1.1 AFs类 |
| 1.1.2 TCT类 |
| 1.1.3 赭曲霉毒素类 |
| 1.1.4 FBs类 |
| 1.1.5 ZEN及其衍生物 |
| 1.2 谷物中真菌毒素的检测方法 |
| 1.2.1 样品前处理方法 |
| 1.2.2 检测方法 |
| 1.3 谷物中真菌毒素的污染现状 |
| 1.4 谷物中真菌毒素的限量标准 |
| 1.5 本研究的研究内容、目的和意义 |
| 1.5.1 研究内容 |
| 1.5.2 研究目的和意义 |
| 第二章 谷物中真菌毒素菌株的初步分离鉴定 |
| 2.1 实验部分 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 仪器与设备 |
| 2.1.3 试验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 菌株的形态学鉴定结果 |
| 2.2.2 PCR扩增及序列比对结果 |
| 2.2.3 菌株鉴定结果及分析 |
| 2.2.4 主要污染真菌的形态特征 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 仓储小麦和稻谷真菌毒素的污染情况分析 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.1.1 材料与试剂 |
| 3.1.2 仪器与设备 |
| 3.1.3 样品 |
| 3.1.4 真菌毒素标准溶液的配制 |
| 3.1.5 样品前处理吧 |
| 3.1.6 UPLC-MS/MS检测条件 |
| 3.2 小麦和稻谷中真菌毒素的筛查结果与分析 |
| 3.3 第一批样品中真菌毒素的污染情况 |
| 3.3.1 小麦和稻谷中真菌毒素的污染情况 |
| 3.3.2 不同谷物中真菌毒素整体污染水平比较 |
| 3.3.3 同一仓库中不同采样位置真菌毒素污染水平比较 |
| 3.3.4 不同产地真菌毒素污染水平比较 |
| 3.3.5 不同年份谷物中真菌毒素污染水平比较 |
| 3.3.6 不同批次谷物中主要真菌毒素污染水平比较 |
| 3.4 粮仓中谷物真菌毒素的超标情况 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 基于N-Cu-MOF的电化学传感器快速识别小麦中DON |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料和仪器 |
| 4.1.2 N-Cu-MOF的合成 |
| 4.1.3 电化学适配体传感器的制备 |
| 4.1.4 电化学测量 |
| 4.1.5 样品前处理 |
| 4.2 结果和讨论 |
| 4.2.1 N-Cu-MOF的表征 |
| 4.2.2 制备的电极的电化学行为 |
| 4.2.3 测定条件的优化 |
| 4.2.4 优化后的电化学感应传感器的分析性能 |
| 4.2.5 选择性和重现性 |
| 4.2.6 在实际样品中的应用 |
| 4.3 结论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词 |
| 致谢 |
（2）氯霉素和真菌毒素适配体—靶标结合机制及检测应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 适配体简介 |
| 1.2 适配体的序列优化 |
| 1.2.1 截短 |
| 1.2.2 突变 |
| 1.2.3 多价适配体 |
| 1.2.4 化学修饰 |
| 1.3 适配体结合机制的研究方法 |
| 1.3.1 等温滴定量热法 |
| 1.3.2 圆二色谱法 |
| 1.3.3 分子对接法 |
| 1.3.4 分子动力学法 |
| 1.3.5 核磁共振波谱法与X射线晶体衍射法 |
| 1.4 适配体在食品安全危害物检测中的应用 |
| 1.4.1 食品安全危害物概述 |
| 1.4.2 适配体在食源性致病菌检测中的应用 |
| 1.4.3 适配体在生物毒素检测中的应用 |
| 1.4.4 适配体在抗生素检测中的应用 |
| 1.4.5 适配体在农药残留检测中的应用 |
| 1.4.6 适配体在重金属离子检测中的应用 |
| 1.5 立题的背景意义和主要研究内容 |
| 1.5.1 立题的背景意义 |
| 1.5.2 本论文的主要研究内容 |
| 第二章 基于聚合酶链式反应和链霉亲和素增强的荧光偏振法检测氯霉素 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与设备 |
| 2.2.1 主要材料与试剂 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 检测条件的优化 |
| 2.3.2 基于荧光偏振法检测氯霉素 |
| 2.3.3 实际样品的预处理 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 基于PCR和链霉亲和素双重扩增荧光偏振法检测氯霉素原理 |
| 2.4.2 GO的表征 |
| 2.4.3 检测条件的优化 |
| 2.4.4 基于荧光偏振适配体传感器对氯霉素的检测性能分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 无引物区氯霉素适配体与靶标结合机制及检测应用研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与设备 |
| 3.2.1 主要材料与试剂 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 等温滴定量热实验 |
| 3.3.2 圆二色谱实验 |
| 3.3.3 分子对接实验 |
| 3.3.4 检测条件的优化 |
| 3.3.5 氯霉素的检测 |
| 3.3.6 实际样品的预处理 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 适配体与氯霉素的识别机制分析 |
| 3.4.2 基于Exo-I酶促靶标循环和HCR扩增荧光检测氯霉素的原理 |
| 3.4.3 HCR扩增产物的表征 |
| 3.4.4 检测条件的优化 |
| 3.4.5 检测性能分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 氯霉素适配体截短优化、结合机制与检测应用研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与设备 |
| 4.2.1 主要材料与试剂 |
| 4.2.2 主要仪器和设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 亲和力的测定 |
| 4.3.2 圆二色谱和分子对接 |
| 4.3.3 检测条件的优化 |
| 4.3.4 无标记的荧光偏振法检测氯霉素 |
| 4.3.5 实际样品的预处理 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 截短优化适配体对氯霉素的亲和力分析 |
| 4.4.2 金属离子浓度对氯霉素适配体亲和力和结构的影响 |
| 4.4.3 适配体LLR10 识别氯霉素的机制分析 |
| 4.4.4 适配体免标记荧光偏振检测氯霉素的设计原理 |
| 4.4.5 检测条件优化的结果 |
| 4.4.6 检测性能分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 分子对接指导的适配体序列优化及其结合机制研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与设备 |
| 5.2.1 主要材料与试剂 |
| 5.2.2 主要仪器和设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 荧光偏振亲和力实验 |
| 5.3.2 圆二色谱和分子对接 |
| 5.3.3 二氧化锰纳米片的合成 |
| 5.3.4 核酸外切酶III荧光扩增 |
| 5.3.5 实验条件的优化 |
| 5.3.6 基于SG扩增荧光信号检测T-2 毒素 |
| 5.3.7 实际样品的预处理 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 适配体截短优化的策略 |
| 5.4.2 适配体与靶标的结合机制分析 |
| 5.4.3 基于SG扩增荧光信号检测T-2 毒素的原理 |
| 5.4.4 检测条件优化的结果 |
| 5.4.5 检测性能分析 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 适配体-黄曲霉毒素家族类似物的结合机制研究 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验材料与设备 |
| 6.2.1 主要材料与试剂 |
| 6.2.2 主要仪器和设备 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 圆二色谱和亲和力实验 |
| 6.3.2 分子动力学的计算步骤 |
| 6.3.3 动力学轨迹分析 |
| 6.3.4 结合自由能计算 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 适配体B32 的亲和力分析 |
| 6.4.2 适配体B32与4 种靶标结合前后的圆二色谱分析 |
| 6.4.3 B32与4 种靶标复合物结构的稳定性分析 |
| 6.4.4 B32与4 种靶标的结合自由能分析 |
| 6.4.5 B32与4 种靶标结合的结构分析 |
| 6.5 本章小结 |
| 第七章 AFB1 适配体的虚拟突变及其识别机理研究 |
| 7.1 前言 |
| 7.2 实验材料与设备 |
| 7.2.1 主要材料与试剂 |
| 7.2.2 主要仪器和设备 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.3.1 虚拟突变原则 |
| 7.3.2 圆二色谱和亲和力测定 |
| 7.3.3 分子动力学模拟 |
| 7.3.4 分子动力学轨迹分析 |
| 7.4 结果与讨论 |
| 7.4.1 虚拟突变分析 |
| 7.4.2 突变适配体的圆二色谱分析 |
| 7.4.3 复合物的分子动力学轨迹分析 |
| 7.4.4 复合物的结合自由能计算 |
| 7.4.5 复合物的构象分析 |
| 7.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 本论文创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录:作者在攻读博士学位期间发表的论文 |
（3）臭氧对甜瓜白霉病病原菌Fusarium sulphureum的生长抑制及机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 甜瓜的采后病害及防治 |
| 1.1 甜瓜病害 |
| 1.2 甜瓜病害的防治 |
| 2 臭氧的化学及生物学特性 |
| 3 臭氧防治研究进展及机理研究 |
| 3.1 臭氧在果蔬保鲜方面研究进展 |
| 3.2 臭氧抑菌作用机理及研究进展 |
| 3.2.1 臭氧抑菌研究进展 |
| 3.2.2 臭氧保鲜及杀菌机理研究 |
| 4 研究目标与内容 |
| 4.1 研究目标 |
| 4.2 研究内容 |
| 4.2.1 臭氧处理对甜瓜白霉病的控制 |
| 4.2.2 臭氧处理对F.sulphureum生长及ROS代谢的影响 |
| 4.2.3 臭氧处理对F.sulphureum的转录组学分析 |
| 5 技术路线 |
| 第二章 臭氧处理对甜瓜白霉病发展及毒素积累的抑制 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.1.2.1 孢子悬浮液的配制 |
| 2.1.2.2 臭氧处理方法 |
| 2.1.2.3 甜瓜接种及毒素提取 |
| 2.1.2.4 NEO毒素检测 |
| 2.1.2.5 数据处理 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 臭氧处理对F.sulphureum引起甜瓜白霉病的病害发展影响 |
| 2.2.2 白霉病甜瓜果实中NEO毒素的检测分析 |
| 2.2.3 臭氧处理对F.sulphureum引起甜瓜白霉病果实的毒素积累影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 臭氧对F.sulphureum生长及ROS代谢的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.2.1 臭氧处理浓度筛选 |
| 3.1.2.2 孢子萌发测定 |
| 3.1.2.3 产孢量测定 |
| 3.1.2.4 菌丝生物量积累测定 |
| 3.1.2.5 细胞内容物泄露量测定 |
| 3.1.2.6 MDA含量测定 |
| 3.1.2.7 细胞相对电导率测定 |
| 3.1.2.8 细胞膜完整性测定(PI染色) |
| 3.1.2.9 扫描电子显微镜(SEM)及透射电子显微镜(TEM)超微结构观察 |
| 3.1.2.10 超氧阴离子(O_2~-)含量、过氧化氢(H_2O_2)含量的测定 |
| 3.1.2.11 ROS染色 |
| 3.1.2.12 ROS代谢相关酶活(NOX、CAT、POD、SOD、APX、GR)的测定 |
| 3.1.2.13 数据处理 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 臭氧对F.sulphureum抑制的处理浓度筛选 |
| 3.2.2 臭氧对F.sulphureum孢子萌发的影响 |
| 3.2.3 臭氧对F.sulphureum产孢量及生物量积累的影响 |
| 3.2.4 臭氧对F.sulphureum细胞膜完整性的影响 |
| 3.2.4.1 臭氧对F.sulphureum相对电导率和MDA含量的影响 |
| 3.2.4.2 臭氧对F.sulphureum蛋白质和核酸泄露的影响 |
| 3.2.4.3 臭氧对F.sulphureum细胞膜完整性的影响 |
| 3.2.5 臭氧对F.sulphureum孢子超微结构的影响 |
| 3.2.5.1 扫描电子显微镜观察 |
| 3.2.5.2 透射电子显微镜观察 |
| 3.2.6 臭氧对F.sulphureum ROS代谢的影响 |
| 3.2.6.1 臭氧对F.sulphureum ROS积累的影响 |
| 3.2.6.2 臭氧对F.sulphureum ROS代谢相关酶活的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 臭氧对F.sulphureum生长的影响 |
| 3.3.2 臭氧对F.sulphureum细胞膜完整性的影响 |
| 3.3.3 臭氧对F.sulphureum超微结构变化的影响 |
| 3.3.4 臭氧对F.sulphureum ROS代谢的影响 |
| 3.4 结论 |
| 第四章 臭氧对F.sulphureum的转录组学分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.1.2.1 RNA提取及转录组分析方法 |
| 4.1.2.2 RT-qPCR基因验证方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 差异基因筛选 |
| 4.2.2 差异表达基因的KEGG分析 |
| 4.2.3 臭氧处理对F.sulphureum氧化胁迫过程中相关基因表达量的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 结论 |
| 本文创新点 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 导师简介 |
（4）淡豆豉炮制中黄曲霉毒素B1的产毒菌和拮抗菌（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 注释表 |
| 引言 |
| 一、课题研究背景 |
| 二、课题研究内容 |
| 三、课题研究目的及意义 |
| 文献综述 中药材的黄曲霉毒素污染和控制 |
| 1 黄曲霉毒素的危害 |
| 2 中药材的黄曲霉毒素的污染现状 |
| 3 中药材黄曲霉毒素的检测方法研究 |
| 4 中药材黄曲霉毒素的防控措施 |
| 5 结语 |
| 第一章 UPLC-MS/MS测定淡豆豉自然炮制过程中黄曲霉毒素的含量 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 淡豆豉自然发酵炮制 |
| 2.2 建立UPLC-MS/MS法测定各时间点样品中AFT的含量 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 淡豆豉自然发酵炮制不同时间点样品性状 |
| 3.2 UPLC-MS/MS检测方法学考察 |
| 3.3 淡豆豉自然炮制不同时间点样品4 种AFT的含量测定 |
| 3.4 UPLC-M/MS测定淡豆豉不同炮制时间点4种AFT含量总离子流图 |
| 4 讨论 |
| 第二章 淡豆豉炮制中AFT产毒菌的筛选鉴定和产毒能力测定 |
| 1 实验材料与仪器 |
| 1.1 实验材料及试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 淡豆豉自然发酵炮制过程中样本的制备 |
| 2.2 淡豆豉炮制过程中AFT产毒菌的筛选与计数 |
| 2.3 产AFT菌株的分离与鉴定 |
| 2.4 产毒能力的测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 淡豆豉炮制过程中各样本产AFT菌的菌落计数 |
| 3.2 产AFT微生物的鉴定 |
| 3.3 UPLC-MS/MS检测方法学考察 |
| 3.4 各菌发酵液AFT的液质色谱图 |
| 4 讨论 |
| 第三章 淡豆豉炮制中AFB_1拮抗菌的拮抗能力 |
| 1 实验试剂与仪器 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 实验菌株 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 液质联用检测方法 |
| 2.2 5 株菌的拮抗能力测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 UPLC-MS/MS检测降解AFB_1方法学考察 |
| 3.2 5 株待测菌对AFB_1的降解作用 |
| 3.3 5 株待测菌对黄曲霉生长的影响 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简介 |
| 基本信息 |
| 教育经历 |
| 发表文章 |
| 荣誉奖励 |
（5）基于电子鼻和HS-GC-IMS技术在几种农产品受真菌污染检测中的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 研究背景与意义 |
| 1.2 电子鼻技术在微生物检测中的国内外研究现状 |
| 1.3 顶空-气相色谱-离子迁移谱技术在微生物检测中的国内外研究现状 |
| 1.4 现有研究存在的问题与不足 |
| 1.4.1 对农产品受同属不同种的微生物污染检测研究较少 |
| 1.4.2 HS-GC-IMS技术对农产品受真菌污染检测研究较少 |
| 1.4.3 对农产品受混合真菌污染检测研究较少 |
| 1.5 课题来源 |
| 1.6 主要研究内容 |
| 1.7 本章小结 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料与常见仪器设备 |
| 2.1.1 实验材料与处理 |
| 2.1.2 化学试剂与常见仪器设备 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.2.1 电子鼻系统 |
| 2.2.2 气相色谱-质谱联用仪 |
| 2.2.3 顶空-气相色谱-离子迁移谱技术 |
| 2.2.4 荧光分光光度计 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 真菌的分离纯化 |
| 2.3.2 真菌的PCR鉴定 |
| 2.3.3 微生物的形态学鉴定 |
| 2.3.4 孢子悬浮液的制备 |
| 2.3.5 样品挥发物的电子鼻技术检测方法 |
| 2.3.6 样品挥发物的气相色谱-离子迁移谱技术检测方法 |
| 2.3.7 样品挥发物的气质联用技术检测方法 |
| 2.3.8 样品的荧光分光光度技术检测方法 |
| 2.3.9 微生物计数 |
| 2.4 数据分析方法 |
| 2.4.1 特征信号的预处理 |
| 2.4.2 特征降维和选择 |
| 2.4.3 建模方法 |
| 2.4.4 多源信息融合方法 |
| 2.4.5 数据集划分和模型性能评价 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 基于电子鼻技术对受不同曲霉属真菌侵染稻米的早期鉴定 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验方案 |
| 3.2.1 真菌的鉴定 |
| 3.2.2 实验方案设计 |
| 3.2.3 稻米的电子鼻检测 |
| 3.2.4 稻米挥发物的气质联用检测 |
| 3.2.5 稻米的菌落总数检测 |
| 3.2.6 数据处理 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 真菌的鉴定 |
| 3.3.2 受不同曲霉属真菌侵染稻米的菌落总数变化 |
| 3.3.3 稻米受不同曲霉属真菌侵染的挥发物成分变化 |
| 3.3.4 电子鼻对稻米受不同曲霉属真菌侵染的响应变化 |
| 3.3.5 PCA可视化与Logistic回归模型预测真菌生长 |
| 3.3.6 基于PLSR对受不同真菌侵染稻米的菌落总数预测 |
| 3.3.7 基于BPNN、SVM和LVQ模型区分稻米早期污染的真菌种类 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 基于电子鼻和HS-GC-IMS技术快速检测稻米受真菌侵染水平 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验方案 |
| 4.2.1 实验方案设计 |
| 4.2.2 电子鼻检测 |
| 4.2.3 HS-GC-IMS检测 |
| 4.2.4 稻米样品的菌落数检测 |
| 4.2.5 数据处理 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 受不同真菌侵染稻米的真菌生长情况 |
| 4.3.2 HS-GC-IMS方法的精密度研究 |
| 4.3.3 通过HS-GC-IMS和电子鼻进行挥发性成分分析 |
| 4.3.4 主成分分析 |
| 4.3.5 真菌感染水平分类:HS-GC-IMS与电子鼻技术比较 |
| 4.3.6 真菌定量预测:HS-GC-IMS与电子鼻技术比较 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 HS-GC-IMS和荧光光谱联用对花生籽粒受潜在产黄曲霉毒素真菌污染的快速检测 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验方案 |
| 5.2.1 真菌的鉴定 |
| 5.2.2 实验方案设计 |
| 5.2.3 花生籽粒的HS-GC-IMS检测 |
| 5.2.4 花生籽粒提取液的荧光分光光度法检测 |
| 5.2.5 花生籽粒的菌落总数检测 |
| 5.2.6 数据处理 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 真菌的鉴定结果 |
| 5.3.2 受不同真菌侵染花生籽粒的真菌生长情况 |
| 5.3.3 受不同真菌污染花生籽粒的气相离子迁移谱图 |
| 5.3.4 荧光光谱特征分析 |
| 5.3.5 PCA和OPLS-DA分析 |
| 5.3.6 基于HS-GC-IMS和荧光光谱技术构建受潜在产黄曲霉毒素真菌污染的花生籽粒分类模型 |
| 5.3.7 利用HS-GC-IMS技术定量分析受真菌污染花生籽粒的潜在标记物 |
| 5.3.8 基于HS-GC-IMS和荧光光谱技术定量预测受潜在产黄曲霉毒素真菌侵染花生籽粒的菌落总数 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 基于靶向和非靶向策略的HS-GC-IMS技术对受真菌污染小麦籽粒的检测及应用验证 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验方案 |
| 6.2.1 真菌的鉴定 |
| 6.2.2 实验方案设计 |
| 6.2.3 小麦籽粒样品的HS-GC-IMS检测 |
| 6.2.4 小麦籽粒的菌落总数检测 |
| 6.2.5 数据处理 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 真菌的鉴定结果 |
| 6.3.2 小麦籽粒受不同真菌侵染的菌落数变化 |
| 6.3.3 受不同真菌侵染小麦籽粒的可视化分析 |
| 6.3.4 基于非靶向指纹图谱策略和靶向特征标记策略构建小麦籽粒中真菌种类区分模型 |
| 6.3.5 基于非靶向指纹图谱策略和靶向特征标记策略构建小麦籽粒中菌落总数的预测模型 |
| 6.3.6 在模拟实际样品中的验证 |
| 6.4 本章小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 主要创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读学位期间主要研究成果 |
（6）基于四种信号传导体系的快速检测新方法学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语(Abbreviations) |
| 第1章 引言 |
| 1.1 快速检测技术 |
| 1.1.1 快速检测技术概述 |
| 1.1.2 快速检测技术工作流程 |
| 1.2 生物识别元件 |
| 1.2.1 生物识别元件概述 |
| 1.2.2 抗体及其在快速检测方法中的应用 |
| 1.2.3 功能核酸及其在快速检测方法中的应用 |
| 1.2.4 分子印记聚合物及其在快速检测方法中的应用 |
| 1.3 酶介导信号传输 |
| 1.3.1 酶概述 |
| 1.3.2 酶介导的电化学分析方法及其应用 |
| 1.3.3 酶介导的等离子共振分析方法及其应用 |
| 1.3.4 酶介导的化学发光分析方法及其应用 |
| 1.3.5 酶介导的荧光分析方法及其应用 |
| 1.3.6 酶介导的pH响应分析方法及其应用 |
| 1.3.7 酶介导的分析方法发展方向 |
| 1.4 CRISPR/Cas介导的分析方法研究进展 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas概述 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas9介导的分析检测方法及其研究进展 |
| 1.4.3 CRISPR/Cas12a介导的分析检测方法及其研究进展 |
| 1.4.4 CRISPR/Cas13a介导的分析检测方法及其研究进展 |
| 1.5 黄曲霉毒素及其检测方法研究进展 |
| 1.5.1 黄曲霉毒素简介 |
| 1.5.2 黄曲霉毒素的污染现状 |
| 1.5.3 黄曲霉毒素污染样品前处理方法 |
| 1.5.4 AFB_1检测方法研究进展 |
| 1.6 三磷酸腺苷及其检测方法研究进展 |
| 1.7 Na~+及其检测方法研究进展 |
| 1.8 研究内容与意义 |
| 1.8.1 研究内容 |
| 1.8.2 研究意义 |
| 第2章 基于MB@PAA@Nb的磁性免疫亲和提取方法研究 |
| 2.1 主要试剂材料与仪器设备 |
| 2.1.1 试剂材料 |
| 2.1.2 仪器设备 |
| 2.2 实验方法及步骤 |
| 2.2.1 MB@PAA的合成与表征 |
| 2.2.2 Anti-AFB_1 Nb的表达和纯化 |
| 2.2.3 MB@PAA@Nb的制备及其吸附模型评价 |
| 2.2.4 MB@PAA@Nb性能评价 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 Anti-AFB_1 Nb的表达 |
| 2.3.2 MB@PAA的表征 |
| 2.3.3 MB@PAA@Nb的制备 |
| 2.3.4 MB@PAA@Nb吸附AFB1的等温吸附曲线建立 |
| 2.3.5 MB@PAA@Nb性能评价 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 基于GOx介导pH响应ELISA高灵敏检测AFB1的方法学研究 |
| 3.1 主要试剂材料与仪器设备 |
| 3.1.1 试剂材料 |
| 3.1.2 仪器设备 |
| 3.2 实验方法与步骤 |
| 3.2.1 GOx-AFB_1全抗原的制备 |
| 3.2.2 BCPpH突变点的确定 |
| 3.2.3 GOx介导pH响应ELISA的建立 |
| 3.2.4 样品制备 |
| 3.2.5 实验参数优化 |
| 3.2.6 pH响应ELISA性能评价 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 BCPpH突变点确定 |
| 3.3.2 GOx-AFB1的表征 |
| 3.3.3 免疫反应及酶催化反应条件优化 |
| 3.3.4 pH响应ELISA性能评价 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 基于GOx介导等离子共振ELISA高灵敏检测AFB_1的方法学研究 |
| 4.1 主要试剂材料与仪器设备 |
| 4.1.1 试剂材料 |
| 4.1.2 仪器设备 |
| 4.2 实验方法与步骤 |
| 4.2.1 AuNR的合成 |
| 4.2.2 AuNR刻蚀条件优化 |
| 4.2.3 GOx介导等离子共振ELISA的建立 |
| 4.2.4 等离子共振ELISA性能评价 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 AuNR的表征及GOx介导AuNR刻蚀可行性 |
| 4.3.2 AuNR刻蚀条件优化 |
| 4.3.3 免疫反应条件及酶催化条件优化 |
| 4.3.4 等离子共振ELISA性能评价 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 基于GOx介导荧光ELISA超灵敏检测AFB_1的方法学研究 |
| 5.1 主要试剂材料与仪器设备 |
| 5.1.1 试剂材料 |
| 5.1.2 仪器设备 |
| 5.2 实验方法与步骤 |
| 5.2.1 CuNP的合成 |
| 5.2.2 CuNP合成参数优化 |
| 5.2.3 GOx介导荧光ELISA的建立 |
| 5.2.4 荧光ELISA的性能评价 |
| 5.3 实验结果与讨论 |
| 5.3.1 CuNP合成条件优化及表征 |
| 5.3.2 GOx介导CuNP合成可行性 |
| 5.3.3 GOx介导荧光ELISA的建立和性能评价 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 基于CRISPR/Cas12a介导的荧光分析方法检测ATP及Na~+研究 |
| 6.1 主要试剂材料与仪器设备 |
| 6.1.1 试剂材料 |
| 6.1.2 仪器设备 |
| 6.2 实验方法与步骤 |
| 6.2.1 ATP探针及信号溶液的制备 |
| 6.2.2 CRISPR/Cas12a介导的荧光分析方法检测ATP性能评价 |
| 6.2.3 便携荧光仪检测ATP流程 |
| 6.2.4 Na~+检测探针NaA43DNAzyme的制备 |
| 6.2.5 CRISPR/Cas12a介导的荧光分析方法检测Na~+性评价 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 CRISPR/Cas12a介导的荧光分析方法检测ATP可行性分析 |
| 6.3.2 CRISPR/Cas12a介导的检测ATP的荧光分析方法性能评价 |
| 6.3.3 CRISPR/Cas12a介导的荧光分析方法检测Na~+的建立及性能评价 |
| 6.4 本章小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.1.1 MB@PAA@Nb磁性免疫亲和提取法 |
| 7.1.2 pH响应ELISA高灵敏检测AFB_1 |
| 7.1.3 等离子共振ELISA高灵敏检测AFB_1 |
| 7.1.4 荧光ELISA超灵敏检测AFB_1 |
| 7.1.5 CRISPR/Cas12a介导荧光分析方法检测ATP及Na~+ |
| 7.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1 试剂材料 |
| 附录2 仪器设备 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 个人简历 |
（7）安徽省沿淮淮北小麦赤霉病发生规律及综合防治技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 术语及略语表 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 小麦生产情况概述 |
| 1.1.1 我国小麦生产情况概述 |
| 1.1.2 安徽省小麦生产情况概述 |
| 1.1.3 沿淮淮北小麦产业发展情况概述 |
| 1.2 小麦赤霉病简介 |
| 1.2.1 小麦赤霉病菌 |
| 1.2.2 小麦赤霉病发病症状 |
| 1.2.3 小麦赤霉病毒素检测研究现状 |
| 1.2.4 小麦赤霉病为害现状 |
| 1.3 影响小麦赤霉病发生及流行的主要因素 |
| 1.3.1 气象条件 |
| 1.3.2 菌源数量 |
| 1.3.3 小麦品种 |
| 1.4 小麦赤霉病综合防治技术 |
| 1.4.1 监测预警 |
| 1.4.2 农业防治 |
| 1.4.3 化学防治 |
| 2 引言 |
| 2.1 研究背景及意义 |
| 2.2 研究内容 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 小麦赤霉病为害情况调查方法 |
| 3.1.1 调查地点概况 |
| 3.1.2 小麦赤霉病发生情况调查方法 |
| 3.2 主栽小麦品种赤霉病抗性评价方法 |
| 3.3 小麦赤霉病抗药性评价方法 |
| 3.4 不同杀菌剂及施药器械防治小麦赤霉病田间药效试验 |
| 3.4.1 不同杀菌剂防治小麦赤霉病田间药效试验 |
| 3.4.2 不同施药器械防治小麦赤霉病田间药效试验 |
| 3.4.3 小麦赤霉病防治效果计算方法 |
| 3.5 小麦籽粒真菌毒素污染评价方法 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 霍邱县等6个县小麦赤霉病为害概况 |
| 4.2 影响小麦赤霉病发生的因素 |
| 4.2.1 气象条件 |
| 4.2.2 主栽小麦品种抗性 |
| 4.2.3 小麦赤霉病菌抗药性 |
| 4.3 不同杀菌剂对小麦赤霉病防治效果的影响 |
| 4.4 不同杀菌剂对控制真菌毒素污染的影响 |
| 4.4.1 真菌毒素检测方法的确证 |
| 4.4.2 小麦籽粒中真菌毒素含量 |
| 4.5 不同施药器械对小麦赤霉病防治效果的影响 |
| 4.6 安徽省沿淮淮北小麦赤霉病综合防治技术方案 |
| 4.6.1 监测预警 |
| 4.6.2 农业防治 |
| 4.6.3 化学防治 |
| 5 讨论 |
| 5.1 安徽省沿淮淮北小麦赤霉病发生趋势及影响因素 |
| 5.1.1 气象条件 |
| 5.1.2 小麦品种抗性 |
| 5.1.3 小麦赤霉病菌抗药性 |
| 5.2 不同杀菌剂对小麦赤霉病防治效果的影响 |
| 5.3 不同施药器械对小麦赤霉病防治效果的影响 |
| 6 结论 |
| 6.1 安徽省沿淮淮北小麦赤霉病为害情况存在差异 |
| 6.2 不同杀菌剂和施药器械显着影响小麦赤霉病的防治效果 |
| 6.3 安徽省沿淮淮北小麦赤霉病综合防治技术方案 |
| 6.3.1 强化监测预警 |
| 6.3.2 坚持农业防治 |
| 6.3.3 开展科学化学防治 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）基于肠道菌群解析季也蒙毕赤酵母对红鱼干中AFB1与T-2毒素毒作用的干预效应（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语说明 |
| 1 绪论 |
| 1.1 鱼干中真菌毒素的污染现状 |
| 1.2 鱼干中AFB_1与T-2毒素的危害 |
| 1.2.1 AFB_1毒素毒性研究现状 |
| 1.2.2 T-2毒素毒性研究现状 |
| 1.3 真菌毒素对肠道菌群的影响 |
| 1.3.1 肠道菌群的重要性 |
| 1.3.2 真菌毒素对肠道菌群多样性与丰度的影响 |
| 1.3.3 伪无菌小鼠动物模型验证肠道菌群与真菌毒素毒性的相关性 |
| 1.4 酵母控制鱼干中菌毒素的研究现状 |
| 1.4.1 酵母脱除真菌毒素的研究现状 |
| 1.4.2 酵母的脱毒原理 |
| 1.5 本研究的立题依据、内容及意义 |
| 1.5.1 立题依据 |
| 1.5.2 研究内容及意义 |
| 1.6 研究技术路线 |
| 2 季也蒙毕赤酵母对红鱼干中AFB_1与T-2毒素的血液和肝毒性的干预作用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 仪器与材料 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 样品制备 |
| 2.3.2 分组和给药方式 |
| 2.3.3 小鼠外周血液指标测定 |
| 2.3.4 小鼠肝功能酶活的测定 |
| 2.3.5 数据处理与分析 |
| 2.4 结果分析 |
| 2.4.1 PG发酵液对饲喂AFB_1与T-2小鼠血液指标变化的影响 |
| 2.4.2 PG发酵液对饲喂AFB_1与T-2小鼠肝功能酶活的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 3 季也蒙毕赤酵母对红鱼干中AFB_1与T-2毒素诱导小鼠肠道菌群紊乱的干预作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 样品制备 |
| 3.3.2 分组和给药方式 |
| 3.3.3 小鼠肠道菌群基因组提取与测定 |
| 3.4 结果分析 |
| 3.4.1 PG发酵液对饲喂AFB_1与T-2毒素小鼠肠道菌群Alpha多样性影响 |
| 3.4.2 PG发酵液对饲喂AFB_1与T-2毒素小鼠肠道菌群Beta多样性影响 |
| 3.4.3 PG发酵液对饲喂AFB_1与T-2毒素小鼠肠道菌群组成的影响 |
| 3.4.4 肠道菌群和差异显着的血液、肝脏指标的相关性分析 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 基于伪无菌小鼠模型解析季也蒙毕赤酵母发酵液对红鱼干中AFB_1与T-2毒素毒性的干预作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 仪器与设备 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 伪无菌小鼠模型构建 |
| 4.3.2 样品制备 |
| 4.3.3 分组和给药方式 |
| 4.3.4 小鼠外周血液指标测定 |
| 4.3.5 小鼠肠道菌群基因组提取与测定 |
| 4.3.6 数据处理 |
| 4.4 结果分析 |
| 4.4.1 伪无菌小鼠模型的构建 |
| 4.4.2 PG发酵液对饲喂AFB_1与T-2毒素伪无菌小鼠血液指标干预作用 |
| 4.4.3 PG发酵液对饲喂AFB_1与T-2毒素小鼠肝功能酶活的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 5 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（9）新型SERS传感器制备及其在真菌毒素检测中的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 真菌毒素概述 |
| 1.1.1 黄曲霉毒素 |
| 1.1.2 赭曲霉毒素 |
| 1.1.3 玉米赤霉烯酮 |
| 1.1.4 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 |
| 1.2 真菌毒素的检测方法 |
| 1.2.1 色谱法 |
| 1.2.2 免疫分析法 |
| 1.2.3 适配体分析法 |
| 1.3 表面增强拉曼散射 |
| 1.3.1 表面增强拉曼散射概述 |
| 1.3.2 SERS增强机理 |
| 1.3.3 SERS基底 |
| 1.3.4 SERS在非标记检测中的应用 |
| 1.3.5 SERS在标记检测中的应用 |
| 1.4 课题研究思路和意义 |
| 第二章 3D仿花椰菜SERS基底的制备及其用于多种真菌毒素的同时检测 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验设备与材料 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 阳极氧化铝模板的制备 |
| 2.3.2 PDMS@AAO复合衬底的制备 |
| 2.3.3 3D仿花椰菜SERS基底的制备 |
| 2.3.4 拉曼光谱测试条件与数据分析 |
| 2.3.5 增强因子计算 |
| 2.3.6 真菌毒素的检测 |
| 2.3.7 加标回收试验与实际样品检测 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 阳极氧化铝模板的表征 |
| 2.4.2 3D仿花椰菜SERS基底的制备 |
| 2.4.3 3D仿花椰菜SERS基底的性能表征 |
| 2.4.4 真菌毒素的检测 |
| 2.4.5 实际样品中真菌毒素的检测 |
| 2.4.6 多组分真菌毒素的检测 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 DNA镊子驱动的SERS探针用于AFB_1的高灵敏检测 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验设备与材料 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 AgNPs的制备 |
| 3.3.2 AgNPs的修饰 |
| 3.3.3 DNA tweezers-Ag NPs探针的制备 |
| 3.3.4 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3.3.5 AFM测试条件 |
| 3.3.6 拉曼光谱测试条件与数据分析 |
| 3.3.7 分析增强因子计算 |
| 3.3.8 加标回收试验与实际样品检测 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 实验原理 |
| 3.4.2 Ag NPs与 Ag NPs-DNA-NTP的表征 |
| 3.4.3 可行性测试 |
| 3.4.4 条件优化 |
| 3.4.5 AFB_1检测 |
| 3.4.6 特异性检测 |
| 3.4.7 实际样品检测 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 CHA信号放大与磁性纳米线结合SERS传感器用于多组分真菌毒素的同时检测 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验设备与材料 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.3 实验设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 磁珠的制备 |
| 4.3.2 磁性纳米线的制备 |
| 4.3.3 磁性纳米线的修饰 |
| 4.3.4 Au@probe@Ag NPs的制备 |
| 4.3.5 Au@probe@Ag NPs的修饰 |
| 4.3.6 非变性凝胶电泳 |
| 4.3.7 拉曼光谱测试条件与数据分析 |
| 4.3.8 分析增强因子计算 |
| 4.3.9 加标回收试验与实际样品检测 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 MBs与 Au@MBCs的表征 |
| 4.4.2 Ag@Au NPs的优化与表征 |
| 4.4.3 拉曼信号分子的选择 |
| 4.4.4 可行性测试 |
| 4.4.5 实验条件优化 |
| 4.4.6 真菌毒素的检测 |
| 4.4.7 特异性检测 |
| 4.4.8 实际样品检测 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 全文总结及展望 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（10）真菌毒素玉米赤霉烯酮降解酶基因资源挖掘及其催化效率分子改良研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 玉米赤霉烯酮概述 |
| 1.1.1 玉米赤霉烯酮的结构和性质 |
| 1.1.2 玉米赤霉烯酮的危害 |
| 1.2 ZEN的检测方法 |
| 1.2.1 酶联免疫吸附法(ELISA法) |
| 1.2.2 气相色谱法(GC法) |
| 1.2.3 高效液相色谱法(HPLC法) |
| 1.2.4 高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS法) |
| 1.3 ZEN降解酶及其研究进展 |
| 1.3.1 ZEN的脱毒方法 |
| 1.3.2 ZEN降解酶研究进展 |
| 1.4 本研究的目的与意义 |
| 第二章 玉米赤霉烯酮内酯水解酶的基因资源挖掘 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株及质粒 |
| 2.1.2 培养基及试剂的配制 |
| 2.1.3 试剂及试剂盒 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 基因合成及核酸测序 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 玉米赤霉烯酮内酯水解酶ZHD101的序列比对 |
| 2.2.2 筛选基因的合成 |
| 2.2.3 基因的转化与表达 |
| 2.2.4 重组蛋白降解率的测定 |
| 2.3 实验结果与分析 |
| 2.3.1 ZHD101的序列比对 |
| 2.3.2 筛选基因的基本信息 |
| 2.3.3 潜在玉米赤霉烯酮内酯水解酶的活性评估 |
| 2.3.4 ZHD607和ZHD572 的表达 |
| 2.3.5 ZHD607和ZHD572 的活性分析 |
| 2.4 讨论 |
| 本章小结 |
| 第三章 内酯水解酶ZHD607催化效率的分子改良研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验菌株与质粒 |
| 3.1.2 培养基及化学试剂的配制 |
| 3.1.3 试剂及试剂盒 |
| 3.1.4 实验仪器 |
| 3.1.5 引物合成及测序 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 序列比对与同源建模 |
| 3.2.2 重组酶ZHD607的纯化 |
| 3.2.3 HPLC检测ZEN浓度 |
| 3.2.4 ZHD607的酶学性质测定 |
| 3.2.5 ZHD607的定点突变 |
| 3.2.6 分子动力学模拟 |
| 3.3 实验结果与分析 |
| 3.3.1 基因克隆与序列分析 |
| 3.3.2 重组蛋白ZHD607的表达与纯化 |
| 3.3.3 ZHD607的生化特性 |
| 3.3.4 突变体的理性设计与活性检测 |
| 3.3.5 酶-底物复合物模型的构建与分析 |
| 3.3.6 分子动力学模拟分析 |
| 3.4 讨论 |
| 本章小结 |
| 第四章 基于融合表达策略提高内酯水解酶ZHD101的催化活性研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 菌株及质粒 |
| 4.1.2 培养基与试剂的配制 |
| 4.1.3 试剂及试剂盒 |
| 4.1.4 实验仪器 |
| 4.1.5 引物合成及测序 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 引物设计 |
| 4.2.2 重组基因的获得与载体的构建 |
| 4.2.3 重组蛋白ZHD101 与融合蛋白ZHD101+XYNB及的表达与纯化 |
| 4.2.4 内酯水解酶酶ZHD101的活性测定 |
| 4.2.5 木聚糖酶XYNB及A11的活性测定 |
| 4.2.6 ZHD101 与融合蛋白XYNB+ZHD101 催化ZEN时最适温度和pH的测定 |
| 4.2.7 ZHD101 与融合蛋白XYNB+ZHD101 催化ZEN时的pH稳定性 |
| 4.2.8 重组菌株的qPCR检测 |
| 4.3 实验结果与分析 |
| 4.3.1 XYNB和A11的序列分析 |
| 4.3.2 ZHD101与融合蛋白重组质粒的构建与表达 |
| 4.3.3 ZHD101 与融合蛋白XYNB+ZHD101及A11+ZHD101 的活性比较 |
| 4.3.4 ZHD101 与融合蛋白XYNB+ZHD101 的表达 |
| 4.3.5 ZHD101与XYNB+ZHD101 重组菌株的目的基因拷贝数检测 |
| 4.3.6 ZHD101 与融合蛋白XYNB+ZHD101 的纯化 |
| 4.3.7 ZHD101 与融合蛋白XYNB+ZHD101 的酶学性质比较 |
| 4.3.8 融合蛋白XYNB+ZHD101 的两种酶催化活性的线性化关系 |
| 4.4 讨论 |
| 本章小结 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
四、真菌毒素及真菌毒素检测试剂盒产业化开发（论文参考文献）
- [1]仓储小麦和稻谷中主要真菌毒素污染水平及快速识别技术研究[D]. 温晓燕. 上海海洋大学, 2021(01)
- [2]氯霉素和真菌毒素适配体—靶标结合机制及检测应用研究[D]. 马鹏飞. 江南大学, 2021(01)
- [3]臭氧对甜瓜白霉病病原菌Fusarium sulphureum的生长抑制及机理研究[D]. 张蕊. 甘肃农业大学, 2021(09)
- [4]淡豆豉炮制中黄曲霉毒素B1的产毒菌和拮抗菌[D]. 李春玲. 江西中医药大学, 2021(01)
- [5]基于电子鼻和HS-GC-IMS技术在几种农产品受真菌污染检测中的研究[D]. 顾双. 浙江大学, 2021(01)
- [6]基于四种信号传导体系的快速检测新方法学研究[D]. 熊颖. 南昌大学, 2020(02)
- [7]安徽省沿淮淮北小麦赤霉病发生规律及综合防治技术研究[D]. 丰越. 安徽农业大学, 2020(04)
- [8]基于肠道菌群解析季也蒙毕赤酵母对红鱼干中AFB1与T-2毒素毒作用的干预效应[D]. 叶林. 广东海洋大学, 2020(02)
- [9]新型SERS传感器制备及其在真菌毒素检测中的应用研究[D]. 李晋杰. 华中农业大学, 2020(01)
- [10]真菌毒素玉米赤霉烯酮降解酶基因资源挖掘及其催化效率分子改良研究[D]. 于心蕊. 中国农业科学院, 2020(01)